薄层色谱操作技术

1、实验四薄层色谱计划学时：3学时一、实验目的：1、了解薄层色谱的基本原理和应用。2、掌握薄层色谱的操作技术。二、实验原理：1、原理薄层色谱（Thin Layer Chromatography）常用TLC表示，又称薄层层析，属于固一液吸附色谱。样品在薄层板上的吸附剂（固定相）和溶剂（移动相）之 间进行分离。由于各种化合物的吸附能力各不相同， 在展开剂上移时，它们进 行不同程度的解吸，从而达到分离的目的。2、薄层色谱的用途：1）化合物的定性检验。（通过与已知标准物对比的方法进行未知物的鉴定）在条件完全一致的情况，纯碎的化合物在薄层色谱中呈现一定的移动距离，称比移值（Rf值），所以利用薄层色谱法可以鉴

2、定化合物的纯度或确定两 种性质相似的化合物是否为同一物质。 但影响比移值的因素很多，如薄层的厚 度，吸附剂颗粒的大小，酸碱性，活性等级，外界温度和展开剂纯度、组成、 挥发性等。所以，要获得重现的比移值就比较困难。为此，在测定某一试样时， 最好用已知样品进行对照。_溶质最高浓度中心至原 点中心的距离f溶剂前沿至原点中心的 距离2、 快速分离少量物质。（几到几十微克，甚至0.01旧）3、跟踪反应进程。在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步 消失，来判断反应是否完成。4、 化合物纯度的检验（只出现一个斑点，且无拖尾现象，为纯物质。）此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气

3、相色谱 分析的物质三、实验装置薄层板在不同的层析缸中展开的方式四、实验操作步骤：1吸附剂的选择薄层色谱的吸附剂最常用的是氧化铝和硅胶。1、硅胶：“硅胶H”一不含粘合剂；“硅胶G”一含煅石膏粘合剂；其颗粒大小一般为260目以上。颗粒太大，展开剂移动速度快，分离效果 不好；反之，颗粒太小，溶剂移动太慢，斑点不集中，效果也不理想。化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因而Rf值较小。酸和碱 醇、胺、硫醇 酯、醛、酮 芳香族化合物 卤代物、醚 烯 饱和烃本实验选择的吸附剂为薄层色谱用硅胶 Go2、薄层板的制备（湿板的制备）薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果。薄层应尽量均匀且

4、厚度要固定。否则，在展开时前沿不齐，色谱结果也不易重复。在烧杯中放入2g硅胶G，加入5 6ml 0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液，调成糊状。将配制好的浆料倾 注到清洁干燥的载玻片上，拿在手中轻轻的左右摇晃，使其表面均匀平滑，在 室温下晾干后进行活化。本实验用此法制备薄层板 4片。3、薄层板的活化将涂布好的薄层板置于室温凉干后， 放在烘箱内加热活化，活化条件根据 需要而定。硅胶板一般在烘箱中渐渐升温，维持105 110C活化30min。氧化 铝板在200E烘4h可得到活性为U级的薄板，在150 160C烘4h可得活性为 mw级的薄板。活化后的薄层板放在干燥器内保存待用。4、点样先用铅笔在距薄层板一

5、端1cm处轻轻划一横线作为起始线，然后用毛细 管吸取样品，在起始线上小心点样，斑点直径一般不超过2mm。若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果。若在同一板上点几个样，样 点间距离应为1。点样要轻，不可刺破薄层。5、展开薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行。为使溶剂蒸气迅速达到平衡， 可在展开槽内衬一滤纸。在层析缸中加入配好的展开溶剂，使其高度不超过 1cm。将点好的薄层板小心放入层析缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。盖 好瓶盖，观察展开剂前沿上升到一定高度时取出，尽快在板上标上展开剂前沿 位置。晾干，观察斑点位置

6、，计算 Rf值。6、显色被分离物质如果是有色组分，展开后薄层色谱板上即呈现出有色斑点。如果化合物本身无色，则可用碘蒸气熏的方法显色。还可使用腐蚀性的显 色剂如浓硫酸、浓盐酸和浓磷酸等。对于含有荧光剂的薄层板在紫外光下观察， 展开后的有机化合物在亮的荧 光背景上呈暗色斑点。本实验样品本身具有颜色，不必在荧光灯下观察。五、实验内容：1检验甲基橙的纯度。（通过与已知标准物对比的方法检验物质是否纯净） 实验样品：甲基橙粗品（自制）、甲基橙纯品。溶剂：乙醇：水=1: 1展开剂：丁醇：乙醇：水=10： 1： 12、混合物的分离实验样品：圆珠笔芯油溶剂：95聽醇展开剂：丁醇：乙醇：水=9： 3： 1 （体积比）3、1%偶氮苯、1%间硝基苯胺、荧光黄（95%乙醇，1mg/1ml）、次甲基蓝、环己 烷:乙酸9:1五、实验关键步骤：1、载玻片应干净且不被手污染，吸附剂在玻片上应均匀平整。2、 点样不能戳破薄层板面，各样点间距1 1.5c m,样点直径应不超过 2mm。3、展开时，不要让展开剂前沿上升至底线。否则，无法确定展开剂上升 高度，即无法求得Rf值和准确