第十四章激素的测定(共8页)

1、精选优质文档-倾情为你奉上第十六章 内分泌功能检验第一节 概 述一、 激素的概念与分类（一）概念 是由内分泌细胞合成并分泌，随血液循环于全身，对特定的组织或细胞产生生物效应的一类活性物质。广义的内分泌包括：1.内分泌腺分泌的激素进入血液至全身，发挥远距离的调节作用。2.旁分泌 作用于邻近的靶细胞，发挥局部调节作用。3.自分泌 经细胞分泌至细胞外后，又经本身的膜受体作用于自身。（二）分类 按化学本质的不同分为四类1.肽类和蛋白质 下丘脑激素、胰岛激素、甲状旁腺素、胃肠道激素。2.氨基酸衍生物 甲状腺素、肾上腺髓质激素、松果体激素。3.类固醇 肾上腺皮质激素、性激素。4.脂肪酸衍生物 前列腺素二、

2、激素分泌的调节体内的各种激素是在神经系统的参与下，通过复杂而精细的调节机制，保持在与机体发育阶段及功能状态相适应的水平。 高级中枢、应激等其他刺激下丘脑超短反馈调节激素短 反 馈长 反 馈腺垂体调节激素内分泌腺或细胞 功能激素 靶组织三、激素的作用机制（一）通过膜受体的作用机制 肽、蛋白质、肾上腺髓质激素通过膜受体发挥作用。1. 激素与膜受体结合的特点：（1）高度专一性 激素只能与它相应的受体结合。（2）高度亲和性 激素与受体有很强的亲和力，激素浓度很低亦能与受体结合。（3）可逆性结合 激素与受体是非共价键结合。（4）量-效成正比 激素与受体结合量与激素效应成正比。（5）类似物的竞争性 与激素

3、相似的化合物可竞争性地与受体结合而抑制激素效应。2. 作用机制大部分含氮激素（肽类、蛋白质类、儿茶酚胺类） 激素-膜受体复合物 G蛋白活化 激活AC 细胞内cAMP 激活cAMP蛋白激酶（A激酶） 某些蛋白质和酶磷酸化 变构和功能改变 生物效应。cGMP也是细胞内传递激素信息的第二信使，但生物效应与cAMP相反。（二）通过细胞内受体的作用机制 类固醇激素、甲状腺激素。疏水性较强。类固醇激素 通过细胞膜进入细胞内 激素-受体复合物 进入细胞核 与染色体中某基因结合 基因活化 转录出特异mRNA 释放到胞浆 翻译出相应的功能性蛋白质和酶蛋白 生物效应。四、激素测定方法的选择和评价（一）常用测定方法

4、内分泌疾病的临床生化诊断方法主要有以下三类：1.激素调节的生理、生化过程的检测 甲状腺功能紊乱时测定基础代谢率，甲状旁腺功能紊乱时血钙测定。2. 直接检测体液激素或其代谢物的浓度 可对判断有无某种内分泌病提供有价值的客观指标，在内分泌病诊断中普遍应用。3. 动态功能试验 即应用对激素分泌的前述反馈调节系统中某一环节具有特异性刺激或抑制作用的药物、激素，分别测定使用前后相应靶激素水平动态变化。动态功能试验结合其他检查手段，对导致内分泌紊乱的病变部位（环节）及病变性质的诊断很有价值。（二）影响因素1.生物节律性变化2.年龄影响3.药物影响4.妊娠影响（三）临床应用评价任何一项实验的检验指标都有一定

5、的假性结果，即诊断的灵敏度和特异性都不可能为100%，因此，在实际工作中应遵循下列原则：1.充分了解各项指标的意义及其局限性。2.连续动态观察比一次测定结果的可靠性要高得多。3.多项指标的联合检测比单项检测可获得较高的阳性率。4.实验室内部应有严格的质量控制。5.实验室检测结果必须与临床信息结合才能做出正确诊断。第二节 甲状腺功能的测定一、甲状腺激素的代谢（一）甲状腺激素的化学 由甲状腺滤泡分泌，包括T4、T3，为酪氨酸含碘衍生物。（二）甲状腺激素的合成 包括聚碘、碘活化、酪氨酸碘化等三个过程。1. 聚碘 碘是合成甲状腺激素的必需元素，每人每天需从食物中获得50g碘，甲状腺从血液中摄取碘的能力

6、很强，甲状腺中碘的浓、度比血浆搞5倍，甲亢时可高数百倍。2. 碘的活化 食物碘在肠道经还原成I而被吸收，被甲状腺上皮细胞摄取后，经过氧化物酶作用，以H2O2为氧化剂，生成活性碘。活性碘的形式可能是I2、I*或I+，尚未定论。3. 酪氨酸的碘化和T3、 T4的合成 此过程在甲状腺球蛋白分子上进行，甲状腺球蛋白分子中含有上百个酪氨酸残基，约18%可被碘化，生成MIT和DIT，再经基团转移生成T3、 T4。（三）甲状腺激素的运输与降解 甲状腺球蛋白在TSH的刺激下与溶酶体融合，经蛋白酶水解，释放出T3、T4入血，T4为90%，T32%。但活性比大得多，甲状腺激素的总活性约2/3由T3完成。T3、T4

7、在血浆中主要与甲状腺结合球蛋白（TBG）结合而运输，其次是前白蛋白和白蛋白，测定血浆蛋白结合碘（PBI），可反映甲状腺激素的量。在肝脏，甲状腺激素与GA结合，随胆汁排入肠道，部分被重吸收，形成肠肝循环，未吸收的由粪便排除部分由尿排出。在组织，经脱氨基，脱羧基氧化产生四碘甲腺乙酸和三碘甲腺乙酸。（四）甲状腺激素的主要生理功能 十分广泛而强烈，能促进脂肪、糖、蛋白质的氧化，促进幼小动物的生长、发育，增加基础代谢率和耗氧量。当甲状腺激素缺乏时，生长、发育受阻，甚至发生永久性中枢神经发育不全，称为呆小症。二、甲状腺激素的测定方法甲状腺功能试验项目很多，有间接的，也有直接的，如早年测定的血清蛋白结合碘（

8、PBI），60年代竞争性蛋白结合分析法（CPBA），70年代放射免疫分析法（RIA），近年来的酶联免疫分析法（ELISA）。（一）血清总甲状腺激素（TT4）测定 TT4包括结合形式的99.95%，游离状态的0.05%，常用测定方法RIA法。利用同位素标记的*T4与血清中未标记的T4对应抗体的竞争结合作用。 *T4 Ab*T4Ab T4 T4Ab当血清中未标记的抗原（T4）含量高，则T4Ab复合物生成量增加，而*T4Ab复合物生成量减少，故*T4Ab复合物生成量与血清T4含量呈一定的函数关系，测定*T4Ab复合物的放射性，可推算出的含量。方法具有灵敏度、特异性、精密度高等特点。【正常参考值】64

9、.4154.5nmol/L（二）血清游离甲状腺素（FT4）测定 FT4才具有生理活性，FT4水平能真实地反映甲状腺的功能。血清测定分两步。1. 用蛋白沉淀剂将血清蛋白沉淀（包括与T4结合者）沉淀去除。2. 用RIA法测定上清夜中T4（即FT4）的含量。【正常参考值】10.331.0pmol/L三、甲状腺功能紊乱常见的是甲亢，其次是甲状腺功能减退。（一）甲亢 甲状腺功能增高，血中甲状腺激素增高，按病因不同可分为几种，最常见的是格雷夫斯病（Graves disease），又称毒性弥漫性甲状腺肿。1. 临床表现 典型病例，高代谢症候群（产热、散热增多，多汗；食欲好，但消瘦；疲乏，情绪激动；失眠），甲

10、状腺肿大，突眼症。2. 实验诊断 基础代谢铝测定，甲状腺131I摄取率测定，血清甲状腺激素测定。（二）甲状腺功能减退 甲状腺激素合成、分泌不足，按发病年龄可分为三型。呆小症（克汀病），始于胎儿、新生儿。幼年型，始于性发育前儿童。成年型，始于成人。1. 临床表现 取决于起病时间，成人缺乏甲状腺激素主要影响代谢，全身代谢减慢，基础代谢率，耗O2、产热减少，进而影响脏器功能。胎儿、婴儿缺乏甲状腺激素，除全身代谢减慢外，由于神经系统、骨骼系统生长发育受阻，患者身材矮小，智力低下，严重者称为呆小症。2. 实验诊断 血清甲状腺激素测定，TT4 、FT4均第三节 肾上腺功能测定肾上腺由皮质和髓质组成，各分泌

11、结构、性质、功能完全不同的激素。一、肾上腺皮质功能测定肾上腺皮质结构分为三层，由外向内，球状带、束状带、网状带球状带 醛固酮 盐皮质激素（调节水盐代谢）肾上腺皮质激素 束状带 皮质醇 （调节糖、脂、蛋白质代谢）网状带 性激素它们都是胆固醇的衍生物，故称为类固醇激素，根据母核上所带的侧链的不同。 21C 孕烷 肾上腺皮质激素母体环戊烷多氢菲 19C 雄烷 雄性激素母体18C 雌烷 雌激素母体（一）肾上腺皮质激素的代谢1.合成 以胆固醇为原料，在肾上腺皮质细胞的线粒体和内质网中合成，基本过程： 胆固醇侧连断裂（C20），生成孕烯酮醇。 A环3-羟基氧化为3-酮基，双键位移。 17位、21位、11位

12、的羟化。2.运输、灭活、排泄 皮质激素分泌入血，以两种形式存在，游离型5%，结合型95%。大部分与运皮质激素蛋白（CBG）结合，少部分与清蛋白结合。灭活主要在肝脏进行，经羟化、还原与GA结合等反应，使其丧失活性，增加水溶性，由肾排出。代谢产物有17-羟类固醇（17位保留二羟基丙酮结构），17-酮类固醇（17位侧链断裂，生成酮基）。3.对物质代谢的作用 糖皮质激素，促进糖异生，Gn合成，抑制糖氧化，血糖，脂肪动员增强，抑制外周组织蛋白合成（分解增强），促进肝脏蛋白质的合成。盐皮质激素，保钠排钾，增加细胞外液容量。（二）性激素性激素雄性激素 睾酮，二氢睾酮（睾丸间质细胞合成），雄烯三酮，雄烯二酮，

13、脱氢异雄酮（肾皮质网状带合成）孕激素 孕酮雌性激素雌激素 雌酮，雌二醇，雌三醇它们都是以胆固醇为原料合成，但由于性腺缺乏11、18、21羟化酶，故只能合成性激素，而不能合成皮质激素。（三）类固醇激素的测定方法1.血浆类固醇激素的测定 血浆或血清皮质激素的测定可直接反映肾上腺皮质的分泌功能，由于血浆中皮质激素含量很低，一般采用灵敏度较高的荧光法和放免法测定。（1）荧光法测定血浆皮质醇 含C11羟基的皮质醇经硫酸处理可转变为具有特殊荧光的衍生物。激发波长470475nm，荧光波长520530nm。方法：抽提 氯仿。碱洗 去除酚类固醇（酸性类固醇）和碱溶性杂质。荧光测定。价廉，稳定，但试剂腐蚀性大，

14、干扰因素多，对实验环境要求高。（2）放射免疫法 皮质醇经转变为皮质醇-21-琥珀酸衍生物，再与牛血清白蛋白结合制成人工抗原，免疫动物产生抗体，用3H-皮质醇为标记物，进行测定。市场有试剂盒供应，使用方便，但需特殊仪器（液体闪烁计数仪）。血浆皮质醇有昼夜节律，上午8时最高，午夜12时最低。【正常参考值】成人上午8时，40200g/L1.尿类固醇激素及其代谢产物的测定（1）尿17-酮类固醇测定 凡在C17没有侧链，而仅有一个酮基的称为17-酮类固醇（17-KS），主要包括雄酮、异雄酮、脱氢异雄酮、本胆烷醇酮、雌酮。除雌酮是酸性类固醇外，其余为中性类固醇。男性2/3来自肾上腺皮质，1/3来自睾丸。女

15、性则全部来自肾上腺皮质。尿中17-KS存在形式有两种，结合型（与GA或H2SO4结合）和游离型。测定方法：常用的是Zimmermann反应 水解 浓盐酸加热或酶，结合型游离型。 抽提 乙醚或氯仿。 碱化 NaOH，去除酸性类固醇和酚类。 显色 17-KS中的酮-亚甲基（COCH2）与间二硝基苯作用生成紫红色化合物。【正常参考值】男性27.876.3mol/24h 女性20.852.0mol/24h精密度较好，但灵敏度低，费时，干扰物多。【临床意义】17-KS，肾上腺皮质功能亢进（库欣综合症），睾丸间质细胞瘤，垂体前叶功能亢进。17-KS，肾上腺皮质功能减退（阿狄森病）垂体前叶功能减退（2）尿1

16、7-羟类固醇（17-OHCS）测定 结构特点C17、C21有羟基，C20有酮基。主要包括皮质醇、皮质素及代谢产物，四氢皮质醇、四氢皮质素等。测定方法：常用的是Porter-Silber反应 抽提 氯仿-正丁醇（10：1），同时加入H2SO4降低溶解度，向有机相转移。 显色 与苯肼在硫酸溶液中反应。生成黄色的苯腙。410nm【正常参考值】男性 8.327.6mol/24h 女性 5.522.1mol/24h条件简单，试剂易得，特异性差，干扰多。【临床意义】 17-OHCS，肾上腺皮质功能亢进，肾上腺皮质肿瘤及增生，肥胖，甲亢。 17-OHCS，肾上腺皮质功能减退。（四）肾上腺皮质功能紊乱1.皮质

17、醇增多症 又称Cushing病（库欣综合症）二、肾上腺髓质功能测定是肾上腺素（Ad）、去甲肾上腺素（NA）、多巴胺（DA）的总称。在它们分子中都含有儿茶酚和乙胺的基本结构。故统称为儿茶酚胺。Ad主要由肾上腺髓质分泌，NA主要由交感神经末稍分泌，DA主要存在于脑内纹状体。（一）儿茶酚胺的代谢甲基化羟化脱羧羟化1.合成： 酪氨酸多巴多巴胺NAAd2.分解：主要酶是MAO和COMT。COMTMAO变肾上腺素变去甲肾上腺素Ad或NA 香草扁桃酸（VMA）COMTMAO3，4-二羟扁桃酸DA分解代谢的终产物是高香草酸（HVA）（二）儿茶酚胺的测定测定样品是血清和尿，采血应在情绪稳定和安静状态下进行，2天前停止饮用兴奋性饮料。如：茶、咖啡等。1.血浆儿茶酚胺的测定 常用方法荧光法、HPLC、放射酶学分析。乙二胺（EDA）法 血浆中Ad和NA经氧化铝吸附，阳离子交换树脂纯化，在稀醋酸中Ad氧化成肾上腺素红，然后与EDA缩合、脱水、脱氢生成荧光物质。而NA可与两分子EDA缩合。Ad和NA的荧光产物有不同发射光谱，激发波长420nm，NA在510nm处荧光发射强度为Ad的一倍；在580nm处