生物化学综合实验报告

1、 存车处 生物化学综合实验 实验报告项目名称：核酸的分离纯化及性质研究 指导教师： 商亚芳 班 级：食品科学与工程类13-04班 姓 名：俞海清 学 号：2013218687 日 期：2015/07/02-07/03 小组成员：俞海清 曾斯棋 核酸的分离纯化及其性质研究摘要：提取植物组织DNA和动物肝脏的DNA，先要破碎细胞，然后通过离心获得沉淀。分理出脱氧核糖蛋白（DNP）。利用阴离子除垢剂（SDS），将蛋白质和DNA 分离开来，用氯仿-异戊醇去蛋白质蛋白质变性，然后离心除去变性蛋白质，之后用乙醇将DNA沉淀出来，得到粗蛋白质。为了获得高纯度的DNA，采用适量的RNase来降解残留的RNA，

2、再利用乙醇来提取DNA，重复多次来获得较纯的DNA。再利用DNA紫外吸收特性测定DNA的纯度时，发现提取出来的DNA纯度比较高。利用二苯胺法测定DNA的含量，发现DNA含量偏低。DNA产率很低。最后采用琼脂糖凝胶电泳来分离DNA，测定DNA片段的分子质量。结果实验成功的在紫外线下观察出了标准DNA条带以及待测样品条带。Abstract: In order to extract the plants DNA and the plucks DNA.we should break cells,then separate the DNP.Use the SDS to break protei

3、n and DNA.Phenol chloroforM isoaMyl alcohol Mixture can make protein denaturation .place it on the centrifugal machine to remove the protein .Then,take let the DNA dip into ethylalcohol.it can separate the DNA .In order to obtain high purity DNA, use the right amount of RNase to degradate residual R

4、NA, recycled ethanol to extract DNA over and over again.Using ultraviolet absorption characteristics determine the purity of DNA .we found that the purity of DNA is high.Diphenylamine is used to check the content of DNA, the discovery of DNAs content is low. D

5、NAs yield is very low.Finally, agarose gel electrophores is used to separate DNA and check molecular weight of DNA fragments.Under the uv light,we found standard DNA banding and the banding which belong to pending text sample successfully.关键词：DNA 分离 二苯胺 乙醇 琼脂糖凝胶电泳 氯仿-异戊烷Key words：DNA separate diphen

6、ylamine ethylalcohol agarose gel electrophores Phenol chloroforM isoaMyl alcohol Mixture 前言：核酸（nucleic acid）是遗传信息的携带者，是基因表达的物质基础。核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛存在于所有动植物细胞微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。无论是进行核酸结构，还是功能研究，首先需要对核酸进行分离和纯化。核酸样品质量将直接关系到实验的成败。在核酸分离提取中最重要的是要防止核酸的生物降解,细胞内或外来的各种核酸酶能消化核酸的磷酸二酯键

7、，破坏核酸一级结构。所用器械和一些试剂需高温灭菌，提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂。实验原理：1.植物组织中核酸的分离与纯化原理：DNA存在于细胞核中，天然状态的DNA大多数是以脱氧核糖核蛋白的形式存在，从细胞中提取DNA时，一般先获得脱氧核糖（DNP），在将蛋白质除去。阴离子去垢剂SDS可使DNA与蛋白质分离，再用含少量的氯仿去蛋白质，最后用乙醇把DNA从抽提液中沉淀出来。DNP与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。以NACL为例RNP0.14mol/LNACL中溶解度很大，而DNP在其中的溶解度仅为纯水中的1%；当NACL浓度逐渐增大时，RNP

8、的溶解度变化不大，而DNP的溶解度则随之增加；当NACL的浓度为1mol/L时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2倍，因此通常可用1mol/LNACL提取DNA。进一步制备高纯度的DNA,可用适量的RNase处理提取液，以降解DNA中掺杂的RNA.为了防止提取过程中DNA被细胞中释放出来的DNase 降解以及DNA变性，整个提取过程应该在低温度下进行，同时可在研磨缓冲液中加柠檬酸三钠和Na2-EDTA抑制DNase的活性。提取的DNA是否为纯净，双链，高分子化合物，一般要通过紫外吸收，化学测定和电镜观察等方面的鉴定，本实验采用紫外吸收法。2. 肝脏中DNA的提取及纯度鉴定原理：在细胞核内，

9、核酸通常是与某些组织蛋白质结合成复合物-核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白形式存在的，因此，在制备核酸时，需先将组织或细胞匀浆或破碎，使之释放出核蛋白，再设法将这两大类蛋白分开，再通过蛋白质变性如苯酚，氯仿等，去垢剂如十二烷磺基硫酸钠或使用蛋白酶处理，除去蛋白质，使核酸与蛋白质分离，从而将核酸与蛋白质分离开。RNP和DNP在不同浓度的电解质溶液中的溶解度差异很大。如在高浓度氯化钠（12mol/L）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很大，核糖核蛋白的溶解度很小。在低浓度氯化钠溶液中（0.14mol/L）,DNP的溶解度很小，RNP的溶解度很大。因此，可以利用不同浓度的氯化钠，将两者分离。将抽提得到的核蛋白用

10、SDS或苯酚处理使核蛋白解聚，DNA/RNA及与蛋白质分开；用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去，而DNA则溶解于溶液中。经上述分离纯化后的核酸盐溶液，再利用其不溶于有机溶剂的性质，而使其在适当浓度的亲水有机溶剂（如乙醇）中呈絮状沉淀析出。重复进行上述处理，即可制成所要求纯度的脱氧核糖核酸制品。提纯的DNA或DNA钠盐为白色纤维状固体。为了防止DNA酶解，提取时加入EDTA。因为EDTA是抑制DNA酶活性最好的抑制剂之一，由于DNA酶的酶解作用必须有Ca2+及Mg2+的存在，故只要在提取液中加入少量的金属螯合剂EDTA，就可使DNA酶失活。本实验采用动物新鲜肝脏为提取DNA的材料，通过组织匀浆，使细

11、胞破碎，利用RNP和DNP在一定浓度氯化钠溶液中溶解度不同的特点，提取DNP。用SDS使蛋白质变性和核蛋白解聚，释放出DNA。用氯仿使蛋白质变性沉淀，离心去除。用乙醇作沉淀剂，得到较纯的DNA。用Rnsae去除RNA，再用氯仿使酶蛋白变性沉淀，离心去除，最后用乙醇作沉淀剂，得到更纯的DNA。DNA纯度鉴定需要测定A260，A230和A280的值，经验数据表明，高纯度DNA样品A260/A280的值在1.9左右，当比值高时说明样品中混杂有RNA，当比值低时表明样品中蛋白质没有脱净；而A260/A230应大于或等于2.0，若比值过小则表明有杂质（一般多酚类或色素）。因此，可利用A260/A280和

12、A260/A230比值的大小来鉴定DNA样品的纯度。3. 二苯胺法测定核酸的含量原理：脱氧核糖核酸中的脱氧核糖在酸性环境中变成羟基酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物，在595nm处有最大的吸收，在每毫升含DNA20400微克范围内，光密度与DNA的浓度成正比，在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应的灵敏度。除DNA外，脱氧木糖，阿拉伯糖也有同样的反应。DNA HO CH2C CH2 CHO 蓝色化合物= 酸性条件 二苯胺 O 羟基酮基戊醛4. DNA的琼脂糖凝胶电泳原理：DNA分子在碱性环境中（pH8.3缓冲液）带负电荷，外加电场作用下，向正极泳动。不同的DNA片段由于其电荷、分子量大小

13、及构型的不同，在电泳时的泳动速率就不同，从而可以区分出不同的区带，电泳后经溴乙锭染色，在波长254nm紫外光照射下，DNA显橙红色荧光。琼脂糖凝胶电泳对DNA的分离作用主要依据DNA的分子量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。一定大小的DNA 片段在不同浓度的琼脂糖凝胶中，电泳迁移率不相同。不同浓度的琼脂糖凝胶适宜分离DNA片段大小范围见表1。因而要有效分离大小不同的DNA片段，主要是选用适当的琼脂糖凝胶浓度。不同构型的DNA在琼脂糖凝胶中的电泳速度差别较大。在分子量相当的情况下，不同构型的DNA移动速度次序如下：共价闭环DNA直线DNA开环的双链环状DNA。在同一浓度的凝胶中，分子量较

14、小的DNA片段比较大的片段快。DNA片段的迁移距离（迁移率）与它的大小（分子量）的对数成反比。将未知DNA的迁移距离与已知分子大小的DNA标准物的电泳迁移距离进行比较，即可计算出未知DNA片段的大小。琼脂糖凝胶浓度/%可分辨的线性DNA大小范围/kb0.360-50.620-10.710-0.80.97-0.51.26-0.41.54-0.22.03-0.1表5-1 DNA大小范围与琼脂糖凝胶浓度的关系1.实验仪器与试剂：1.实验试剂（1） 以小白菜为材料提取DNA（2） 研磨缓冲液：1mol/氯化钠，0.045mol/L 柠檬酸三钠盐，0.1mol/L乙二胺四乙酸二钠盐（Na2-EDTA），

15、1%的十二烷基硫酸钠（SDS）,并调到PH=7.0.（3） 氯仿-异戊醇（V/v）：氯仿：异戊醇=24:1（4） 95%乙醇溶液（5） RNase溶液（6） TE溶液：含10mmol/L的Tris-HCL, 1mol/L的Na2-EDTA。动物新鲜肝脏（猪）。（7） 4mol/L 氯化钠溶液：将233.84g氯化钠溶于水，稀释至1000mL.（8） 0.14mol/L氯化钠-0.15mol/L乙二胺四乙酸钠溶液：溶解8.18g氯化钠及37.2g 乙二胺四乙酸钠于蒸馏水，稀释至1000mL。（9） 10%的SDS溶液：25g 十二烷基硫酸钠溶于100mL 蒸馏水中。（10） 15mol/L氯化钠

16、-1.5mol/L柠檬酸三钠溶液：0.88g氯化钠和0.44g柠檬酸三钠溶于蒸馏水中，稀释至1000mL. (11) 1.5mol/L氯化钠-0.15mol/L柠檬酸三钠溶液：87.66g氯化钠和44.12g柠檬酸三钠溶于蒸馏水中，稀释至1000mL.（12）溶液（10mg/mL）：将RNaseA 10mg 溶解于1mL TE 缓冲液中。（13）70%乙醇，95%乙醇。（14）DNA标准溶液：取小牛胸腺DNA用0.1N氢氧化钠溶液配制成200微克/毫升的溶液。（15）DNA样品液：（自己提取）控制其DNA含量在50100微克/毫升左右。（16）二苯胺试剂：称取1克结果的二苯胺试剂溶于100毫升

17、分析纯的冰醋酸中，再加入10毫升过氯酸（A.R60%以上）或浓硫酸2.75毫升，混匀备用。临用前加入1毫升1.6%乙醛溶液（乙醛溶液应保存于冰箱，一周内可使用）所配得的溶液应为无色。（17） 限制性内切酶Hind试剂盒 （18） 标准DNA：按使用说明配制（19）标准pBR322：按使用说明配制（20）电极缓冲液（5×TBE）：用前稀释10倍称取10.88克Tris，5.52克硼酸，0.74克EDTA·Na2·2H2O，溶解后用蒸馏水定容至200ml。使用前用蒸馏水稀释10倍，称为TBE稀释缓冲液（0.5×TBE）。（21）溴乙锭（EB）染色贮存液（1m

18、g/ml）：1滴/组将100mg溴乙锭溶于蒸馏水或电极缓冲液100ml，棕色瓶内封好，避光保存。EB是诱变剂，配制和使用时应戴乳胶手套，并且不要将该溶液洒在地面或桌面上。凡是沾污过EB的器皿或物品，必须经专门处理后，才能进行清洗或弃去。（22）1%琼脂糖2.实验器材 离心机；752紫外分光光度计，研钵，三角瓶，烧杯，玻璃棒，匀浆器，离心管，恒温水浴箱（60度，100度），量筒，吸量管，真空干燥器，紫外分光光度计，石英比色皿，电泳仪，电泳槽，微量移液器，紫外检测灯，移液管（1、2、5ml）,试管及试管架，凝胶塑料托盘，大小烧杯，一次性塑料手套，紫外反射投射仪，洗瓶，胶头滴管，卡尺。 操作步骤：1

19、.植物组织中DNA的提取及纯度鉴定（小白菜）（1）从冰箱取出冷冻30min以上的小白菜幼嫩组织剪碎，放入研钵中并加入12ml研磨缓冲液研磨成匀浆。（2）将匀浆倒入三角瓶内，加入等体积的氯仿-异戊醇混合液，充分震荡半分钟，以脱组织蛋白，然后离心（10000r/min）5min，小心地吸出上层清液备用，弃去中下层含有细胞碎片，变性蛋白质，氯仿等残物。该过程循环23次（3）将收集的上层溶液倒入三角瓶中，再加入等体积的氯仿-异戊醇混合液，充分震荡半分钟，以脱组织蛋白，然后离心（10000r/min）5min，用吸管吸出上层核酸水同液，移于烧杯中。（4）用吸管沿烧杯壁缓缓加入2倍体积预冷95%的乙醇，然

20、后用玻璃棒轻轻搅动，将出现的纤维沉淀缠绕在玻璃棒上。（5）将上述沉淀溶解在PH=8.0, 2ml的TE溶液中，搅拌到完全溶解后，加入RNase溶液，使其最终浓度为50-75ug/mL,在37度下保温30min，以除去RNA，然后加入等体积氯仿-异戊醇混合液，在三角瓶中，震荡半分钟，离心（10000r/min）5min。收集上层水溶液，再次除去残留的蛋白质和所加的RNase.(6) 按照4的程序加乙醇后，将DNA沉淀挑出(若是无法挑出DNA沉淀，则离心5min （10000r/min），弃去上清液，底部为DNA沉淀)，再将DNA溶解于PH=8.0的2ml的TE溶液中，即得到纯化的DNA溶液。（7

21、）DNA纯度测定。采用DNA紫外吸收特性进行测定，取少量样品，加PH=8.0的TE溶液稀释至一定浓度，测A260和A280的值，如A260/A280=1.8，蛋白质含量不超过1.3%，DNA纯度合乎质量标准。 NDA浓度（ug/mL）=×稀释倍数（L为比色杯厚度，一般为1cm; 0.020为每mL溶液中含1ugDNA钠盐时的吸光值；A260为260nm波长处光吸收值）2. 肝脏中DNA的提取及纯度鉴定（1） 取新鲜肝脏（约10g）,用0.14mol/L氯化钠-0.15mol/L乙二胺四乙酸钠溶液洗去血液，剪碎，加入10mL 0.14mol/L氯化钠-0.15mol/L乙二胺四乙酸钠溶

22、液,置匀浆器中研磨，待研成糊状后，浆糊状物离心5min（10000r/min）,弃去上清液，沉淀用0.14mol/L氯化钠-0.15mol/L乙二胺四乙酸钠溶液洗2-3次。（2） 向上述沉淀物加入0.14mol/L氯化钠-0.15mol/L乙二胺四乙酸钠溶液，使总体积为4mL,然后滴加10%SDS溶液0.5mL,边加边搅拌。加毕，置60度水浴保温10min(用细玻璃棒经常搅拌)，等溶液变得粘稠时（可能不明显）取出冷至室温。此步操作系使大分子脱氧核糖核蛋白从细胞核中溶出，核酸与蛋白质分离。（3） 加入4mol/L氯化钠溶液1.6mL,使氯化钠最终浓度达到1mol/L搅拌10min，加入约1倍体积

23、的氯仿-异戊醇混合液，震摇20min，离心5min（10000r/min）.收集上层水相，去掉在氯仿与水相之间的变性蛋白质沉淀；向上层水相徐徐加入1.5-2倍预冷的95%乙醇，DNA沉淀即析出，离心5min（10000r/min）去掉上清，收集沉淀（DNA粗品）。（4） 将DNA粗品置于2.7mL0.015mol/L氯化钠-0.0015mol/L柠檬酸三钠溶液中溶解，再加入0.3mL1.5mol/L氯化钠-0.15mol/L柠檬酸三钠溶液,搅匀，加入1倍体积的氯仿-异戊醇混合液，震摇10min，离心5min（10000r/min），小心地吸取上层水相（含NDA钠盐），弃中层变性蛋白；收集上层水

24、相再加入一倍体积的氯仿-异戊醇混合液，震摇10min，离心5min（10000r/min），小心地吸取上层水相，弃中层变性蛋白。反复几次直到中间层蛋白凝胶层消失。向收集的上层水相加入2倍体积预冷的95%乙醇，DNA即沉淀析出。离心5min（10000r/min），弃去上清液，沉淀为较纯的DNA.（5） 将上述所得沉淀溶于2mLTE缓冲液中，加入RNaseA溶液至终浓度为20mg/L混匀，在37度水浴中保温30min。（6） 向经RNaseA 消化后的DNA溶液中加入1倍体积的氯仿-异戊醇混合液，震摇5min，离心5min（10000r/min），小心地吸取上层水相（含DNA），弃中层变性蛋白,

25、重复抽屉2-3次。（7） 向除尽蛋白质的上清液中徐徐加入2倍体积预冷的95%乙醇，DNA及沉淀析出。离心5min（10000r/min），弃去上清液，再用预冷的70%乙醇洗一次，室温倒置干燥。（8） 将上步所得更纯的DNA沉淀溶于2mL 0.015mol/L氯化钠-0.0015mol/L柠檬酸三钠溶液中备用（供定性鉴定或定量测定）。（9） 将DNA样液适当稀释，移入光径为1cm的石英比色皿，并以0.015mol/L氯化钠-0.0015mol/L柠檬酸三钠溶液作为空白对照。在紫外分光光度计上分别于260nm,280nm和230nm波长处进行测定，计算A260/A280和A260/A230比值的大

26、小来鉴定DNA样品的纯度。3. 二苯胺法测定核酸的含量（一）DNA标准曲线的制作取8支试管，编号，按下表加入试剂 管号 试剂01234567DNA标准液00.20.40.81.01.21.62.0蒸馏水21.81.61.21.00.80.40二苯胺试剂44444444加毕，摇匀，于60恒温水浴中保温1小时，（或于沸水中煮沸15分钟，冷却测0.D595nm值。）以光密度为纵坐标，DNA含量（ug/ml）为横坐标，绘制标准曲线。（二）样品的测定取2支试管，各加0.2ml待测液加蒸馏水稀释至2毫升，再加4毫升二苯胺试剂，摇匀，其操作步骤与标准曲线的制作相同。根据测得的光密度值，从标准曲线上查出相当该

27、光密度DNA的含量，按下式计算出样品中DNA的百分含量。DNA含量/毫升待测液=标准曲线查得值×稀释倍数4. DNA的琼脂糖凝胶电泳（实验一，二样品）一、DNA电泳样品制作取2只清洁、干燥、无菌的Eppendorf管，编号，分别加入25L样品溶液，然后加入5L 6×电泳缓冲液，混匀，放入冰箱保存。 二、1.0%琼脂糖凝胶板的制备1. 用配套挡板将凝胶塑料托盘短边缺口封住，置水平玻板或水平工作台面上，将样品槽模板（梳子）插进托盘长边上的凹槽内（距一端约1.5cm），梳齿底边与托盘表面保持0.5-1mm的间隙，安置好后保持静置状态。图5-1 凝胶托盘的组装1. 托盘 2. 挡板

28、 3. 梳子2. 称取0.3克琼脂糖置于小锥形瓶中，加入30mlTBE稀释缓冲液，在电炉上（或微波炉中）加热融化，轻轻摇匀，避免产生泡沫。3. 待琼脂糖冷却至放在手背不觉太烫手（约60）后，滴一滴EB，然后将琼脂糖溶液在靠近挡板一侧连续地倒入托盘内（注意中间不要间断），使凝胶缓慢而连续地展开直至在托盘表面形成一层约3mm厚均匀胶层（7.1×9.0cm）。胶内不要存有气泡，室温下静置约20分钟。4. 待凝固完全后，双手均匀用力轻轻拔出样品槽模板（注意勿使样品槽破裂），则在胶板上形成相互隔开的样品槽。5. 取下封边的挡板，将凝胶连同托盘放入电泳槽平台上，倒入大量TBE稀释缓冲液直至浸没过

29、凝胶面2-3mm，要防止样品槽内窝存气泡，可以用微量注射器挑除。 三、加样用微量注射器或移液枪样品液，分别加入到胶板的不同加样槽内，每个槽（5×2×2.5mm）容积约为25L，因此加样量不要超过20L，避免因样品过多而溢出，污染邻近样品。加样时，注射器针头穿过缓冲液小心靠近加样槽底部，但不要损坏凝胶槽，然后缓慢地将样品推进槽内，让其集中沉于槽底部。加完一个样品后的微量注射器应反复洗净后才能用以加下一个样品。四、电泳加样完毕，将靠近样品槽一端连接负极，另一端连接正极（千万不要搞错），接通电源，开始电泳。在样品进胶前可用略高电压，防止样品扩散，样品进胶后，应控制电压降不高于5V

30、/cm。当染料带移动到距离凝胶末端约1cm时，停止电泳。五、观察小心地取出凝胶置托盘上，将胶板推至预先浸湿并铺在紫外灯观察台上的玻璃纸内，在波长245nm紫外灯下进行观察。DNA存在的位置呈现橘红色荧光，可观察到清晰的条带。观察时应带上防护眼镜，避免紫外灯对眼睛的伤害。六、制作测定分子量标准曲线用卡尺量出DNA-Hind酶解各片段的迁移距离（cm），以DNA酶解各片段分子量为纵坐标，它们的迁移距离为横坐标，在半对数坐标纸上连结各点划出曲线，即为DNA分子量的标准曲线。DNA-Hind酶解各片段大小见表5-2。片段碱基对数目（kb）道尔顿（×106）1234567823.1309.41

31、96.5574.3712.3222.0280.5640.12515.06.124.262.841.511.320.370.08表5-2 DNA-Hind酶解片段实验结果：1. 植物组织中DNA的提取及纯度鉴定波长/nm260280吸光值A1.6140.924比值260（nm）/280（nm）1.7472. 肝脏中DNA的提取及纯度鉴定波长230260280吸光值A2.2123.5542.373吸光值比值260（nm）/280（nm）=1.498260（nm）/230（nm）=1.6073. 二苯胺法测定核酸的含量 DNA含量标准曲线的绘制试管标号01234567DNA浓度（ug/ml）00.2

32、0.40.81.01.21.62.0光密度A0.000.0160.0330.0730.0930.1140.1520.190 利用二苯胺法测定样品中核酸含量（在波长为595nm环境下进行紫外吸收，且样品稀释了10倍）样品类型小白菜组织中的DNA肝脏组织中的DNA吸光值A0.0150.024DNA浓度(ug/ml)1.862.79DNA产率（%）0.618*10-40.547*10-44. DNA的琼脂糖凝胶电泳（实验一，二样品）通过琼脂糖凝胶电泳后将电泳结果在紫外线下照射观察出了如图所示的条带。本组实验结果条带为最下面的两条。DNA标准样品条带也成功跑出。Marker小白菜肝脏Marker DN

33、A12345678910111213Mr（kDa）10000800060005000400030002500200015001000750500250Log Mr4.003.903.783.703.603.483.403.303.183.002.882.702.40样品迁移距离（cm）1.71.81.92.02.12.32.52.83.23.74.14.75.4染料迁移距离（cm）6.2相对迁移率（MR）0.270.290.310.320.340.370.400.450.520.600.660.760.87样品DNA条带空心菜DNA条带动物肝脏DNA条带样品迁移距离（cm）5.95.7染料迁移

34、距离（cm）6.86.6相对迁移率MR0.8670.864样品DNA分子量（Mr）233237分析与讨论：1. 小白菜DNA提取实验的过程中，我们组提取的蛋白沉淀明显偏少这说明我们对白菜的研磨程度不够，应该把小白菜研磨的更加细。在这一组实验的过程中我们组在重复去除细胞碎片，变性蛋白质，氯仿等残物时取得上清液不多造成DNA的遗失。所以以后在用玻璃棒缠纤维沉淀时，无法缠绕上。我们组采取了离心的方式将其沉淀在离心管的底部。然后按照实验步骤去除残余RNA物质。我们组所测得的DNA吸光度比值为1.747，比较接近标准的1.8。我们的提纯步骤还是比较成功的。就是所得样品有点少。2. 在做猪肝脏的提取过程中

35、，肝脏的研磨程度可能不够精细，而且肝脏组织比较难研磨，而且还是冷冻的肝脏，所以我认为这一点可能有影响。在肝脏重复洗涤的过程中我们采取了离心的方式来洗涤肝脏沉淀，所以我认为这个可以更好地去除上清液的杂质。在分离核糖和蛋白质的过程中，我们的溶液也并不粘稠。后来我们在进行抽取上相水层，去除中层变性蛋白。该过程中我们除杂不够完善，操作不够精细，导致少量中层变性蛋白混入DNA。本次实验吸取了上次实验教训，我们的产物量很多。但是除杂不够完全。在进行吸光度测试时，我们稀释了30倍，但是我们的吸光度依旧偏高，因为杂质的影响，所以吸光度比值不太接近1.8。3. 我们组在弄DNA标准曲线时，操作还是满规范的，我们

36、最后所得拟合趋势线的R平方达到了0.999的精度。然而我们在做样品的测定时，由于小白菜DNA样品较少且全为未稀释样品，所以我们只取了0.02ml的样品稀释十倍，在坐这个实验时进行沸水浴的过程时间超过了15min.可能过度的时间会对实验结果造成影响。我们在算出的产率中可以看到，第一个实验中的DNA产率有点偏低，所以第一个实验虽然纯度高但是产率低，在第二个试验中，得到的DNA虽然产率相对于其他组较多但是纯度就没有第一组的高。本组实验比较成功。4. DNA的琼脂糖凝胶电泳实验，这个实验我们犯了错误，这个实验是两个小组共用一块胶板的，我们凝胶板的制作的过程还是可以的，但是我们在加样品之前忘记了对样品加入6X电泳缓冲液。完全照搬实验材料上的步骤，导致了第一次失误，然后进 行第二次实验，在这次实验过程中因为，个人操作原因（手抖），加样品时将琼脂糖凝胶刺穿了，加样品失败。（上图中从下向上，第三个胶槽）可以发现该DNA染料只跑了三分之一不到。然后再第一个胶槽重新加样。我们组的实验所用胶槽是从下向上的三个。感觉跑的还可以