高效液相色谱法测定强力宁注射液中甘氨酸的含量

1、高效液相色谱法测定强力宁注射液中甘氨酸的含量摘要目的:对强力宁注射液中甘氨酸的含量测定方法研究。方法:采用高效液相色谱柱后衍生法，在以聚苯乙烯磺酸型强阳离子交换树脂为填充剂的色谱柱上，以枸橼酸钠缓冲液为流动相，流速0.5 ml.min-1，荧光检测器检测。以外标峰面积定量。结果:在进样20 l，824 g.ml-1范围内，甘氨酸峰面积与浓度呈良好的线性关系，r=0.999 9，平均回收率为100.6%，RSD0.8%(n=7)。结论:本法简便，结果可靠。关键词高效液相色谱法，强力宁注射液，甘氨酸Determination of glycine in Qianglining injection

2、by HPLCWei Liuzhen (Hubei Provincial Institute for Drug control,Wuhan 430064)Su Yuyong (Union Hospital of Tongji Medical University)ABSTRACTOBJECTIVE:To establish an HPLC method for the determination of glycine in Qianglining Injection. METHODS:Good resolution for seperation of glycine at strong cat

3、ion exchange resin having salfonic acid radical column can be achieved with sodium citrate as mobile phase flow rate 0.5 ml.min-1 when the column and kit temperature is 55.RESULTS:The calibration curve was linear in the concentration range of 824 g.ml-1 of glycine (r=0.999 9)，The mean recovery was 1

4、00.6%,RSD=0.8% (n=7) .CONCLUSIONS：The method is simple and accurate.KEY WORDSHPLC,glycine,Qianglining Injection强力宁注射液具有抗肝中毒、降低谷丙转氨酶、恢复肝细胞功能、防止脂肪性病变等作用。主要用于慢性迁延性肝炎，慢性活动性肝炎。各地方标准1.3均采用氨基氮测定法测定甘氨酸含量。本文参考有关文献4及要求，采用HPLC法测定其中的甘氨酸，现报道如下。1材料1.1仪器岛津氨基酸分析仪，荧光检测器(激发波长370 nm，发射波长490 nm)FLD-1，微处理机C-RIB，程序洗脱装置SG

5、R-1A，柱后衍生反应盒CRB-1B。1.2试剂与试药邻苯二甲醛(OPA)、2-巯基乙醇为化学纯，其它试剂均为分析纯；甘氨酸对照品：含量99.8%(湖北省药检所样品)；强力宁注射液(武汉滨湖制药厂，批号970827，970828，970829)。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱(ISC-7/S1504)为装有聚苯乙烯磺酸型强阳离子交换树脂柱(150 mm4.0 mm)；柱温：55，反应温度：55。流动相：枸橼酸钠缓冲液(pH6.0)(取枸橼酸钠58.8 g，加水1000 ml溶解后，用高氯酸调节pH至6.0)，流速0.5 ml.min-1。荧光试液：取邻苯二甲醛400 mg于500 ml干燥棕

6、色瓶中，加无水乙醇7 ml，使完全溶解后，加硼酸缓冲液(pH10.5)至500 ml，再在通风柜内滴加2-巯基乙醇1 ml，摇匀，过滤即得。本液进入化学反应盒的流速为0.5 ml.min-1，贮存在冰箱中，可使用一周。2.2标准曲线测定取经105干燥至恒重的甘氨酸对照品适量，精密称定，加水制成每1 ml中含8，12，16，20，24 g 5个浓度的甘氨酸标准溶液。精密吸取各标准溶液20 l注入氨基酸分析仪，记录色谱，见1。以甘氨酸峰面积为纵坐标，甘氨酸浓度(g.ml-1)为横坐标作标准曲线，其回归方程为：Y=870.875X+632.6r=0.999 9在824 g.ml-1范围内线性关系良好

7、。1色谱a.甘氨酸对照品 b.强力宁注射液样品 c.空白样品2.3回收率试验按处方配制强力宁注射液，精密量取2 ml，置100 ml量瓶中，加水烯释至刻度，摇匀。精密量取2 ml，置50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密吸取20 l注入氨基酸分析仪，以外标峰面积法计算，结果见表1。表1甘氨酸回收率试验序号回收率/%平均回收率/%RSD/%1100.6299.93100.0100.60.8499.95100.36101.67101.62.4样品的测定取强力宁注射液3批，按回收率试验方法操作，测得结果与氨基氮测定法比较，结果见表2。强力宁注射液样品和空白样品的HPLC谱见1(b,c)。 表2

8、HPLC法与氨基氮测定法样品测定结果比较批号HPLC法(n=6)氨基氮测定法(n=5)含量/%RSD/%含量/%RSD/%970827100.10.5108.00.3970828103.30.8108.00.8970829102.40.5108.50.23讨论表2表明氨基氮测定法测定结果比HPLC法稍高，基于此，同时做了氨基氮测定法的回收率试验，测得平均回收率为105.5%，RSD为0.8%(n=5)。因强力宁注射液为复方制剂，除含甘氨酸外，还含有L-盐酸半胱氨酸的原因。由于本文采用的氨基酸分析仪对L-盐酸半胱氨酸检测灵敏度低，从谱可以看出，本文建立的HPLC法测定甘氨酸含量不受强力宁注射液中其它成分的干扰，结果可靠。HPLC法快速，主峰保留时间为34 min，简单，灵敏度高。作者单位：魏柳珍(湖北省药品检验所武汉430064)苏玉永(同济医科大学附属协和医院)参考文献