DNARNA含量测定方法

1、使用法玛西亚公司的DNA/RNA浓度测定仪，测定样品A260和A280值。根 据A260/ A280比值，估测RNA质量。一般A260/A280比值在1.82.0之间，可以满足实验要求。在lOOpIRNA原液中取gl稀释至250山 (DEPC处理的水),测定样品的A260和A280的值,按下列公式计算其浓度：RNA原液浓度=A260x稀释倍数x40 (ng/pl)测定RNA浓度按以下步骤进行操作：取li RNA原液，放在0.5ml EP管中，加入2491 dd H2O,用移液枪反复混匀。用ddH20为空白对照，调节A260零点。倒掉比色杯中的水，加入稀释并混合均匀的RNA样液，测定A260值。

2、 倒掉比色杯中的RNA样液，用ddH20冲洗比色杯，再调节A280零点。倒掉比色杯中的水，加入稀释并混合均匀的RNA样液，测定A280值。 计算A260/ A280比值，比值n18,满足实验要求。(S)RNA原液浓度=A260x稀释倍数x40 (ng/pl)DNA及RNA含量测定方法发布日期：2008-08-11生技网信息中心浏览次数：592一、光密度测定法原理DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰， 利用这个原理我们测其0D260,再推算出其浓度。一、光密度测定法源理DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰，利用这个原理我们测其0D260,再推算出其浓度。仪器分光光度计(紫外可见光

3、两用)。试剂水，DNA或RNA溶液。操作取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到ImL(2) 用Iml水做空白。(3) 把样品杯放在分光光度计比色槽上。每ul中DNA或RNA浓度(ug)将是OD值的10倍，例如稀释后样品在 260nm处OD值为0.2,则原DNA或RNA样品浓度为2ug/uL(5) 如果想要检测样品的纯度，那么还要再测一次280nm处OD值，计算二 者的比率，若比率接近2,则说明样品中核酸比较纯。若比率小于1.6,则说明蛋白或其它吸收此波长的杂质在其中，建议再用酚/氯仿抽提 继以乙醇沉淀以除去杂质。(6) 如果想检测样品中是否残存酚等有机杂质，那么还要测定一次230nm处 0

4、D值。二、琼脂糖电泳测量法源理1/4质粒DNA及微量DNA片段的浓度可与已知浓度的DNA同时进行电泳，根 据结合的澳化乙锭荧光强度，估计其含量。仪器紫外透射反射分析仪(上海康华生化仪器制造厂)；电泳槽；电泳梳；电泳 仪。试剂6x上样缓冲液：0.25%漠酚蓝；40%(W/V)糖。lOxTBE电泳缓冲液：089mol/LTris 硼酸;0.02mol / LEDTANa2pH8.3o0.8%琼脂糖：0.8%琼脂糖;100mi lxTBE5mg / mlEB：0.5gEB； 100ml 三蒸水操作用lxTBE电泳缓冲液0.8%琼脂糖凝胶，加澳化乙锭其终浓度为0.5ug / mlo(2)加热使琼脂糖熔化均匀，取出室温冷却至50-60Co(3)取一块5x7cm玻璃板，置水平台上，放一微型点样梳，点样梳底部离玻 璃平板的距离为l.Ommo将凝胶小心倒在玻璃板上，待冷却后取出点样梳，保持点样孔的完好。(5)取DNA样品及),DNA标准浓度各lul加入lxTBE4ul,加入6x上样缓冲液 lul,混匀。在0.8%琼脂糖凝胶点样孔小心点样，记录样品点样次数与点样量。(7) 打开电源开关,电压不超过5V/cm, 一般40V, 30-40分钟。(8) 取出泳动后的凝胶板，翻转玻璃盖在紫外分析仪