多重耐药菌监测状况和替加环素药敏操作共识解读-ppt课件

1、1王 辉北京大学人民医院检验科：whuibj163多重耐药菌监测情况和替加环素多重耐药菌监测情况和替加环素药敏操作共识解读药敏操作共识解读内内 容容v为何要出共识？为何要出共识？v耐药监测数据分享耐药监测数据分享v药敏实验难点药敏实验难点v难在：难在：CLSI没有规范；药物的稳定性没有规范；药物的稳定性v共识内容解读共识内容解读v替加环素对替加环素对MDRO的抗菌活性的抗菌活性v不同感染类型、多重耐药菌不同感染类型、多重耐药菌NEJM 2021，Jan 29不同感染类型病原谱不同感染类型病原谱BSI(n=784)HAP(n=652)IAI(n=667)菌名菌名数目构成比数目构成比数目构成比大肠

2、埃希菌大肠埃希菌24331.0%528.0%22934.30%肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌11614.8%10716.4%649.60%金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌8310.6%9114.0%304.50%鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌8110.3%15824.2%446.60%凝固酶阴性葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌597.5%00.0%142.10%铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌516.5%15023.0%639.40%屎肠球菌屎肠球菌435.5%00.0%8913.30%阴沟肠杆菌阴沟肠杆菌344.3%375.7%233.40%粪肠球菌粪肠球菌232.9%00.0%426.30%嗜麦芽窄食单胞菌嗜麦芽窄食单

3、胞菌111.4%324.9%152.20%产酸克雷伯菌产酸克雷伯菌91.1%30.5%81.20%产气肠杆菌产气肠杆菌81.0%40.6%152.20%粘质沙雷菌粘质沙雷菌81.0%40.6%10.10%摩根摩根菌摩根摩根菌50.6%10.2%40.60%弗劳地枸橼酸杆菌弗劳地枸橼酸杆菌30.4%00.0%60.90%奇异变形杆菌奇异变形杆菌30.4%40.6%60.90%洋葱伯克霍尔德菌洋葱伯克霍尔德菌30.4%40.6%10.10%鹑鸡肠球菌鹑鸡肠球菌00.0%00.0%81.20%其他其他10.1%50.8%50.70%BSI中病原菌分别情况中病原菌分别情况2019 2021 2019H

4、AP中病原菌分别情况中病原菌分别情况2019 2021 2019IAI中病原菌分别情况中病原菌分别情况2019 2021 2019第一位第一位第二位第二位第三位第三位BSI大肠埃希菌（31.0%, 243/784）肺炎克雷伯菌（14.8%, 116/784）金黄色葡萄球菌（10.6%, 83/784）HAP鲍曼不动杆菌（24.2%, 158/652）铜绿假单胞菌（23.0%, 150/652）肺炎克雷伯菌（16.4%, 107/652）IAI大肠埃希菌（34.3%, 229/667）屎肠球菌（13.3%, 89/667）肺炎克雷伯菌（9.6%, 64/667）中国中国ESBLESBL的发生率的

5、发生率 % Wang H, Chen M. Diagnos Microbiol Infect Dis, 2019, 51, 201-208 CMSS/SEANIR/CARES. year目前，目前，ECO ESBL的发生率高于的发生率高于KPN.不同感染类型多重耐药细菌的发生率不同感染类型多重耐药细菌的发生率不同感染类型多重耐药细菌的发生率不同感染类型多重耐药细菌的发生率CMSSCMSS监测：中国监测：中国ESBLESBL的发生率的发生率 % Wang H, Chen M. Diagnos Microbiol Infect Dis, 2019, 51, 201-208 CMSS/SEANIR/

6、CARES. year目前，ECO ESBL的发生率高于KPN.中国中国13家教学医院大肠杆菌的敏感性变化家教学医院大肠杆菌的敏感性变化CMSS中国中国13家教学医院克雷伯菌的敏感性变化家教学医院克雷伯菌的敏感性变化CMSS王启，王辉，等，2019，中华医学杂志ESBL/AmpC+ 孔通道缺失孔通道缺失产产IMP4/8菌株菌株 产产KPC-2菌株菌株碳青霉烯耐药肠杆菌科地域分布碳青霉烯耐药肠杆菌科地域分布Yang Q, Wang H, et al. Antimicrob Agents Chemother. 2019, 573-577不产碳青霉烯酶菌株 产IMP4/8菌株 产KPC-2菌株产和不

7、产碳青霉烯酶菌株的地域分产和不产碳青霉烯酶菌株的地域分(2021-2019) 不同医院间发消费不同医院间发消费KPCKPC、IMPIMP菌株的克隆传播，菌株的克隆传播， 这些克隆和国际高危险克隆相关这些克隆和国际高危险克隆相关福州杭州杭州南京深圳北京四家医院、广东、北京四家医院、广东、江苏、浙江同为江苏、浙江同为A克隆克隆属于国际高风险克隆属于国际高风险克隆CRE: 为何重要？不是普通的多重耐药菌v肠杆菌科：人类胃肠道、各类感染重要病原菌v所致感染病死率高 (50% 以上)v意味着泛耐药，治疗方案有限；v仅剩替加环素、粘菌素可用v耐药基因在不同种的肠杆菌科菌间穿越v位于质粒上 v肠杆菌科有70

8、个种v耐药转移速度快：从院内到社区搜集了2019-2019年间从全国十三家教学医院分别的228株碳青霉烯不敏感的肠杆菌，其中65株产碳青霉烯酶。包括41株产KPC-2，22株产IMP-4，各有1株产IMP-8和IMP-1。aKPN: Klebsiella pneumoniae; ECL: Enterobacter cloacae; EAE: Enterobacter aerogenes; CFR: Citrobacter freundii; ECO: Escherichia coli.KPC-2-producing K. pneumoniae: SHV-11/CMY-2 (N=6), SHV-

9、11/CTX-M-14 (N=5), TEM-1/SHV-12 (N=4) and TEM-1/SHV-12/CTX-M-14 (N=4). IMP-4-producing E. coli: TEM-1/CTX-M-14 (N=5).Henan Li; et al. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 2019.Patient IDAge (years) / genderWardClinical diagnosissourceComplications related to infectionsA n t i b i o t i cb

10、 before KPC-2-KPN isolationLOSc/in-h o s p i t a l mortalityMLST a n a l y s i s / PFGE analysisHK1253/MNeurosurgeryClosed craniocerebral injurysputumRespiratory failureM E M , C S L , VAN376/YESST11/ A1HK181/MICUCOPDasputumRespiratory failureMEM, CSL63/NOST11/ A1HK1884/MRespiratoryRespiratory failu

11、reurineU r i n a r y t r a c t infection-135/NOST11/ A1HK986/MRespiratoryP u l m o n a r y encephalopathysputumRespiratory failureMEM, LEV135/NOST11/ A1HK496/FRespiratoryChronic bronchitis with infectionsputumP u l m o n a r y infectionMEM, CAZ44/YESST11/ A1HK579/FNeurosurgerySpontaneous cerebral he

12、morrhagesputumRespiratory failureCefminox9/NOST11/ A1HK1370/FICUAcutecerebral infarctionsputumRespiratory failureM E M , C S L , LZD, VAN77/NOST11/ A1HK786/MRespiratoryCOPDsputumP u l m o n a r y infectionMEM9/NOST11/ A1HK1429/MICUCervical cord injuriessputumRespiratory failureMEM, CSL35/YESST11/ A1

13、HK1679/FICUClosed chest injurysputumRespiratory failureMEM, LEV, CSL, VAN25/YESST11/ A1HK1566/FICUAcute cerebral infarctionsputumRespiratory failureMEM21/YESST11/ A1HK662/MRespiratoryCOPDsputumRespiratory failureMEM, LZD8/YESST11/ A1XiaojuanWang,etal.MicrobialDrugResistance.2019XiaojuanWang,etal.Mic

14、robialDrugResistance.2019，online中国中国13家教学医院鲍曼不动杆菌的敏感性变化家教学医院鲍曼不动杆菌的敏感性变化CMSS鲍曼不动杆菌耐药性比较鲍曼不动杆菌耐药性比较2019: n=2392021: n=3432019: n=2832019 2021 2019综合防控CRAB20192019预警与隔离反复筛查与稳定综合措施替加环素检测问题替加环素检测问题v CLSI无断定规范v 替加环素理化性质活泼，含多酚基团，易氧化降解，或构成差向异构体，不宜在光线及空气中久置。v 隔夜存放也会使检测结果升高，其中肉汤较琼脂更容易溶解氧。内内 容容v为何要出共识？为何要出共识？

15、v耐药监测数据分享耐药监测数据分享v药敏实验难点药敏实验难点v难在：难在：CLSI没有规范；药物的稳定性没有规范；药物的稳定性v共识内容解读共识内容解读v替加环素对替加环素对MDRO的抗菌活性的抗菌活性v不同感染类型、多重耐药菌不同感染类型、多重耐药菌共识内容v药物特性v培育基的选择与制备v检测方法对结果的影响v结果判读替加环素药敏操作难点替加环素药敏操作难点替加环素的保管替加环素的保管v避光、枯燥v日常运用替加环素纸片储存在8环境下，规范粉储存在 -20冰箱内v长期不运用的纸片和规范粉应密封、避光冻存于-80冰箱内尽量选择所需用量的药物包装，防止反复冻融，药物包括纸片和规范粉变色后不可运用替

16、加环素药液配制本卷须知替加环素药液配制本卷须知v配制过程需严厉避光，尽量缩短配制时间v配制好的母液尽量一次性用完，未运用完的母液需分装、密封、避光冻存于-80冰箱内冷冻变色后不可再用，不可反复冻融。替加环素药敏操作难点替加环素药敏操作难点培育基中微量元素检测培育基中微量元素检测v国内常用的BBL培育基和Oxoid培育基干粉中锰、镁、锌元素的含量分别为：0.66ppm/0.35ppm，450ppm/330ppm，21ppm/15ppma 。v国外报道bva 张冀霞,王辉,等.替加环素对鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌体外抗菌活性检测的影响要素和方法学评价.中华检验杂志.2019,36:vb Ferna

17、ndez-Mazarrasa C, Mazarrasa O, Calvo J, et al. High concentrations of manganese in Mueller-Hinton agar increase MICs of tigecycline determined by Etest. J. Clin Microbiol. 2021,47:827829. 培育基品牌和批号对检测结果的影响培育基品牌和批号对检测结果的影响 国内常用的BBL和Oxoid的M-H培育基检测鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌品牌和批号对一切检测菌株的根本一致率和分类一致率均为100%。替加环素理化性质活泼，必

18、需运用当天新颖配制的培育基。u培育基存放温度及存放时间不同培育基存放温度及存放时间不同l 存放时间过长对肉汤稀释法测定结果影响较大存放时间过长对肉汤稀释法测定结果影响较大l 肉汤培育基中氧含量较高，存放时间过长会由于氧化作用而使替加环素肉汤培育基中氧含量较高，存放时间过长会由于氧化作用而使替加环素失活失活l 琼脂培育基在存放时会凝固，用前要煮沸融化，相对含氧量较低琼脂培育基在存放时会凝固，用前要煮沸融化，相对含氧量较低培育基隔夜存放对检测结果的影响培育基隔夜存放对检测结果的影响 张冀霞,王辉,等.替加环素对鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌体外抗菌活性检测的影响要素和方法学评价.中华检验杂志.2019

19、,36:替加环素药敏操作难点替加环素药敏操作难点培育基、测定方法对测定结果的影响培育基、测定方法对测定结果的影响CohenStuartJ,etal.AAC.2019Jun;54(6):2746-7.BD培育基：培育基：Etest 微量肉汤稀释法；微量肉汤稀释法；微量肉汤稀释法：微量肉汤稀释法：oxoid的的ISO BD的的MHComparative evaluation of tigecycline susceptibility testing methods for expanded-spectrum cephalosporin- and carbapenem-resistant gram-

20、negative pathogens.J Clin Microbiol. 2019;50(11):3747-50评价评价Vitek2, Etest, and MIC Test Strip (MTS) methods 241 头孢头孢/carbapenem-resistant Enterobacteriaceae and Acinetobacter baumannii broth microdilution (BMD) as the reference method. BMD, 1/4 g/ml; Vitek2, 4/8 g/ml; Etest, 2/4 g/ml; MTS, 0.5/2 g/m

21、l. Vitek2 produced 9.1/21.2% major errors, Etest produced 0.4/0.8% major errors, and MTS produced no major errors but 0.4/3.3% very major errors (FDA/EUCAST breakpoints). Vitek2 tigecycline results require confirmation by BMD or Etest for multidrug-resistant pathogens琼脂稀释法检测琼脂稀释法检测MICMIC与肉汤稀释法检与肉汤稀释

22、法检测测MICMIC结果差别倍数的菌株数量分布结果差别倍数的菌株数量分布MICMIC（MHAMHA）/MIC/MIC（MHBMHB）（稀释倍数）（稀释倍数）AbaAba（株）（株）IMP-resistant IMP-resistant EnterobacterieacaeEnterobacterieacae（株）（株）8 81 10 04 422228 82 212312367671 1232324240.50.51 13 3不同方法检测替加环素的体外药敏结果不同方法检测替加环素的体外药敏结果 株（株（%）检测方法检测方法菌株数量菌株数量敏感敏感中介中介耐药耐药MIC (mg/L)（株）（株）

23、FDAEUCASTFDAEUCASTFDAEUCASTMIC 50MIC 90肉汤稀释法 鲍曼不动杆菌5643(76.8)15(26.8)11(19.6)28(50.0)2(3.6) 13(23.2)24肺炎克雷伯菌4745(95.7)41(87.2)2(4.3)4(8.5)0(0)2(4.3)12琼脂稀释法鲍曼不动杆菌5635(62.5)13(23.2)18(32.1)22(39.3)3(5.4)21(37.5)24肺炎克雷伯菌4744(93.6)35(74.5)2(4.3)9(19.1)1(2.1)3(6.4)12MTS鲍曼不动杆菌5645(80.4)15(26.8)9(16.1)30(5

24、3.6)2(3.6)11(19.6)23肺炎克雷伯菌4745(95.7)34(73.2)1(2.1)11(23.4)1(2.1)2(4.3)12Vitek （GN16板）鲍曼不动杆菌5633(58.9)14(25.0)19(33.9)19(33.9)4(7.1)23(41.1)24肺炎克雷伯菌4732(68.1)12(25.5)8(17.0)20(42.6)7(14.9)15(31.9)28 Olympia Zarkotou, Spyros Pournaras, George Altouvas, et al. Comparative Evaluation of Tigecycline Susc

25、eptibility Testing Methods for Expanded-Spectrum Cephalosporin- and Carbapenem-Resistant Gram-Negative Pathogens. J. Clin. Microbiol. 2019, 50(11):3747-50检测方法和菌株检测方法和菌株EA菌株数（菌株数（%）FDAEUCAST CAVMEMEmECAVMEMEmE琼脂稀释法鲍曼不动杆菌55(98.2)35(62.5)-21(37.5)33(58.9)1(1.8)-22(39.3)肺炎克雷伯菌47(100.0)45(95.7)-2(4.3)40(

26、85.1)-7(14.9)MTS鲍曼不动杆菌55(98.2)44(78.4)-12(21.4)41(73.2)-1(1.8)14(25.0)肺炎克雷伯菌46(97.9)46(97.9)-1(2.1)40(85.1)-7(14.9)Vitek （GN16）鲍曼不动杆菌53(94.6)34(60.7)-22(39.3)33(58.9)-23(41.1)肺炎克雷伯菌26(55.3)32(68.1)-5(10.6)10(21.3)14(29.8)9(19.1)-24(51.1)不同方法与肉汤稀释法比较误差发情况不同方法与肉汤稀释法比较误差发情况 肉汤稀释法及结果判度肉汤稀释法及结果判度MIC Test

27、 strip 操作方法v将试剂条从冰箱中取出，平衡温度1h；v取45个形状一样的菌落，在相应的培育基中配成0.5麦氏浓度的菌悬液；v用无菌拭子将菌液在MH琼脂上涂抹均匀；v将测试条标有字和刻度的一面向上，贴于涂有菌液的琼脂上；v一旦贴好测试条后，不要挪动MIC测试条测试条MIC test strip，MTS纸片分散法：Basic principles still important.纸片扩散法检测替加环素的体外药敏结果纸片扩散法检测替加环素的体外药敏结果 株（株（%）检测方法检测方法菌株数量（株）菌株数量（株）敏感敏感中介中介耐药耐药敏感16mm，耐药12mm鲍曼不动杆菌5634(60.7)1

28、5(26.8)7(12.5)肺炎克雷伯菌4741(87.2)4(8.5)2(4.3)敏感19mm，耐药14mm鲍曼不动杆菌5613(23.2)29(51.8)14(25.0)肺炎克雷伯菌4711(23.4)32(68.1)4(8.5)敏感14mm，耐药10mm鲍曼不动杆菌5646(82.1)8(14.3)2(3.6)肺炎克雷伯菌4744(93.6)2(4.3)1(2.1)检测方法和菌株检测方法和菌株EA菌株数（菌株数（%）FDAEUCAST CAVMEMEmECAVMEMEmE纸片扩散法(敏感16mm，耐药12mm)鲍曼不动杆菌-31(55.4)-3(5.4)22(39.3)30(53.6)7

29、(12.5)-19(33.9)肺炎克雷伯菌-41(87.2)-6(12.8)43(95.1)-4(8.5)纸片扩散法(敏感19mm，耐药14mm)鲍曼不动杆菌-24(42.9)-10(17.9)22(39.3)30(53.6)-1(1.8)25(44.6)肺炎克雷伯菌-11(23.4)-2(4.3)34(72.3)16(34.0)-1(2.1)30(63.8)纸片扩散法(敏感14mm，耐药10mm)鲍曼不动杆菌-37(66.1）-19(33.9)21(37.5)9(16.1)-26(46.4)肺炎克雷伯菌-45(95.7)-2(4.3)43(91.5)-4(8.5)纸片分散法与肉汤稀释法比较误

30、差发情况纸片分散法与肉汤稀释法比较误差发情况 替加环素药敏操作难点替加环素药敏操作难点折点判读规范折点判读规范v CLSI目前无替加环素对的折点目前无替加环素对的折点v我国微生物实验室目前参照美国我国微生物实验室目前参照美国FDA指定的折点判读规范。指定的折点判读规范。替加环素的断定折点替加环素的断定折点MIC(g/mL)抑菌圈直径抑菌圈直径(mm)菌种菌种SIRSIR葡萄球菌葡萄球菌10.50.52-4-1919NA15-1815-18NA1414NA肺炎链球菌肺炎链球菌0.50.250.25-0.5-0.51919NA-NA-NA肠球菌肠球菌0.50.250.251-0.52-0.5191

31、9NA15-1815-18NA1414NA肠杆菌科肠杆菌科2214428841919NA15-1815-18NA1414NA厌氧菌厌氧菌44NA8-168NA3216NANANANANANANANANANALAUS/APEUCASTLAUS/APEUCASTLAUS/APEUCASTLAUS/APEUCASTLAUS/APEUCAST替加环素药敏操作难点替加环素药敏操作难点纸片分散法：Basic principles still important.纸片分散法纸片分散法 无论何种检测方法，只需当质控菌株对的药敏结果在可接受的质控范围内时，待测菌株的检测结果才有效。结果判读本卷须知结果判读本卷须知替加环素体外药敏检测结果的影响要素替加环素体外药敏检测结果的影响要素和引荐对策和引荐对策v药物本身的稳定性v培育基的选择、配制时间、v检测方法、v菌种类型以及判读折点。