二乙基二巯基氨基甲酸钠对大鼠皮肤成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成

1、    二乙基二巯基氨基甲酸钠对大鼠皮肤成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成的影响        摘要目的：研究二乙基二巯基氨基甲酸钠（DTC）对大鼠皮肤成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成的影响。方法：采用3H-胸腺嘧啶核苷和3H-脯氨酸掺入法，分别测定成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成。结果：DTC低剂量时促进成纤维细胞增殖，高剂量时抑制成纤维细胞的增殖和胶原蛋白合成。结论：DTC能抑制胶原蛋白的合成，对成纤维细胞的增殖具有双向调节作用。关键词二乙基二巯基氨基甲酸钠；成纤维细胞；增殖；胶原蛋白

2、中分类号R963 EFFECTS OF SODIUM DIETHYLDITHIO CARBAMATE ON PROLIFERATION OF SKIN FIBROBLAST AND SYNTHASIS OF COLLAGEN IN RATSPei Renjiu，Qi Lihong，Liu Yun,Liu Xijun(Dept of Clinical Pharmacology ,Fuzhou General Hospital of Nanjing Military Command,Fuzhou350025)AbstractAIM Effects of sodium diethyldithio c

3、arbamate (DTC)on proliferation of skin fibroblast and synthasis of collagen were studied in rats.METHODS 3H-thymidine and 3H-proline uptake was adopted to measure fibroblast proliferation and collagen synthesis respectively.RESULTS The data indicated that DTC could enhance fibroblast proliferation a

4、t the low dose and suppress fibroblast proliferation and collagen synthesis at the high doses.CONCLUSION DTC could inhibite collagen synthesis.It has biphasic effect on fibroblast proliferation.Key wordsSodium diethyldithio carbamate;Fibroblast;Proliferation;Collagen二乙基二巯基氨甲酸钠（Sodium diethyldithio c

5、arbamate,DTC）是含硫的氨基甲酸酯类化合物，可以保护细胞由于药物引起的损害，亦可以预防因化学物质引起的肿瘤，并有抗放射的作用。此外，DTC还是一种免疫促进剂，具有免疫调节作用，它可能直接作用于免疫活性细胞或间接干扰体液调节因子的生物活性1。目前，尚无其对成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成影响的详细报道。本文采用3H-TdR、3HPro掺入法，观察其对成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成的影响。1材料和方法1.1动物新生SD大鼠(由本院动物科提供，动物合格证号：福建省医动字23-001）。1.2试剂新生小牛血清(FBS,中科院上海细胞生物学研究所提供);RPMI-1640培养基(美国Gibco 公司

6、);胰蛋白酶(由Fluck进口分装)；3H-TdR(20Ci/mM,1mci/ml,北京原子能研究所，批号 961107)；3H-Pro(16Ci/mM,lmci/ml,北京原子能研究所，批号 9612)；二乙基二硫基氨基甲酸钠（第二军医大学药学院提供，批号 890103)。1.3仪器CO2培养箱(美国,M-1815TC);FJ-2107型液体闪烁计数仪(国营二六二厂);DYQ-型多头细胞样品收集器(绍兴坡圹医疗器械厂)1.4方法(1)成纤维细胞的培养2取新生大鼠表皮,剪碎,培养在含有10%FBS的RPMI-1640培养液中,置于37,5%CO2细胞培养箱中孵育。每隔34d换含有10%FBS的

7、RPMI-1640培养液一次。待成纤维细胞生长至密集时，用0.1%胰蛋白酶消化，再进行传代。本实验用的成纤维细胞为第24代。（2）细胞增殖率的测定采用3H-TdR掺入法3。取生长状态良好的对数生长期细胞，用0.1%胰蛋白酶消化。用含有10%FBS的RPMI-1640的培养液制成单细胞悬液,在倒置显微镜下计数,调整细胞浓度为1.5×1052.0×105.ml-1。接种于96孔培养板，每孔加细胞悬液0.1ml,置于37,5% CO2细胞培养箱中培养,培养24h后倒出原培养液。空白对照组换不含任何药物的培养液，实验组换含按实验设计所需浓度的含药培养液，每孔0.2ml,每种浓度均作

8、4个复孔。隔24h后,每孔加浓度为25ci.ml-13H-TdR 20l。继续培养24h后,用多头细胞样品收集器收样,烤干,用液体闪烁计数器进行放射活性计数。（3）胶原蛋白合成的测定采用3H-Pro掺入法4。将浓度为1.5×1052.0×105.ml-1成纤维细胞悬液，接种于96孔培养板。每孔0.1ml,置于37,5% CO2细胞培养箱中培养,培养24h后，倒出原培养液。空白对照组换不含任何药物的培养液，实验组换含按实验设计所需浓度的含药培养液，每孔0.2ml，每种浓度均作4个复孔。隔24h后，加浓度为25ci.ml-13H-Pro 20l。继续培养24h后，用多头细胞样品

9、收集器收样，烤干，用液体闪烁计数器进行放射活性计数。（4）统计学处理数据用±s表示，以组间t检验和方差分析进行统计学处理。2结果2.1DTC对成纤维细胞增殖的影响DTC在低浓度时（0.04g.ml-1）可促进成纤维细胞的增殖,但随着药物浓度的增加,其抑制成纤维细胞增殖的作用加强。DTC在剂量1g.ml-1时,其抑制作用具显著意义（P<0.001），见表1。表1二乙基二巯基甲酸钠对成纤维细胞增殖的影响（n=4）组别DTC(g.ml-1)cpm值(±s)抑制率(%)对照组01788±192DTC组0.042390±224c-34%0.21921

10、7;757-7%1.0297±201d83%5.0220±53d88%注：与对照组比较，cP<0.01,dP<0.0012.2DTC对成纤维细胞胶原蛋白合成的影响DTC可剂量依赖性抑制成纤维细胞胶原蛋白的合成。当DIC剂量浓度达到0.2g.ml-1和1.0g.ml-1时，抑制分别有显著和非常显著性差异(P<0.05;P<0.01)，见表2。 表2DTC对胶原蛋白合成的影响(n=4)组别DTC(g.ml-1)cpm值(±s)抑制率(%)对照组01528±248DTC组0.011508±2531%0.041475±

11、1733%0.21161±242b24%1.0767±335c50%注：与对照组比较，bP<0.05,cP<0.01 3讨论细胞的生长和增殖是一个复杂的生物过程。研究资料表明,胶原过量沉积是瘢痕形成的基本环节,成纤维细胞是合成胶原的主要细胞,成纤维细胞的合成与分泌胶原能力的增强或成纤维细胞的大量增殖,都可能导致胶原总量的增加。如果阻断成纤维细胞增殖,也就阻止了瘢痕的形成。本实验结果表明,DTC在一定程度上能抑制成纤维细胞的生长增殖。这对于临床治疗瘢痕等成纤维细胞过度增生性疾病，可能具一定的意义。作者简介：裴仁九，男，医学硕士，副主任药师。作者单位：中国人民解放军南京军区福州总医院临床药理科福州350025参考文献：1黄 沁.免疫药物学,第一版,上海:上海科学技术出版社,1986;80812Falanga V,Su Wen Qian,David Danielpour et al:Hypoxia upregulates the synghesis of TGF-beta-1 by human dermal fibroblasts.J Inves Dermatal，1991;97:6343宋维铭,管正玉,孙广兹等.维甲酸对体外培养成纤维细胞DNA合成影