生化鉴定类实验(共6页)

1、精选优质文档-倾情为你奉上生化鉴定类实验此类实验是利用物质的一些特性来鉴定该物质，因此物质的特性及常用的鉴定方法必须牢牢掌握。高巾生物学教材中相关的实验有：生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定；叶绿体中色素的提取和分离；DNA的粗提取与鉴定。中学阶段，最常用的提取、分离方法是利用各种物质溶解度的差异进行盐析或层析；最常用的鉴别（定）方法是利用各种物质特定的显色反应，此法应严格控制样品的量，和排除其他有关物质的干扰，最常用的定量方法是滴定法和比色法。、实验：生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定1实验原理：某些化学试剂能够使生物组织中的有关化合物，产生特定的颜色反应。还原糖斐林试剂砖红色沉淀脂肪苏

2、丹染液橘黄色显色反应脂肪苏丹染液红色蛋白质十双缩脲试剂紫色反应2方法步骤：还原糖的鉴定：选材制备组织样液鉴定样液。脂肪的鉴定：选材切片制作染色镜检鉴定。蛋白质的鉴定：选材制备样液鉴定样液。3注意事项：（1）本实验成功与否的关键在于实验材料的选择，为提高实验效果，应根据当地实际情况，精心选择含糖量较高，富含脂肪、蛋白质的生物组织或器官作为实验材料。选好实验材料，实验则成功了一半。（2）用于鉴定还原糖的生物组织，最好选含糖量较高，而组织颜色较浅，或近于白色的，如苹果和梨的果实。经试验比较，颜色反应的明显程度，依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。（3）用于鉴定脂肪的实验材料最好选择富含脂肪的种子，如

3、花生种子取其子叶，供实验用的花生种子必须提前浸泡34h（以宜于制作临时装片为准）。浸泡时间短了不容易成切片；浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形。（4）用于鉴定蛋白质的植物材料，应提前浸泡12d，便于研磨。（5）斐林试剂极不稳定，其甲液和乙液需分别配制、储存，使用时再临时混合均匀用于实验。（6）双缩脲试剂的使用，应先加试剂A，造成碱性环境，再加试剂B。（7）在可溶性糖的鉴定中，对试管中的溶液加热时，试管底部不要触及烧杯底部；试管口不要朝向实验者，以免溶液沸腾时冲出试管造成烫伤。（8）蛋白质的鉴定如果是用稀释液，浓度不能太大，以免实验后粘住试管壁，不易洗净。【例1】下列关于实验操作步骤的

4、叙述中，正确的是A用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定B脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色的脂肪滴C鉴定可溶性还原糖，要加入斐林试剂甲液摇匀后，再加入乙液D用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂A液与B液要混合均匀后，再加入含样品的试管中，且必须现混现用解析本题在于考查学生的操作是否规范、正确，是否注意了不同鉴定实验之间的差别。斐林试剂与双缩脲试剂所用漆质相同，且所用氢氧化钠溶液的浓度相同，但二者所用的硫酸铜的质量浓度不同。鉴定可溶性还原糖时，是甲、乙液现混现用，一次加入。而鉴定蛋白质时要先加A液，再加B液。还原糖、蛋白质的颜色反应走试剂与其发生化学反应的结果，足肉眼可

5、见的。脂肪的鉴定中，由于脂肪滴小且分散在细胞中，所以需要借助于显微镜观察。答案B变式1将面包围包在纱布中在清水中搓洗，鉴定黏留在纱布上的黏稠物质和洗出的白浆用的试剂分别是 A碘液、苏丹溶液B双缩脲试剂、碘液C斐林试剂、苏丹溶液 D碘液、斐林试剂二、实验：叶绿体中色素的提取和分离1实验原理：叶绿体色素能溶解在有机溶剂中，如丙酮；叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散的速度也不同。2方法步骤：提取色素制滤纸条滤液画线纸上层析观察结果。3注意事项：（1）要选取新鲜色深的叶片作实验材料，以便使色素液中含有较多的色素。（2）研磨时一定要快速充分。（3）过滤时要用脱脂棉（或单层尼龙纱布），

6、不能用滤纸。（4）滤液细线画得要细而直，否则，在层析时会导致色素带的重叠。要把滤液细线画细画直。应该做到：毛细吸管的管口要细要齐，画线时，速度要快且均匀。（5）画滤液细线时，要重复画23次，以便提高色素细线中色素的含量。（6）层析时不能让滤液细线接触到层析液，因为色素容易溶解于层析液中，导致色素带不清晰。【例2】下列为“叶绿体色素提取和分离”实验：（1）在“叶绿体色素的提取和分离实验”中，将叶绿体色素进行分离的方法名称是 （2）某学生在实验过程中将画有滤液细线的滤纸条（已重复几次画线）浸入层折液中，几分钟后取出观察，发现在滤纸条上无色素分带现象，而其他用同一滤液做实验的同学的滤纸条上却色素分带

7、明显。其实验失败的原因可能是 。（3）观察叶绿体色素的荧光现象，可将盛有叶绿体色素溶液的试管，让光线照射。如果置叶绿体色素溶液于 光下，则呈绿色；如置于 光下，则溶液呈现红色。解析此题主要考查叶绿体色素提取和分离实验的知识。用丙酮溶解法可以提取叶绿体色素，用纸层析法可以分离叶绿体色素，分离色素时，如果滤液细线浸入层析液中，叶绿体色素就会溶解在层析液中而无法分离。与物理学的反射和透射知识相联系，就可以观察到叶绿体色素的不同的颜色。答案（1）纸层析法 （2）滤液细线浸入层析液（3）透射；反射变式2某同学在做“叶绿体中色素的提取和分离”实验时，操作情况如下所述，结果实验失败，请指出其错误所在。（1）

8、将5g新鲜菠菜叶片放入研钵中，加入丙酮、石英砂、碳酸钙，快速充分研磨，然后按要求过滤。（2）用毛细吸管吸取少量滤液，沿着笔线处小心均匀地画出一条滤液细线，并连续迅速地重复画23次。（3）把画好细线的滤液条插入层折液中，并不断摇晃，以求加快色素在滤纸条上的扩散。三、实验：DNA的粗提取与鉴定1实验原理：DNA在氯化钠溶液中的溶解度，随着氯化钠浓度的变化而变化；DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液；DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色。2方法步骤：提取细胞核物质溶解核内的DNA析出DNA黏稠物滤取DNA黏稠物DNA黏稠物再溶解过滤含DNA的氯化钠溶液提取含杂质较少的DNADN

9、A的鉴定。3注意事项：（1）血液量充足（不能用哺乳动物的血细胞）。（2）血细胞液加水后，必须充分搅拌，让血细胞充分破碎，溶解出DNA。（3）用NaCl溶液析出DNA时，注意控制温度，NaCl溶液和血细胞滤液要混合均匀。（4）所用酒精要充分预冷，提取DNA丝状物的方法是缓缓旋转玻棒。（5）盛放鸡血细胞液的容器等最好使用塑料制的。【例3】在DNA的粗提取和鉴定的实验中，提取鸡血细胞的核物质和析出含DNA的黏稠物的操作过程中均用到蒸馏水，其作用在于 A前者用来溶解血细胞，后者用来溶解DNAB前者使血细胞吸水破裂，后者用来稀释NaCl溶液C前者用来分离细胞核与细胞质，后者用来提取DNAD前者使DNA从

10、核中分离出来，后者使DNA析出解析此题主要考查DNA的粗提取实验的知识。第一次加蒸馏水的作用是使血细胞过度吸水而破裂，以便使核内物质释放；第二次加适量蒸馏水，是为了降低氯化钠浓度，使DNA因溶解度达到最小而析出。答案D变式3在DNA粗提取实验中，有两次DNA的沉淀析出，其依据的原理是 DNA在氯化钠的浓度为014 mol·L-l时溶解度最低 DNA在95的酒精中能沉淀析出A两次都是B两次都是C第一次是，第二次是D第一次是，第二次是变式4下图所示为关于“DNA的粗提取和物理性状观察”实验。诗据图回答下列问题：（1）DNA在氯化钠溶液中溶解度，随氯化钠而改变，当氯化钠物质的量浓度为014

11、 mol·L-l时，最低，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA 。（2）在下图中图A所示的实验步骤中加蒸馏水的目的是 ；通过图B所示的步骤取得滤液，再在溶液中加入2 mol·L-lNaC1溶液的目的是 ；图中C所示的实验步骤中加蒸馏水的目的是 。将制备好的鸡血细胞液5 mL10 mL，注入到50 mL烧杯中，向烧杯中加入20 mL蒸馏水的目的是 。（3）在制鸡血细胞液的过程中，加入的抗凝剂是变式5DNA在氯化钠溶液中的溶解度有二重性，随着NaCl溶液浓度的变化而变化。（1）请在下列浓度的NaCl溶液中，选出能使DNA析出最彻底的一种和溶解度最高的一种 A014 mol·

12、;L-l B2 mol·L-lC015 mol·L-l D03 mol·L-l（2）欲使溶有DNA的2 mo1·L-l的NaCl溶液中的DNA析出，需降低NaCl溶液的浓度，最有效的方法是 A加蒸馏水 B加矿泉水C加清水 D加生理盐水（3）DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质却可以溶于酒精溶液，利用这一原理可以 ，可以推测溶于酒精的物质中可能有 。（4）利用DNA遇 呈蓝色的特性，将该物质作为鉴定 的试剂。其实验过程要点是向放有 的试管中加入4 mL的 。混合均匀后，将试管置于 5 min，待试管，观察试管中溶液颜色的变化。这个实验说明DNA耐 温，

13、前次温度有利于，后次温度则有利于DNA的1（2004年江苏高考题）根据生物组织中的有机物与某些化学试剂相互作用能产生颜色反应的原理，可以鉴定生物组织中某些有机物的存在。请填写下表中的空格。2（2004年江苏高考题）鉴定DNA时，一般先将被鉴定物加入到物质的量浓度为0015 mol·L-l的Nacl溶液的试管中，搅拌后，再加入 试剂，混合后将其置于沸水中加热5 min。待试管冷却后，若其中溶液颜色为 ，而对照组试管中溶液为无色，则可确定被鉴定物为DNA。3（2003年新课程高考理综题）在过氧化氢酶溶液中加入双缩脲试剂，其结果应该是 A浅蓝色 B砖红色 C绿色 D紫色4（2003年江苏高

14、考生物试题）分别在A、B、C三个研钵中加2g剪碎的新鲜菠菜绿叶，并按下表所示添加试剂，经研磨、过滤得到三种不同颜色的溶液，即：深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“”表示加；“”表示不加。试回答：（1）A处理得到的溶液颜色是 ，原因是（2）B处理得到的溶液颜色是 ，原因是（3）C处理得到的溶液颜色是 ，原因是5（2001年高考理综全国卷）下列关于实验的描述中，正确的是 A将在蔗糖溶液中已发生质壁分离的洋葱表皮细胞转到更高浓度的蔗糖溶液中，则发生质壁分离复原B将斐林试剂加入到蔗糖溶液中，加热后出现砖红色沉淀C将肝脏研磨液煮沸冷却后，加入到过氧化氢酶溶液中立即出现大量气泡D将双缩脲试剂加入到蛋

15、清稀释液中，溶液变成紫色选择题：每小姐仅有一个选项最符合姐菠。1制备鸡血细胞液的过程中，要除去上清液的主要原因是 A上清液中存在有毒物质B上清液中的某些成分能与DNA结合成复合物CDNA分子不存在于上清液中D上清液中水分含量高，影响DNA的提取2某同学收集到的叶绿体中色素提取液为淡绿色，产生该结果的可能原因是 研磨不充分，色素未充分提取出来丙酮加入量太多，稀释了色素提取液丙酮加得太少，色素未提取出来未加CaCO3粉末，叶绿素分子已被破坏A B C D3在实验过程中实验材料必须自始至终保持在生活状态下的是 观察植物细胞的有丝分裂 观察植物细胞的质壁分离和复原 观察黑藻细胞的细胞质流动叶绿体色素的

16、提取和分离A B C D4在DNA的粗提取和鉴定的实验中，提取舍杂质较少的DNA时必须用 A014 mo1·L-l的NaCl溶液B玻璃棒充分搅拌直至丝状物溶解C经充分冷却的95的酒精溶液D01g·mL-l的柠檬酸钠溶液5下列关于“叶绿体色素提取和分离”的实验描述中，不属于实验要求的是 A提取高等植物叶绿体中的色素B用纸层析法分离色素C了解各种色素的吸收光谱D验证叶绿体中所含色素的种类6下列对斐林试剂和双缩脲试剂的配方，叙述不正确的是 A都含有NaOH溶液和CuSO4溶液B斐林试剂的配制是将45滴005g·mL-l的CuSO4溶液滴入2mL-l0lg·mL

17、l的NaOH溶液中即成C双缩脲试剂是将34滴401g·mL-l的CuSO4溶液滴入2 mL01g·mL-l的NaOH溶液中混合而成D双缩脲试剂含有两种试剂：质量浓度为01g·mLl的NaOH溶液和质量浓度为001g·mL-l的CuSO4溶液为了便于提取鸡血细胞中的DNA，下列所采取的措施中，最恰当的是：向经抗凝剂处理的鸡血细胞液加入 A蒸馏水 BATPC03g·mL的蔗糖溶液 D二氧化碳8如图所示，将提取的叶绿体色素滤液装入试管中，让一束白光穿过该滤液后经三棱镜对光进行色散，哪条光谱的颜色明显减弱 A绿光 B红光C红橙光、蓝紫光 D黄光非选择题

18、1据药理研究，一种茅草的根内含有降血糖的因子及多种有益于健康的成分，某公司将它开发成一种保健饮料。该产品是否适用于糖尿病患者，生物学兴趣小组的同学以此作为研究课题。请你完成下面的实验鉴定报告：（1）实验目的：鉴定一种茅草的根是否含有还原糖和淀粉。（2）实验原理：还原糖可用 试剂检测，淀粉可用 来检测。（3）实验器材：一种茅草的根、所需试剂、刀片、载玻片、酒精灯、试管夹、火柴、滴管。（4）实验步骤：鉴定还原糖：鉴定淀粉：（5）实验现象： 。（6）结果分析： 。（7）在鉴定还原糖的实验操作中应注意2关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验结果的比较，最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请

19、据图回答问题：（1）鸡血细胞中红细胞 ，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中 细胞的数目较多，可以提供丰富的 。（2）实验前由老师制备好鸡血细胞液提供给同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因是（3）生活在牧羊区的人们，采取牛、羊和马的血较方便，若他们按实验要求完成实验步骤后，结果是，这是因为这些动物和人类一样 。但若改用动物的肝脏做实验材料，实验能顺利进行，这是因为（4）若选用动物肝脏做实验材料，在提取之间，最好增加 程序，使组织细胞更易分离。3某同学拿着几种材料回学校上实验课，准备：（1）用绿色叶片做可溶性还原糖的鉴定实验（2）用芝麻种子做脂肪鉴定实验（3）用新鲜的牛奶做蛋白质鉴定实验问：该同学能否在学校完成这些实验并得到结果？请说明理由。生化鉴定类实验参考答案1B2（1）未去除粗叶脉和将叶剪碎，降低了叶绿素的提取率。 （2）上一次滤液细线未干燥，即画下一次线，使滤液过粗或线上色素量较低。 （3）不断摇晃，导致层析液接触滤纸，溶解了色素。3C4（1）浓度变化；DNA的溶解度；析出 （2）使血细胞加速破裂，使DNA溶解；使溶液浓度降低，降低DNA的溶解度，使DNA析出；加速血细胞破裂（3）0lg·mLl的柠檬酸钠溶液5（1）AB （2）A