肝硬化患者胃粘膜诱导型一氧化氮合酶定位、定量研究

1、    肝硬化患者胃粘膜诱导型一氧化氮合酶定位、定量研究        应用免疫组织化学SP方法研究肝硬化患者胃粘膜诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达，探讨一氧化氮(NO)在肝硬化胃粘膜病变(GML)中的作用。 对象与方法一、研究对象乙型肝炎后肝硬化患者45例，男女比为81，平均年龄52.8岁(范围2164岁)；肝硬化按Child-pugh评分：A级15例，B级12例，C级18例。对照组19例：轻型慢性乙型肝炎(CPH)13例，急性甲型肝炎(AH)6例(1995年全国病毒性

2、肝炎会议诊断标准)；男女比为154，平均年龄43.5岁(范围2461岁)。根据内镜诊断有无GML分5组：(一)肝硬化伴门脉高压性胃病(PHG)组：20例；PHG内镜诊断参考Sarin1标准：胃粘膜mosaic样变伴红晕；散在或弥漫性红斑呈“麻疹或猩红热样”改变；胃粘膜呈“樱桃色”红斑。(二)肝硬化合并十二指肠溃疡(HPU)组：14例；内镜下溃疡分期为A1H2。(三)肝硬化无GML(LC-N)组：11例；内镜下表现为轻度慢性胃炎。(四)十二指肠溃疡病(Non-HPU)组：11例(CPH8例，AH3例)；溃疡分期为A1H2。(五)无GML(正常)组：8例(CPH 5例，AH 3例)；内镜诊断为轻度

3、慢性胃炎。二、方法GIF-XQ30型内镜下于胃窦前壁距幽门口23cm取胃粘膜3块，Bouin液固定24小时，常规酒精梯度脱水；石蜡包埋、切片5m，常规HE染色；免疫组化SP法步骤：脱蜡3%H2O2室温30分钟10%羊血清封闭160抗iNOS多抗(Santa Cruz)4°C过夜SP试剂盒染色(北京中山公司提供，按说明书操作)；MPV型显微分光光度计测定iNOS表达阳性组织、细胞的光密度值，放大倍数400×，每例随机测定10个区域数。统计学处理方法：光密度值用±s表示,Systat统计软件秩和检验。结果肝硬化患者胃粘膜上皮细胞、腺细胞、血管均有iNOS阳性表达，但其

4、表达强弱不一致，见表1。PHG组及HPU组血管iNOS表达均较正常组及LC-N组增加(P<0.001)，胃粘膜上皮细胞、腺细胞iNOS表达均较正常组减少(P<0.001)；HPU组胃粘膜血管iNOS表达较非HPU患者增加(P<0.001)。肝硬化患者Child分级与胃粘膜iNOS表达见表2：Child C级患者胃粘膜血管iNOS较Child A级明显增加(P<0.001)，但胃粘膜上皮细胞、腺细胞iNOS减少与肝硬化Child分级无明显关系(P>0.05)。表1各组患者胃粘膜iNOS表达定量测定结果组别病例数测定区域数血管腺细胞上皮细胞PHG组202000.21&

5、#177;0.10*?0.15±0.110.18±0.08?HPU组141400.23±0.12*?0.16±0.080.16±0.04?LC-N组111100.17±0.080.16±0.040.18±0.09非HPU组111100.17±0.090.15±0.09?0.18±0.09?正常组8800.16±0.070.19±0.080.54±0.45注：*与LC-N比较，与非HPU比较，与正常组比较，P<0.001表2胃粘膜iNOS表达与肝硬化C

6、hild分级关系分组例数测定区域数血管腺细胞上皮细胞肝硬化Child分级A151500.16±0.06*0.12±0.050.17±0.05B121200.19±0.080.15±0.060.18±0.09C181800.21±0.08?0.13±0.05?0.18±0.05?对照组191900.16±0.090.17±0.050.51±0.45注：与对照组比较P<0.001,*组内比较P<0.001讨论新近发现，NO与肝硬化患者PHG、GML及消化性溃疡的发生有

7、关2。El-Newihi等3研究也发现，肝硬化PHG患者胃粘膜cNOS/iNOS活性明显高于无肝病对照者，并且血清NO?-?2/NO?-?3水平也明显增高；提示NO在肝硬化PHG、GML中具有重要作用。本研究发现：肝硬化患者胃粘膜上皮细胞、腺细胞、血管均有iNOS阳性表达；PHG与HPU患者胃粘膜血管iNOS表达明显增加。因此认为，肝硬化患者胃粘膜血管iNOS过度表达导致局部NO合成增加，NO引起局部血管扩张与PHG及HPU发生有密切关系，与Ohta2的观点基本一致。同时还发现：HPU患者胃粘膜血管iNOS表达较非HPU患者增加，但胃粘膜上皮细胞、腺细胞iNOS表达无明显差异，提示HPU发生机

8、制可能不同于普通消化性溃疡；肝硬化患者胃粘膜上皮细胞iNOS表达降低，导致局部NO合成减少，可能与胃粘膜上皮细胞对其它损伤因素防御功能减弱有关2，提示NO在肝硬化GML中具有粘膜保护与细胞损伤双重作用。本研究还发现：肝硬化Child C级患者胃粘膜血管iNOS表达明显增加，但胃粘膜上皮细胞、腺细胞iNOS表达减少与Child分级无明显关系。因此认为，肝脏严重病变是胃粘膜血管iNOS表达增加的始动因素，与肝硬化患者胃粘膜病变的发生、发展有密切关系；NO可能仅在组织、细胞局部发生重要的病理生理作用。作者单位：100054北京佑安医院(丁惠国，金瑞，胡中杰)；首都医科大学(尚宏伟，王兴翠)参考文献1

9、. Sarin SK. Diagnostic issues: portal hypertensive gastropathy and gastric varices. In: Franchis RD. Portal hypertension . Blackwell Science Ltd, 1996, 30-39.2. Ohta M, Tanoue K, Tarnawski A, et al. Overexpressed nitric oxide synthase in portal hypertensive stomach of rats: A key to increase susceptibility to damage? Gastroenterology, 1997, 112:1920-1930.3. El-Newihi HW, Kanji VK, Mihas A