生化课后习题答案

1、绪论1生物化学研究的对象和内容是什么？ 解答：生物化学主要研究 :（ 1）生物机体的化学组成、生物 分子的结构、性质及功能； （ 2）生物分子分解与合成及反 应过程中的能量变化； （3）生物遗传信息的储存、传递和 表达； （ 4）生物体新陈代谢的调节与控制。2你已经学过的课程中哪些内容与生物化学有关。 提示：生物化学是生命科学的基础学科， 注意从不同的角度， 去理解并运用生物化学的知识。3说明生物分子的元素组成和分子组成有哪些相似的规侓。 解答：生物大分子在元素组成上有相似的规侓性。碳、氢、 氧、氮、磷、硫等 6 种是 解答 蛋白质、核酸、糖和脂的 主要组成元素。碳原子具有特殊的成键性质，即碳

2、原子最外 层的 4 个电子可使碳与自身形成共价单键、共价双键和共 价三键，碳还可与氮、氧和氢原子形成共 价键。碳与被键 合原子形成 4 个共价键的性质 ,使得碳骨架可形成线性、分 支以及环状的多O 种多性的化合物。 特殊的成键性质适应了生物大分子多样 性的需要。氮、氧、硫、磷元素构成了生物分子碳骨架上的 氨基（一NH2 ）、羟基（一OH）、羰基（C）、羧基（一COOH ）、 巯基（ SH） 、磷酸基（ PO4 ）等功能基团。这些功能基团因氮、硫和磷有着可变的氧化数及 氮和氧有着较强的 电负性而与生命物质的许多关键作用密切相关。 生物大分 子在结构上也有着共同的规律性。 生物大分子均由相同类 型

3、的构件通过一 定的共价键聚合成链状，其主链骨架呈现 周期性重复。构成蛋白质的构件是 20 种基本氨基 酸。氨 基酸之间通过肽键相连。肽链具有方向性（N端tC端），蛋白质主链骨架呈 “肽单 位 ”重复；核酸的构件是核苷酸 ,核 苷酸通过3，5磷酸二酯键相连，核酸链也具有方向性（5、t 3、核酸的主链骨架呈 磷酸-核糖（或脱氧核糖）”重复；构成脂质的构件 是甘油、脂肪酸和胆碱，其非极性烃长链 也是一种重复结构；构成多糖的构件是单糖，单糖 间通过 糖苷键相连，淀粉、纤维素、糖原的糖链骨架均呈葡萄糖基 的重复。二 蛋白质化学1.用于测定蛋白质多肽链 N端、C端的常用方法有哪些？ 基本原理是什么？ 解答

4、： （ 1 ） N- 末端测定法：常采用 2, 4 二硝基氟苯法、 Edman 降解法、丹磺酰氯法。 2, 4 二硝基氟苯 （DNFB 或FDNB）法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与2, 4 三硝基氟苯2, 4 DNFB （反应（Sanger反应）生成DN多肽或DN蛋白质。,由于DNFB与氨基形成的键对 酸水解远比肽键稳定，因此DN 多肽经酸水解后，只有N末端氨基 酸为黄色 DNP氨基酸衍生物，其余的都是 游离氨基酸。 丹磺酰氯（DNS）法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯（ DNSCl ）反应 生成 DNS 多肽 或 DNS 蛋白质。 由于 DNS 与氨基形成的键对酸水解远 比肽键稳定，

5、 因此 DNS 多肽经酸水解后， 只有 N 末端 氨基酸为强烈的荧光物质DNS 氨基酸，其余的都 是游离氨基酸。 苯异硫氰酸脂（ PITC 或 Edman 降解）法： 多肽或蛋白质的游离末端氨基与异硫氰酸苯酯（PITC ）反应（ Edman 反应） ，生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。在 酸性有机溶剂中 加热时， N 末端的 PTC 氨基酸发生环 化， 生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来，除去N 末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。 氨肽酶法：氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶， 能从多肽链的 N 端 逐个地向里切。 根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨 基酸种类和数量， 按反应时间和残基释放

6、量作动力 学曲 线，就能知道该蛋白质的 N 端残基序列。（ 2） C 末端测定法：常采用肼解法、还原法、羧肽酶法。 肼解法：蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解，反应中除 C 端氨基酸以游离形式存 在外，其他氨基酸都转变为相应的 氨基酸酰肼化物。 还原法： 肽链 C 端氨基酸可用硼氢化锂还原成相应的 a氨基醇。 肽链完全水解后，代表原来C末端氨基酸的 a一氨基醇，可用层析法加以鉴别。 羧肽酶法：是一类肽链外切酶，专一的从肽链的c末端开始逐个降解，释放出游 离的氨基酸。被释放的氨基酸数目 与种类随反应时间的而变化。根据释放的氨基酸量（摩尔 数）与反应时间的关系，便可以知道该肽链的c末端氨基酸序列。2

7、测得一种血红蛋白含铁0.426%，计算其最低相对分子质量。一种纯酶按质量计算含 亮氨酸 1.65%和异亮氨酸 2.48%，问其最低相对分子质量是多少？解答：（1）血红蛋白：（最低相对分子质量=2 ）酶铁的相对原子质量 55.8 *00= X100 = 13 100铁的百分含量 0.426因为亮氨酸和异亮氨酸的相对分子质量相等，所以亮氨酸和 异亮氨酸的残基数之比为： 1.65%:2.48%=2:3 ，因此，该酶 分子中至少含有 2 个亮氨酸， 3 个异亮氨酸。 2X131.11 100M r (最低)=15900 1.65 3X 131.11X 1 最低/l)r=(9015900 2.483指出

8、下面 pH 条件下，各蛋白质在电场中向哪个方向移动，即正极，负极，还是保持原点？ （ 1）胃蛋白酶（pl 1.0）, 在 pH 5.0； （2）血清清蛋白（ pI 4.9） ，在 pH 6.0； （3） a脂蛋白（pl 5.8），在 pH 5.0 和 pH 9.0 ;解答：（1）胃蛋白酶 p| 1.0 v环境pH 5.0，带负电荷，向 正极移动；（2）血清清蛋白 pl 4.9 v环境pH 6.0，带负电荷，向正极移动； （3） a脂蛋白pl 5.8 环境pH 5.0，带 正电荷，向负极移动；a脂蛋白pl 5.8 v环境pH 9.0，带负电荷，向正极移动。4何谓蛋白质的变性与沉淀？二者在本质上有

9、何区别？解答：蛋白质变性的概念：天然蛋白质受物理或化学因素的影 响后，使其失去原有的 生物活性，并伴随着物理化学性质 的改变，这种作用称为蛋白质的变性。 变性的本质：分子 中各种次级键断裂，使其空间构象从紧密有序的状态变成松 散无序 的状态，一级结构不破坏。 蛋白质变性后的表现： 生物学活性消失；理化性质改变：溶解度下降，黏度增 加，紫外吸收增加，侧链反应增强，对酶的作用敏感， 易被水解。 蛋白质由于带有电荷和水膜，因此在水溶液中 形成稳定的胶体。如果在蛋白质溶液中 加入适当的试剂， 破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷，则蛋白质胶体溶液就不稳定 而出现沉淀现象。沉淀机理：破坏蛋白质的水化膜

10、，中和表面的净电荷。 蛋白质的沉淀可以分为两 类： （1）可逆的沉淀：蛋白质的结构未发生显著的变化， 除去引起沉淀的因素，蛋白质仍 能溶于原来的溶剂中，并 保持天然性质。如盐析或低温下的乙醇（或丙酮）短时间作 用蛋白质。 （2）不可逆沉淀：蛋白质分子内部结构发生 重大改变，蛋白质变性而沉淀，不再能溶 于原溶剂。如加 热引起蛋白质沉淀，与重金属或某些酸类的反应都属于此 类。蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存 在，并不析出。因此变性蛋白质 并不一定都表现为沉淀， 而沉淀的蛋白质也未必都已经变性。5下列试剂和酶常用于蛋白质化学的研究中：CNBr ，异硫氰酸苯酯，丹磺酰氯，脲，6mol/L

11、 HCI B巯基乙醇，水合茚 三酮，过甲酸，胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，其中哪一个最 适 合完成以下各项任务？ （1）测定小肽的氨基酸序列。 （2） 鉴定肽的氨基末端残基。 （3）不含二硫键的蛋白质的可逆 变性。若有二硫键存在时还需加什么试剂？（ 4）在芳香族氨基酸残基羧基侧水解肽键。 （5）在甲硫氨酸残基羧基侧 水解肽键。 （6）在赖氨酸和精氨酸残基侧水解肽键。 解答：（1）异硫氰酸苯酯； （2）丹黄酰氯； （3）脲； B-巯基乙醇还原二硫键；（4）胰 凝乳蛋白酶；（5） CNBr ;（6）胰蛋白酶。6由下列信息求八肽的序列。（ 1）酸水解得 Ala ， Arg ，Leu , Met, Phe,

12、 Thr, 2Val。（2） Sanger 试剂处理得 DNP-Ala。（3）胰蛋白酶处理得 Ala， Arg， Thr 和 Leu，Met，Phe， 2Val。当以Sanger试剂处理时分别得到 DNP-Ala和 DNP-Val o（4）溴化氰处理得 Ala , Arg，高丝氨酸内酯，Thr，2Val，和Leu，Phe,当用 Sanger试剂处理时，分别 得 DNP-Ala 和 DNP-Leuo解答：由（2）推出N末端为 Ala ;由（3）推出Vai位于 N 端第四, Arg 为第三,而 Thr 为第二；溴化氰裂解,得 出N端第六位是 Met，由于第七位是 Leu，所以Phe为第 八；由（4

13、），第五为Val。所以八肽为：Ala-Thr-Arg-Val-Val-Met-Leu-Phe o7.个a螺旋片段含有180个氨基酸残基，该片段中有 多少圈螺旋？计算该a-螺旋片 段的轴长。解答：180/3.6=50圈，50X0.54=27nm，该片段中含有 50圈螺旋，其轴长为 27nmo8一种四肽与 FDNB 反应后, 5.7mol/LHCl 水解得到 DNP-Val 及其他 3 种氨基酸； 用当这四肽用胰蛋白酶水 解时发现两种碎片段；其中一片用 LiBH4 （下标）还原后再进行酸水 解，水解液内有氨基乙醇和一种在浓硫酸条件下 能与乙醛酸反应产生紫(红)色产物的氨基 酸。试问这四 肽的一级结

14、构是由哪几种氨基酸组成的？ 解答：用证明 N 端为 Val。 ( 1)四肽与 FDNB 反应后， 5.7mol/LHCl 水解得到 DNP-Val ， (2)LiBH4 还原后再水 解，水解液中有氨基乙醇，证明肽的C端为Gly。(3)水解液中有在浓 H2SO4 条件下能与乙醛酸反应产生紫红 色产物的氨基酸，说明此 氨基酸为Trp。说明C端为Gly -Trp(4)根据胰蛋白酶的专一性，得知N端片段为 Val -Arg (Lys)，以(1)( 2) ( 3)、 结果可知道四 肽的顺序： N-Val-Arg(Lys)-Trp-Gly-C。9概述测定蛋白质一级结构的基本步骤。解答：(1)测定蛋白质中氨

15、基酸组成。(2)蛋白质的 N端和 C 端的测定。 ( 3 )应用两种或两种以上不同的水解 方法将所要测定的蛋白质肽链断裂，各自得到一 系列大小 不同的肽段。(4)分离提纯所产生的肽，并测定出它们的序列。(5)从有重叠结构的各个肽的序列中推断出蛋白质 中全部氨基酸排列顺序。 如果蛋白质含有一条以上的肽链， 则需先拆开成单个肽链再按上述原则确定其一级结 构。如 是含二硫键的蛋白质， 也必须在测定其氨基酸排列顺序前， 拆开二硫键， 使肽链分开， 并确定二硫键的位置。拆开二硫键可用过甲酸氧化，使胱氨酸部分氧化成两个半胱氨磺 酸。三 核酸I. 电泳分离四种核苷酸时，通常将缓冲液调到什么 pH ? 此时它

16、们是向哪极移动？移动的快慢顺序如何 将四种 核苷酸吸附于阴离子交换柱上时， 应将溶液调到什么 pH？ 如果用逐渐降低 pH 的洗脱液对阴离子交换树脂上的四 种核苷酸进行洗脱分离，其洗脱 顺序如何？为什么？解答： 电泳分离4种核苷酸时应取 pH3.5的缓冲液， 在该 pH 时，这 4 种单核苷酸 解答 之间所带负电荷差异 较大，它们都向正极移动，但移动的速度不同，依次为： UMP>GMP>AMP>CMP :应取 pH8.0，这样可使核苷酸 带较多负电荷，利于吸附于阴离 子交换树脂柱。虽然 pHII. 4 时核苷酸带有更多的负电荷，但pH 过高对分离不利。 当不 考虑树脂的非极性

17、吸附时，根据核苷酸负电荷的多 少来决定洗脱速度，则洗脱顺序为 CMP>AMP> GMP > UMP，但实际上核苷酸和聚苯乙烯阴离子交换树脂之间存在 着非极性 吸附， 嘌呤碱基的非极性吸附是嘧啶碱基的 3 倍。 静电吸附与非极性吸附共同作用的结果使 洗脱顺序 为： CMP> AMP > UMP >GMP 。2为什么 DNA 不易被碱水解，而 RNA 容易被碱水解 解答：因为RNA的核糖上有2-OH基，在碱作用下形成2部磷酸酯，继续水解产生 解答2-核苷酸和3-核苷酸。DNA的脱氧核糖上无 2 -OH基，不能形成碱水解的中间产 物，故对 碱有一定抗性。3一个双螺

18、旋 DNA 分子中有一条链的成分 A = 0.30 ，G =0.24， 请推测这一条 链上的T和C的情况。 互补 链的A，G，T和C的情况。 解答： 解答 T + C=1 -0.30 024 = 0.46 :T = 0.30 , C = 0.24 , A + G= 0.46。4.对双链 DNA 而言， 若一条链中(A + G)/(T + C)= 0.7 , 则互补链中和整个 DNA 分子中 (A+G)/(T+C) 分别等于多 少？ 若一条链中(A + T)/(G + C)= 0.7，则互补链中和整个 DNA分子中(A + T)/(G + C)分别等于多少 ？解答： 设 DNA 的两条链分别为a

19、和 B贝y： Aa = T 3 Ta = A 3 Ga =CB, Ca = G ,因解答为：(A a + G a (/Ta + C )x = (T 3 + C 3 )/(A3+ G3)= 0.7，所以互补链中( A3+ G3)/(T3+ C3) =1/0.7 =1.43；在整个 DNA 分子中，因为 A = T， G = C， 所以，A + G = T + C ,(A + G )/ (T + C) = 1 :假设同(1 ),贝Aa + T a = T 3 + A Ga + C a = C 3 + G 3所以，(Aa +Ta) / ( Ga + C a(AB + T )3 ( GB + C p

20、0.7 ; = / =在整个 DNA 分子中，a + T a + A B + T B( Ga +Ca + (A /Gp +C0 = 2 (Aa + T X /2 ( Ga +Ca = 0.7 5T7 噬菌体 DNA( 双链 B-DNA) 的相对分子质量为2.5 X07，计算DNA链的长度(设核苷酸对的平均相对分子质量为 640)。解答：0.34 (2.5 >107/640) = 1.3104nm =13m。6如果人体有 1014 个细胞，每个体细胞的 DNA 含量为6.4 109个碱基对。试计算人 体DNA的总长度是多少？ 是太阳一地球之间距离(2.2 X09 km)的多少倍？已知双链D

21、NA 每1000个核苷酸重 1为0-18g，求人体 DNA 的总质量。 解答：每个体细胞的DNA的总长度为：6.4 XI09 X0.34nm = 2.176109 nm = 2.176m ， 解答 人体内所有体细胞的 DNA 的总长度为：2.176m X1014 = 2.176 1011km，这个长度与太阳 地 球之间距离 ( 2.2 109 km) 相比为：2.1761011/2.2109 = 99 倍， 每个核苷酸重 110-18g/1000 = 10-21g ，所以，总 DNA 6.4102310-21 = 6.4102 = 640g 。7 有一个 X 噬菌体突变体的 DNA 长度是 1

22、5m， 而正 常 X 噬菌体 DNA 的长度为 17m ， 计算突变体 DNA 中 丢失掉多少碱基对？解答：解答（17-5）X103/0.34 = 5.88xi03bp8概述超螺旋 DNA 的生物学意义。 解答： 解答 超 螺旋 DNA 比松弛型 DNA 更紧密，使 DNA 分子的体积 更小，得以包装 在细胞内； 超螺旋会影响双螺旋分子的 解旋能力 ,从而影响到 DNA 与其他分子之间的相 互作用； 超螺旋有利于 DNA 的转录、复制及表达调控。9为什么自然界的超螺旋 DNA 多为负超螺旋？ 解答：环 状 DNA 自身双螺旋的过度旋转或旋转不足都会导致超螺 旋，这是因为超螺旋 解答 将使分子能

23、够释放由于自身旋转 带来的应力。 双螺旋过度旋转导致正超螺旋， 而旋转不足 将 导致负超螺旋。虽然两种超螺旋都能释放应力，但是负 超螺旋时，如果发生 DNA 解链（即氢 链断开，部分双螺 旋分开）就能进一步释放应力，而 DNA 转录和复制需要解 链。因此自然界 环状 DNA 采取负超螺旋，这可以通过拓 扑异构酶的操作实现。10真核生物基因组和原核生物基因组各有哪些特点 解答： 解答 不同点 : 真核生物 DNA 含量高， 碱基对总 数可达 10，且与组蛋白稳定结合形成染色体，具有多个复 制起点。 原核生物 DNA 含量低， 不含组蛋白， 称为类核体， 只有 一个复制起点。 真核生物有多个呈线形

24、的染色体； 原核生物只有一条环形染色体。 真 核生物 DNA 中含 有大量重复序列，原核生物细胞中无重复序列。真核生物中为蛋白质编 码的大多数基因都含有内含子 （有断裂基 因）;原核生物中不含内含子。 真核生物的 RNA是细胞 核内合成的， 它必须运输穿过核膜到细胞质才能翻译， 这 样严格的空间间隔在原核生物内是不存在的。 原核生物功能上密切相关的基因相互靠近，形成一个转录单位，称操 纵子，真核生物不存在操纵子。病毒基因组中普遍存在重叠基因，但近年发现这种情况 在真核生物也不少见。相 同点 :都是由相同种类的核苷酸构成的的双螺旋结构，均是遗传信 息的载体，均含有多个基因。11如何看待 RNA

25、功能的多样性它的核心作用是什么解答：RNA的功能主要有： 控制蛋白质合成； 作用于RNA 转录后加工与修饰; 解答 参与细胞功能的调节;生物催化与其他细胞持家功能；遗传信息的加工； 可能是 生物进化时比蛋白质和 DNA 更早出现的生物大分子。 其核心作用是既可以作为信息分子又可 以作为功能分 子发挥作用。12什么是 DNA 变性？ DNA 变性后理化性质有何变化？ 解答： DNA 双链转化成单链的过程称变性。 解答 引起 DNA 变性的因素很多，如高温、 超声波、 强酸、强碱、 有机溶剂和某些化学试剂（如尿素，酰胺）等都能引起变性。DNA变性后的理 化性质变化主要有： 天然DNA分子 的双螺旋

26、结构解链变成单链的无规则线团，生物学活 性丧 失； 天然的线型 DNA分子直径与长度之比可达 1 : 10, 其水溶液具有很大的黏度。 变性后， 发生了螺旋 -线团转变， 黏度显著降低； 在氯化铯溶液中进行密度梯度离心，变 性后的DNA浮力密度大大增加，故沉降系数S增加；DNA 变性后，碱基的有序堆积被破 坏，碱基被暴露出来， 因此，紫外吸收值明显增加， 产生所谓增色效应。 DNA 分 子具旋 光性，旋光方向为右旋。由于 DNA 分子的高度不 对称性，因此旋光性很强， 其a = 150。当DNA分子变性 时，比旋光值就大大下降。13哪些因素影响 Tm 值的大小？ 解答： 影响 Tm 的因素 主

27、要有： G-C 对含量。 G-C 对含 3 个氢键， A-T 对含 2 个氢键， 解答 故 G-C 对相对含量愈高， Tm 亦越高（图3-29 ) 。在 0.15mol/L NaCl,0.015mol/L 柠檬酸钠溶 液(1 >SSC)中，经验公式为：(G+C) % = (Tm - 69.3 ) X2.44。 溶液的离子强度。离子强 度较低的介质中， Tm 较低。 在纯水中， DNA 在室温下即可变性。分子生物学研究工作 中需核 酸变性时，常采用离子强度较低的溶液。溶液的pH。高pH下，碱基广泛去质子而丧失形成氢键的有力，pH 大于 11.3 时， DNA 完全变性。 pH 低于 5.0

28、 时， DNA 易脱嘌呤，对单链 DNA 进行电泳时，常在凝胶中加入NaOH 以维持变性关态。 变性剂。 甲酰胺、 尿素、甲醛 等 可破坏氢键，妨碍碱堆积，使 Tm 下降。对单链 DNA 进 行电泳时，常使用上述变性剂。14哪些因素影响 DNA 复性的速度？ 解答：影响复性速 度的因素主要有： 复性的温度，复性时单链随机碰撞， 不能形成 解答 碱基配对或只形成局部碱基配对时， 在较 高的温度下两链重又分离， 经过多次试探性碰撞才 能形成 正确的互补区。所以，核酸复性时温度不宜过低，Tm-25 C是较合适的复性温度。单链片段的浓度，单链片段浓度越高，随机碰撞的频率越高， 复性速度越快。 单链片段

29、 的 长度，单链片段越大，扩散速度越慢，链间错配的概率也越 高。因面复性速度也越慢，即 DNA 的核苷酸对数越多，复 性的速度越慢，若以 C0 为单链的初始浓度， t 为复性的时间，复 性达一半时的 C0t 值称 C0t1/2 ，该数值越小，复性 的速度越快。 单链片段的复杂度，在片 段大小相似的情 况下，片段内重复序列的重复次数越多， 或者说复杂度越小， 越容易形成互 补区，复性的速度就越快。 真核生物 DNA 的 重复序列就是复生动力学的研究发现的， DNA 的 复杂度越 小，复性速度越快。15概述分子杂交的概念和应用领域。解答：在退火条件Southern下，不同来源的 DNA 互补区形成

30、双链，或 DNA 单链和 RNA 单链的互 解答 补区形成 DNA-RNA 杂合双链的过 程称分子杂交。 通常对天然或人工合成的 DNA 或 RNA 片段进 行放射性同位素或荧光标记，做成探针，经杂交后， 检测放射性同位素或荧光物质的位置， 寻找与探针有互补 关系的 DNA 或 RNA 。直接用探针与菌落或组织细胞中的 核酸杂交，因未改 变核酸所在的位置，称原位杂交技术。 将核酸直接点在膜上，再与探针杂交称点杂交，使用 狭缝 点样器时，称狭缝印迹杂交。该技术主要用于分析基因拷贝 数和转录水平的变化，亦可 用于检测病原微生物和生物制 品中的核酸污染状况。杂交技术较广泛的应用是将样品 DNA 切割

31、成大小不等的片段，经凝胶电泳分离后，用杂交 技术寻找与探针互补的 DNA 片段。 由于 凝胶机械强度差， 不适合于杂交过程中较高温度和较长时间的处理，提出一种方 法，将电泳分离的 DNA 片段从凝胶转移到适 当的膜（如硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，在进行 杂交操作， 称 Southern 印迹法，或 Southern 杂交技术。随后， Alwine 等提出将电泳分离 后的变性 RNA 吸印到适当的膜上再进 行分子杂交的技术， 被戏称为 Northern 印迹法， 或 Northern 杂交。分子杂交广泛用于测定基因拷贝数、基因定位、确定 生物的遗传进化关系 等。Southern杂交和Norther

32、n杂交还 可用于研究基因变异，基因重排， DNA 多态性分析和 疾病 诊断。杂交技术和 PCR 技术的结合，使检出含量极少的 DNA 成为可能。 促进了杂交技术 在分子生物学和医学领域 的广泛应用。 DNA 芯片技术也是以核酸的分子杂交为基础 的。16概述核酸序列测定的方法和应用领域。 解答： DNA 的 序列测定目前多采用 Sanger 提出的链终止法，和 Gilbert 提出的化学法。 解答 其中链终止法经不断改进，使用日益 广泛。链终止法测序的技术基础主要有：用凝胶电 泳分离 DNA 单链片段时，小片段移动，大片段移动慢，用适当 的方法可分离分子大小仅差一个核苷酸的DNA片段。用合适的聚

33、合酶可以在试管内合成单链 DNA 模板的互补 链。反应 体系中除单链模板外， 还应包括合适的引物， 种 脱氧核苷三磷酸和若干种适量的无机离子。 4 如果在 4 个试管中分别进行合成反应， 每个试管的反应体系能在一种 核苷酸处随机中断链的 合成，就可以得到 4 套分子大小不 等的片段，如新合成的片段序列为 -CCATCGTTGA- ，在 A 处随机中断链的合成， 可得到 -CCA 和 -CCATCGTA 两种片 段，在 G 处中断合成可得到 -CCATCG 和 -CCATCGTTG 两 种片段。在 C 和 T 处中断又可以得到相应的 2 套片段。 用同位素或荧光物 质标记这 4 套新合成的链，在

34、凝胶中置 于 4 个泳道中电泳，检测这 4 套片段的位置，即可直 接 读出核苷酸的序列。 在特定碱基处中断新链合成最有效的 办法，是在上述 4 个试管中按 一定比例分别加入一种相应 的2，3双脱氧核苷三磷酸（ddNTP），由于ddNTP的3 位无 -OH， 不可能形成磷酸二酯键，故合成自然中断。如上 述在A处中断的试管内，既有 dATP，又有 少量的 ddATP，新合成的-CCA 链中的 A 如果是ddAMP,则链的合 成中断，如果是 dAMP，则链 仍可延伸。因此，链中有几 个A，就能得到几种大小不等的以A为末端的片段。如果用放射 性同位素标记新合成的链， 4 个试管中新合成的链 在凝胶的

35、4 个泳道电泳后， 则 经放射自显影可检测带子 的位置， 由带子的位置可以直接读出核苷酸的序列。采用 T7测序酶时，一次 可读出 400 多个核苷酸的序列。近年采用 4 种射波长不同的荧光物质分别标记 4 种不同的双 脱 氧核苷酸，终止反应后 4 管反应物可在同一泳道电泳，用激光扫描收集电泳信号，经计算 机处理可将序列直接打印 出来。采用毛细管电泳法测序时，这种技术一次可测定 700 个左右核苷酸的序列，一台仪器可以有几十根毛细管同时 进行测序，且电泳时间大大缩短，自动 测序技术的进步加 快了核酸测序的步伐， 现已完成了包括人类在内的几十个 物种的基因组测 序。 RNA 序列测定最早采用的是类

36、似蛋 白质序列测定的片段重叠法， Holley 用此法测定酵 母丙氨 酸 tRNA 序列耗时达数年之久。随后发展了与 DNA 测序 类似的直读法，但仍不如 DNA 测序容易，因此，常将 RNA 反转录成互补 DNA (cDNA )，测定 cDNA 序列后推断 RNA 的序列，目前 16S rRNA 1 542 b 的全序列测定， 23S rRNA 2 904 b 的全序列测定，噬菌体 MS2 RNA 3 569 b 的 全序列测定均已完成。四糖类的结构与功能1.书写a-D-吡喃葡萄糖，L-(-)葡萄糖，B-D- (+)吡喃葡 萄糖的结构式，并说明D、 L ； +、-； a、 B各符号代表的意义

37、。 解答：书写单糖的结构常用D、L ； d或(+)、I或(-)；a、 B表示。D-、L-是人为规 解答 定的单糖的构型。 是以D-、L-甘油醛为参照物，以距醛基最远的不对称碳原子 为准, 羟基在左面的为 L 构型, 羟基在右的为 D 构型。单 糖由于具有不对称碳原子 ,可使平面偏振光的偏 振面发生一 定角度的旋转，这种性质称为旋光性。其旋转角度称为旋光 度,偏振面向左旋转 称为左旋 ,向右则称为右旋。 d 或(+)表示 单糖的右旋光性 ,l 或(-)表示单糖的左旋光性。2.写出下列糖的结构式：a-D-葡萄糖-1-磷酸，2-脱氧-B-D-呋喃核糖，a-D-呋喃 果糖，D-甘油醛-3-磷酸，蔗糖，

38、葡萄 糖醛酸。 解答：略。3 .已知某双糖能使本尼地(Benedict)试剂中的 Cu2+氧化成 Cu2O的砖红色沉淀，用B-葡糖糖苷酶可将其水解为两分 子B-D-吡喃葡糖糖，将此双糖甲基化后再水解将得到2,3,4,6-四 氧甲基-D-吡喃葡糖糖和1,2,3,6-四氧甲基-D-吡喃 葡糖糖 ,试写出此双糖的名称和结构式。 蔗糖双糖能使本尼 地(Benedict)试剂中的 Cu2+氧化成 Cu2O的砖红色沉淀，说 明该双解答：糖具还原性，含有半缩醛羟基。用B葡糖苷酶可将其水解为两分子炉D-吡喃葡糖，说明 该双糖是由&糖苷键构成的。将此双糖甲基化后再水解将得到2,3,4,6-四氧甲基-D-

39、吡喃葡 糖糖和1,2,3,6-四氧甲基-D-吡喃葡糖， 糖基上只有自由羟基才能被甲基化，说明3-葡糖(1 t 4葡糖构成的为纤维二糖。4根据下列单糖和单糖衍生物的结构：CH2 OH C HO H H C C C O H OH OHCHO H C OH HO H H C C C H OH OH CHO CHOH C NHCOCH3 HO C H HO HO H C C C H H OH H H HO CC C OH OH HCH2OHCH2OHCH2OHCH2OH(A)(B)(C)(D)（1）写出其构型（D或L）和名称；（2）指出它们能否还原本尼地 试剂； （3） 指出哪些能发生 成苷反应。解答

40、：（1）构型是以D-丄-甘油醛为参照物，以距醛基最远的 不对称碳原子为准 , 羟基解答在左面的为 L 构型, 羟基 在右的为D构型。A、B、C为D构型，D为L构型。 B、C、D 均有醛基具还原性，可还原本尼地试剂。 A 为酮 糖，无还原性。 （3） 单糖的半缩醛上羟基与非糖物质（醇、酚等）的羟基形成的缩醛结构称为糖苷, B,C,D 均能发生成苷反应。5透明质酸是细胞基质的主要成分，是一种黏性的多糖,分子量可达 100000，由两单糖衍生物的重复单位构成 ,请指出 该重复单位中两组分的结构名称和糖苷键的结构类型。解答：透明质酸的两个重复单位是由B D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖通过B解答-1

41、,3糖苷键连接而成。6.纤维素和淀粉都是由1-4糖苷键连接的D葡萄糖聚合物，相对分子质量也相当， 但它们在物理性质上有很大 的不同， 请问是什么结构特点造成它们在物理性质上的如 此差别解释它们各自性质的生物学优点。 解答：淀粉是葡 萄糖聚合物，既有 a-1 4糖苷键，也有a-1, 6糖苷键，为多分支 解答结构。直链淀粉分子的空间构象是卷曲成螺 旋形的 ,每一回转为 6 个葡萄糖基 ,淀粉在水溶 液中混悬时 就形成这种螺旋圈。支链淀粉分子中除有a-(1,4)糖苷键的糖链外，还有a-(1,6)糖苷键连接的分支处，每一分支平均约含 2030个葡萄糖基，各分支也都是卷曲成螺旋。螺旋构象是碘显色反应的必

42、要条件。碘分子进入淀粉螺旋圈内，糖游离 羟基成为电子 供体，碘分子成为电子受体，形成淀粉碘络 合物，呈现颜色。其颜色与糖链的长度有关。 当链长小于 6 个葡萄糖基时 ,不能形成一个螺旋圈 ,因而不能呈色。当平均 长度为 20 个葡萄糖基时呈红色 ,红糊精、无色糊精也因而 得名。大于 60 个葡萄糖基的直链淀粉呈蓝色。支 链淀粉 相对分子质量虽大，但分支单位的长度只有 2030 个葡萄 糖基，故与碘反应呈紫红色。纤维素虽然也是由 D-吡喃葡萄糖基构成，但它是以伕(1,4)糖苷键连接的一种没有分支的线性分子，它不卷曲成螺旋。纤维素分子的链与链间，能以 众多氢键像麻绳样拧在一 起，构成坚硬的不溶于水

43、的纤维 状高分子(也称纤维素微晶束) ，构成植物的细胞壁。人和 哺乳动物体内没有纤维素酶 (cellulase)，因此不能将纤维素水 解成葡萄糖。虽然纤维素 不能作为人类的营养物 ,但人类食 品中必须含纤维素。因为它可以促进胃肠蠕动、 促进消化 和 排便。7说明下列糖所含单糖的种类、糖苷键的类型及有无还原性 （ 1）纤维二糖 （ 2）麦芽糖（3）龙胆二糖（ 4）海藻糖（ 5）蔗糖（ 6）乳糖解答：（1）纤维二糖含葡萄糖，B-1, 4糖苷键，有还原 性。 解答 （2）麦芽糖含葡萄糖，a1, 4糖苷键，有还 原性。（3）龙 胆二糖含葡萄糖，B-1, 6糖苷键，有还 原性。（4）海藻糖含葡萄糖，al

44、, 1糖苷键， 无还原 性。（5）蔗糖含葡萄糖和果糖，al, 2糖苷键，无还原性。（6）乳糖含葡萄糖和半乳糖，a1, 4糖苷键，有还原性。8人的红细胞质膜上结合着一个寡糖链,对细胞的识别起重要作用。被称为抗原决定基 团。根据不同的抗原组合 ,人的 血型主要分为 A型、B型、AB型和 0型4类。不同血 型的 血液互相混合将发生凝血 ,危及生命。红细胞 N Ac GlcB 1,4Gala 1, 2 Fuc a 1, 3X 已知 4 种血型的差异仅在 X 位组成成分的不同。 请指出 不同血型 （A 型、 B 型、 AB 型、 0 型） X 位的糖基名称。解答：A型X位是N-乙酰氨基-a-D-半乳糖；

45、 解答B型 X位是aD-半乳糖；AB型X位兼有 A型和B型的糖； O 型 X 位是空的。9.请写出下列结构式：(1) a L岩藻糖(3) N S酰氨基一a D-葡萄糖解答：略。10 .随着分子生物学的飞速发展，生命的奥秘正在逐渐被揭 示。大量的研究已表明，各 种错综复杂的生命现象的产生 和疾病的形成过程均与糖蛋白的糖链有关。请阅读相关资 料， 列举你感兴趣的糖的生物学功能。 解答：略。 解答(2) a 一 D半乳糖 N 一乙酰氨基一 a D半乳糖胺五 脂类化合物和生物膜1.简述脂质的结构特点和生物学作用。 解答： (1)脂质的结 构特点：脂质是生物体内一大类不溶于水而易溶于非极性有 机溶剂的

46、有机化合物， 大多数脂质的化学本质是脂肪酸和 醇形成的酯及其衍生物。 脂肪酸多为 4 碳以 上的长链一 元羧酸，醇成分包括甘油、鞘氨醇、高级一元醇和固醇。脂 质的元素组成主要为 碳、氢、氧，此外还有氮、磷、硫等。 (2)脂质的生物学作用：脂质具有许多重要的生物功能。脂肪 是生物体贮存能量的主要形 式， 脂肪酸是生物体的重要代谢燃料， 生物体表面的脂质有防止机械损伤和防止热量散 发的作用。磷脂、糖脂、固醇等是构成生物膜的重要物质， 它们作为细胞表面的组成成分与细胞的识别、 物种的特异性以及组织免疫性等有密切的关系。有些脂质 （如萜类化合物和固醇等） 还具有重要生物活性，具有维生素、激素 等生物功

47、能。脂质在生物体中还常以共价键或通过 次级键 与其他生物分子结合形成各种复合物，如糖脂、脂蛋白等重 要的生物大分子物质。2概述脂肪酸的结构和性质。 解答： （1）脂肪酸的结构：脂 肪酸分子为一条长的烃链（“尾”）和一个末端羧基（“头”）解 答组成的羧酸。烃链以线性为主，分枝或环状的为数甚少。 根据烃链是否饱和，可将脂肪酸分 为饱和脂肪酸和不饱和 脂肪酸。 （2）脂肪酸的性质： 脂肪酸的物理性质取决于脂 肪酸烃链的长度和不饱和程度。 烃链越长，非极性越强， 溶 解度也就越低。 脂肪酸的熔点也受脂肪酸烃链的长度和 不饱和程度的影响。_ 脂肪酸中的双键极易被强氧化剂，H2O2、如 超氧阴离子自由基

48、02 ）羟自由基0H） （、 （ 等所氧化， 因此含不饱和脂肪酸丰富的生物膜容易发生脂 质过氧化作用， 从而继发引起膜蛋 白氧化，严重影响膜的 结构和功能。脂肪酸盐属于极性脂质，具有亲水基（电 离的羧基）和疏水基（长的烃链），是典型 的两亲性化合 物，属于离子型去污剂。 必需脂肪酸中的亚油酸和亚麻 酸可直接从植物食物中获得，花生四烯酸则可由亚油酸 在 体内转变而来。它们是前列腺素、血栓噁烷和白三烯等生物 活性物质的前体。3概述磷脂、糖脂和固醇类的结构、性质和生物学作用解答：解答I.磷脂包括甘油磷脂和鞘磷脂两类，它们主 要参与细胞膜系统的组成，少量存在于其 他部位。 （1） 甘油 磷脂的结构：甘

49、油磷脂是由 sn-甘油-3-磷酸衍生而来，分子 中甘油的两个醇羟基 与脂肪酸成酯，第三个醇羟基与磷酸 成酯或磷酸再与其他含羟基的物质 （如胆碱、乙醇胺、 丝氨 酸等醇类衍生物 ）结合成酯。 （2）甘油磷脂的理化性质：物理性质：甘油磷脂脂双分子层结构在水中处于热力学的稳 定状态，构成生物膜的结 构基本特征之一 化学性质： a. 水解作用：在弱碱溶液中，甘油磷脂水解产生脂肪酸的金属 盐。如果用 强碱水解，甘油磷脂水解生成脂肪酸盐、醇（X OH ）和磷酸甘油。b.氧化作用：与三酰 甘油相似，甘 油磷脂中所含的不饱和脂肪酸在空气中能被氧化生成过氧 化物， 最终形成黑色 过氧化物的聚合物。 c. 酶解作

50、用：甘 油磷脂可被各种磷脂酶（ PLA ）专一水解。 （3）鞘磷脂即鞘 氨醇磷脂，在高等动物的脑髓鞘和红细胞膜中特别丰富，也存在于许多植 物种子中。鞘磷脂由鞘氨醇、脂肪酸和磷脂 酰胆碱(少数磷脂酰乙醇胺)组成。 n .糖脂是指糖基通过 其半缩醛羟基以糖苷键与脂质连接的化合物。 糖脂可分为 鞘糖脂、 甘油糖脂以及由固醇衍生的糖脂，其中鞘糖脂和 甘油糖脂是膜脂的主要成分。(1) 鞘糖脂是神经酰胺的 1 位羟基被糖基化形成的糖苷化合物。依据糖基是否含有唾液 酸或硫酸基成分，鞘糖脂又可分为中性鞘糖脂和酸性鞘糖 脂。中性鞘糖脂：又称脑苷脂，是由神经酰胺的C1上的羟基与一单糖分子(半乳糖、葡 萄糖等)以糖

51、苷键结合 而成，不含唾液酸成分。中性鞘糖脂一般为白色粉状物，不 溶于水、 乙醚，溶于热乙醇、热丙酮、吡啶及苯等，性质 稳定，不被皂化。它们不仅是血型抗原，而 且与组织和器 官的特异性，细胞之间的识别有关。酸性鞘糖脂：糖基部分含有唾液酸或硫酸基的鞘糖脂称为酸性鞘糖脂。糖基部 分含有 唾液酸的鞘糖脂常称神经节苷脂， 是最复杂的一类 甘油鞘脂， 由神经酰胺与结构复杂的寡糖 结合而成，是大 脑灰质细胞膜的组分之一，也存在于脾、肾及其他器官中。 (2)甘油糖脂是糖基二酰甘油， 它是二酰甘油分子 sn-3 位上 的羟基与糖基以糖苷键连接 而成。 甘油糖脂主要存在于植 物和微生物中。 植物的叶绿体和微生物的

52、质膜含有大量的 甘油 糖脂。它可能在神经髓鞘形成中起作用。川.固醇类也称甾类，所有固醇类化合物都是以环戊烷多氢菲为核心结构，因羟基的 构型不同，可有a及B两型。胆固醇（也称 胆甾醇 ）是一种重要的甾醇类物质， 一种环戊烷多氢菲的衍生 物。是动物 组织中含量最丰富的固醇类化合物，有游离型 和酯型两种形式。存在于一切动物细胞中，以 脑、神经组 织及肾上腺中含量特别丰富，其次为肝、肾、脾和皮肤及脂 肪组织。4生物膜由哪些脂质化合物组成的？各有何理化性质？解答：组成生物膜的脂质主要包括磷脂、固醇及糖脂。解答（1）磷脂： 甘油磷脂，是生物膜的主要成分。是由sn-甘油-3-磷酸分子中甘油的两个醇羟基与脂肪

53、酸成酯，第三个醇羟基与磷酸成酯或磷酸再与其他含羟基的物质（如胆碱、乙醇胺、丝氨酸等醇类衍生物 ）结合成酯。 物理性质：纯的 甘油磷脂是白色蜡状固体，大多溶于含少量水的非极性溶剂 中。用氯仿 甲醇混合溶剂很容易将甘油磷脂从组织中提 取出来。 这类化合物又称为两性脂质或称极性 脂质，具有 极性头和非极性尾两个部分。化学性质：a.水解作用：在弱碱溶液中， 甘油磷脂水解产生脂肪酸的金属盐。 强碱水 解，生成脂肪酸盐、醇（X OH）和磷酸甘油。b.氧化作用： 甘油磷脂中所含的不饱和脂肪酸 在空气中能被氧化生成过 氧化物，最终形成黑色过氧化物的聚合物。c.酶解作用：甘油磷 脂可被各种磷脂酶（PLA）专一水

54、解。鞘磷脂（SM）:鞘磷脂由鞘氨醇、脂肪酸和磷脂酰胆碱（少数为磷脂酰乙醇 胺）组成。 鞘磷脂为白色晶体，性质稳定，不溶于丙酮和 乙醚，而溶于热乙醇中，具两性解离性质。（ 2）固醇：高等植物的固醇主要为谷甾醇和豆甾醇。动物细胞膜的固醇最 多的是胆固 醇。 胆固醇分子的一端有一极性头部基团羟基 因而亲水， 分子的另一端具有羟链及固醇的环 状结构而疏 水。因此固醇与磷脂类化合物相似也属于两性分子。 物理 性质：胆固醇为白色斜方晶体， 无味、无臭，熔点为148.5°C, 高度真空条件下能 被蒸馏。胆固醇不溶于水，易溶于乙醚、 氯仿、苯、丙酮、热乙醇、醋酸乙酯及胆汁酸盐溶 液中。 介电常数高，

55、不导电。 化学性质：胆固醇 C3 上的羟基易 与高级脂肪酸 （如软脂酸、 硬脂酸及油酸等 ）结合形成 胆固醇 酯。 胆固醇的双键可与氢、 溴、 碘等发生加成反应。 胆 固醇可被氧化成一系列衍生物。 胆固醇易与毛地黄糖苷结 合而沉淀， 这一特性可以用于胆固醇的定量测定。 胆固醇 的氯仿溶 液与醋酸酐和浓硫酸反应，产生蓝绿色（Liebermann Burchar（反应）。 （3）糖脂：是指糖基通过 其半缩醛羟基以糖苷键与脂质连接的化合物。鞘糖脂和甘油 糖脂是膜脂的主要成分。 鞘糖脂： 依据糖基是否含有唾 液酸或硫酸基成分， 鞘糖脂又可分为中性鞘糖脂和酸性 鞘 糖脂。中性鞘糖脂，是非极性的。鞘糖脂的

56、疏水尾部伸入膜 的脂双层，极性糖基露在细胞 表面，它们不仅是血型抗原，而且与组织和器官的特异性，细胞之间的识别有关。中性鞘 糖 脂一般为白色粉状物，不溶于水、乙醚溶于热乙醇、 热丙酮、吡啶及苯等，性质稳定，不 被皂化。酸性鞘糖脂， 糖基部分含有唾液酸或硫酸基的鞘糖脂。糖基部分含有唾液 酸的鞘糖 脂常称神经节苷脂，不溶于乙醚、丙酮，微溶于 乙醇，易溶于氯仿和乙醇的混合液。甘油糖脂：是糖基二酰甘油，它是二酰甘油分子 sn-3 位上的羟基与糖基以糖 苷键连接而成。 甘油糖脂主要存在于植物和微生物中。 植 物的叶绿体和微生物的质膜含有大量的甘 油糖脂。在哺乳 动物组织中也检测出了半乳糖基甘油酯，可能在

57、神经髓鞘形 成中起作用。5何为必需脂肪酸？哺乳动物体内所需的必需脂肪酸都有 哪些？ 解答：哺乳动物体内能够自身合成饱和及单不饱和 脂肪酸，但不能合成机体必需的亚油 解答 酸、亚麻酸和花 生四烯酸等多不饱和脂肪酸。我们将这些机体生长必需的而 自身不能合成， 必须由膳食提供的脂肪酸称为必需脂肪酸。6何为生物膜？主要组成是什么？各有何作用？解答：任何细胞都以一层薄膜将其内容物与环境分开，这层薄膜称为 细胞的质膜。此外 解答 大多数细胞中还有许多内膜系统， 它们组成具有各种特定功能的亚细胞结构和细胞器如细胞核、线粒体、内质网、溶酶体、高尔基体、过氧化酶体等， 在植物细胞中还有叶绿体。所有 这些膜虽然组分和功能不 同，但在电镜下却表现出大体相同的形态、厚度69nm的3 片层结构。这样细胞的外周膜和内膜系统称为 “生物膜” 。 （1）膜脂：其中磷脂、糖脂、固醇等脂质物质都属于两性 分子。当磷脂分散于水相时， 分子的疏水尾部倾向于聚集 在一起，避开水相，而亲水头部暴露在水相，形成具有双分 子层结构的封闭囊泡，通称为脂质体。脂质体的