消毒剂消毒效力及有效期验证方案20140805

1、消毒剂消毒效力及有效期验证方案编号：XXX-XXXXXX-XX版本号： 00页 号：119/119消毒剂消毒效力及有效期验证方案 起草人验证技术部 签名日期 审核人验证技术部经理 签名 日期 审核人QC经理 签名日期 审核人QA经理 签名日期 批准人质量总监 签名 日期 目 录1. 目的42. 范围43. 概述44. 风险评估85. 职责86. 定义与缩写97. 参考文件98. 培训99. 内容910. 偏差和变更处理 1911. 验证记录191.目的确认洁净区按照规定的清洁、消毒程序进行清洁消毒后，能够达到防止交叉污染的目的，并在消毒有效期内能确保达到生产工艺所需要的效果。洁净区用消毒剂对地

2、漏、地面、墙面、操作台、设备表面及非灭菌容器具表面等进行消毒，旨在控制微生物污染水平，防止微生物在药品生产环境中污染及交叉污染，保证生产环境符合工艺卫生要求，最终保证药品质量。2.范围本方案适用于本公司A级、B级、C级、D级洁净区使用的消毒剂消毒效力及有效期的验证，适用于本公司洁净区的墙面、天花板、门窗、机器设备、仪器、操作台、地漏、推车、桌椅等表面以及操作人员双手（手套）的消毒等，7种消毒剂：手消毒液、75%乙醇、新洁尔灭、84消毒液、LpH st酸性苯酚、Vesphene II st碱性苯酚、Spor-Klenz杀孢子剂。3.概述本公司洁净区分为A级、B级、C级、D级，拟定用于洁净区消毒的

3、有7种消毒剂，本次验证方案将选用以下7种消毒剂分别进行验证实验。l 手消毒液主要成分：63%75%乙醇和0.45%0.55%醋酸氯己定。l 84消毒液主要成分：次氯酸钠，有效氯含量为17.023.0g/ml。l LpH st酸性苯酚主要成分：对叔戊基苯酚7.6%、邻苯基苯酚7.7%、溶剂84.7%。l Vesphene II st碱性苯酚主要成分：对叔戊基苯酚7.66%、邻苯基苯酚9.09%、溶剂84.7%。l Spor-Klenz杀孢子剂主要成分：过乙酸、过氧化氢和醋酸的混合物，含有1.0%的过氧化氢和0.08%的过乙酸。l 新洁尔灭：5%苯扎溴铵。l 75%乙醇：对95%乙醇进行稀释。3.

4、1.消毒剂适用范围消毒剂名称洁净级别适用范围手洁净服室内设备内表面设备外表面水池、地漏75%乙醇A/B级××××-C级×××××新洁尔灭A/B级×××××-C/D级×××××酸性苯酚A/B级×××-C/D级×××碱性苯酚A/B级×××-C/D级×××Spor-Klenz杀孢子剂A/B级&#

5、215;×-C/D级××××××84消毒液A/B级×××××-C/D级×××××手消毒液A/B级××××-D级×××××备注：1、室内包括：地面、墙面、门窗、天花板、灯具等。 2、75%乙醇是唯一允许在生产过程中使用的消毒剂，如在无菌灌装过程中定时对操作人员的手部进行消毒。3.2.消毒剂的配制方法消毒剂名称配制方法手消毒液直接使用。75%

6、乙醇按C1V1=C2V2 的计算公式，计算配制一定体积75%乙醇溶液需要的95%的乙醇的量，如：配制1000ml75%乙醇溶液，需要95%乙醇的量为：800ml按95%乙醇：水=4：1的体积比配制，搅匀，即得。0.1%新洁尔灭按5%苯扎溴铵：纯化水（或注射用水）=1：50的体积比配制，搅匀，即得。0.01%新洁尔灭按5%苯扎溴铵：纯化水（或注射用水）=1：500的体积比配制，搅匀，即得。0.04%84消毒液按2% 84消毒液：纯化水=1：50的体积比配制，搅匀，即得。酸性苯酚按酸性苯酚：纯化水（或注射用水）=1：256的体积比配制。缓慢加入纯化水或注射用水中，边加边搅拌，搅匀，即得。碱性苯酚按

7、碱性苯酚：纯化水（或注射用水）=1：128的体积比配制。缓慢加入纯化水或注射用水中，边加边搅拌，搅匀，即得。Spor-Klenz杀孢子剂用作杀孢子剂时不经稀释直接使用。也可按1:50比例稀释后可作为普通消毒剂使用（暂不应用）。3.3.消毒剂的贮存条件及贮存期3.3.1.开瓶后原液的贮存条件和贮存期名 称贮存条件贮存期手消毒液密闭保存1个月95%乙醇密闭保存1个月新洁尔灭遮光，密闭保存1个月84消毒液密闭保存1个月酸性苯酚密闭保存56天碱性苯酚密闭保存54天Spor-Klenz杀孢子剂低于24，密闭保存一年备 注1、本贮存期指消毒剂原包装开口后的贮存期。2、未打开包装的消毒剂贮存期执行各品种项下

8、规定的贮存期或有效期。3、未打开包装的消毒剂未规定贮存期或有效期的统一按2年执行。3.3.2.配制后的消毒液贮存条件及贮存期名 称贮存条件及贮存期75%乙醇密闭保存。C级及以下区域的7天，除菌过滤后用于B级区域为3天。0.1%新洁尔灭溶液现用现配，使用期不超过2小时。0.01%新洁尔灭溶液现用现配，使用期不超过2小时。0.04%84消毒液现用现配，使用期不超过2小时。酸性苯酚溶液密闭保存。C级及以下区域的14天，除菌过滤后用于B级区域为3天。碱性苯酚溶液密闭保存。C级及以下区域的14天，除菌过滤后用于B级区域为3天。3.4.作用对象一样的消毒剂每月轮换使用，避免表面微生物产生耐药菌株。在利用消

9、毒剂进行表面擦拭消毒过程中消毒剂的作用时间应不少于10分钟，利用消毒剂进行浸泡消毒的不少于10分钟。4.风险评估及验证错略失效模式潜在风险风险级别现有控制措施是否降低建议采取措施消毒剂配制浓度不符合要求1.没有起到消毒作为2.对操作人员产生伤害中核对配制过程与SOP一致是在验证中由验证主管进行确认，日常操作需要双人复核消毒剂作用时间不够消毒效果不能保证中规定好消毒方法，保持消毒方式持续一致是在验证中由验证主管进行确认，日常操作需要双人复核消毒剂有影响药品质量残留药物安全性高检查材质证明和安全数据是在本验证中确认消毒剂的安全数据消毒剂轮换不能起到避免抗药性的作用细菌产生抗药性中参与轮换消毒剂抗菌

10、谱的核对以及轮换试验数据的核查是在本验证中确认消毒剂的相关数据消毒剂消毒效力不足消毒能力不能保证消毒要求，导致微生物不良高消毒剂消毒效力验证是对每种消毒剂进行相关应用消毒效力验证消毒剂开启后存放周期内效力降低消毒能力不能保证消毒要求，导致微生物不良高消毒剂有效期验证是对需要存放的消毒剂进行相关应用的有效期验证新洁尔灭溶液消毒失效可能对C/D衣物生物负荷不能控制低现用现配，使用期不超过2小时。是日常检查配制方法，观察气泡情况，无需消毒效力和效期验证。84消毒液失效可能对C/D鞋生物负荷不能控制低现用现配，使用期不超过2小时。是日常检查配制方法，无需消毒效力和效期验证。4.1.为了确认消毒剂的消毒

11、效力，通过实验室考察部分和现场考察部分分别进行验证。其中，用定量悬浮试验法和表面实验法进行实验室考察试验部分。洁净区设施表面材质有不锈钢和玻璃两种，故表面试验法选用不锈钢载片和玻璃裁片模拟洁净区设施表面进行验证试验。三种试验方法作用的消毒剂见表。序号消毒剂试验方法中和剂鉴定试验表面实验法定量悬浮试验法1手消毒液275%乙醇3酸性苯酚溶液4碱性苯酚溶液5Spor-Klenz杀孢子剂现场考察试验部分选择QC无菌检验室（A/B级）、QC微生物消毒检测室（C级）、QC阳性菌室（D级）设备表面消毒前和消毒后分别进行取样，测定其微生物数量。4.2.消毒剂有效期确认试验通过该试验，确定消毒剂在有效期内是稳定

12、的，并且消毒效力不会发生变化，符合要求。在进行消毒剂有效期确认时，每天开启装消毒剂的容器不少于5次，以模拟实际操作的最差条件。5.职责5.1.验证技术部：负责验证方案的编写审核，在执行前完成对方案及记录的审核和批准；确保按照批准的方案实施，起草审核验证报告；负责验证偏差、变更的报告及纠偏措施的审核，确保能及时发现偏差，并按照已经达成一致偏差处理方法对其进行记录、纠正、调查和最终确认；负责对验证小组成员进行本方案的培训。5.2.质保部：执行前完成对方案及记录的审核；负责验证记录的归档及验证偏差纠偏措施的批准和纠正措施结果的确认；负责验证过程的监控和检查，保证验证方案的实施，参与验证结果评价。参与

13、验证偏差的调查、处理和评估和变更控制。负责验证方案、报告的批准。5.3.其它成员职责：执行前确认方案已批准，并经过培训；按验证方案实施验证，收集、整理验证数据，完成验证记录和报告；参与验证偏差的调查和处理，确认并通过偏差修订和解决方案。 5.4.质量总监：负责方案的批准。6.定义与缩写英文缩写英文全称中文名称SOPStandard Operating Procedure标准操作规程7.参考文件变更管理SOP（SOP-0160-002）；验证的组织和实施（SOP-0310-001）；车间清洁剂、消毒剂管理SOP （SOP-1030-005）洁净区表面微生物监测SOP（SOP-0120-010）药

14、品生产验证指南微生物检测验证技术（中国医药科技出版社）8.培训确认参与验证的人员都经过此方案和相关SOP的培训，将检查结果记录在附录2：培训检查和签字确认。9.内容9.1.验证前准备9.1.1.确认的相关SOP和在验证过程中用到的相关文件，同时对消毒剂安全性数据和抗菌谱等信息进行检查，将检查结果记录在文件检查内，见附录1。9.1.2.验证用试剂与材料9.1.2.1.菌种序号名称序列号1金黄色葡萄球菌CMCC(B)260032大肠埃希菌CMCC(B)441023枯草杆菌芽孢CMCC(B)635014白色念珠菌CMCC(F) 98001 5环境分离菌HJFL130019.1.2.2.培养基序号名称

15、备注1营养琼脂培养基培养基经121，20min灭菌备用2营养肉汤培养基3改良马丁琼脂培养基4改良马丁培养基5大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟规格：f55mm，取样面积为25m29.1.2.3.消毒液拟定选用的中和剂序号消毒剂名称中和剂备注175%乙醇1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯80中和剂经121，20min灭菌备用。2手消毒液3酸性苯酚溶液4碱性苯酚溶液5Spor-Klenz杀孢子剂用1% 蛋白胨，0.1%硫代硫酸钠，加上1.4% KH2 PO4，把pH值调至7.2到7.4. 通过蒸汽灭菌柜灭菌。就在使用中和剂之前，在每份50ml的溶液中，无菌添加1ml，无菌过滤过的0.625%浓度的过氧化氢酶（

16、100微升的过氧化氢酶+9.8ml的稀释液里=0.625%的浓度，氧化氢酶活力单位1000 u/mL）9.1.2.4.稀释液0.9%无菌氯化钠溶液（NS）9.1.2.5.器具及设备序号名称规格/型号1无菌移液管0.5ml、5ml、10ml2锥形瓶150ml3无菌试管N/A4漩涡混合器XW-80A5恒温水浴锅HWS-266生化培养箱LRH-800F9.1.2.6.验证用试剂与材料记录见附录3。9.2.消毒剂消毒效力试验9.2.1.中和剂鉴定试验9.2.1.1.试验目的通过该试验，确认所用的中和剂对对应的消毒剂有良好的中和作用，对试验用菌剂及其恢复期培养示范有害或不良影响。9.2.2.菌液的制备及

17、计数9.2.2.1.金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌和环境分离菌工作菌液的制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌和环境分离菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，3035培养1824小时。取上述培养物用0.9无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释成5×1055×106CFU/ml的工作菌液（如肉汤培养物的浓度已为1×1085×108CFU/ml，可不再用0.9无菌氯化钠溶液稀释）。计数时，将5×1055×106CFU/ml的工作菌液10倍系列稀释成含50100CFU/ml菌液，并同时采用营养琼脂培养基3035培养2天计数。计算

18、该稀释级的平均菌落数，将计数结果换算成每毫升浓菌液的菌落数。9.2.2.2.白色念珠菌工作菌液的制备接种白色念珠菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，2328培养2448小时。取上述培养物用0.9无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释成5×1055×106CFU/ml的工作菌液（如肉汤培养物的浓度已为5×1055×106CFU/ml，可不再用0.9无菌氯化钠溶液稀释）。计数时，将5×1055×106CFU/ml的工作菌液10倍系列稀释成含50100CFU/ml菌液，并同时采用改良马丁琼脂培养基2328培养3天计数。计算该稀释级的平均菌落数，将计数

19、结果换算成每毫升浓菌液的菌落数。9.2.3.鉴定试验操作9.2.3.1.配制75%乙醇、0.1%新洁尔灭溶液、0.01%新洁尔灭溶液、手消毒液、0.04%84消毒液、1:256酸性苯酚、1:128碱性苯酚、Spor-Klenz杀孢子剂。将配置好的消毒剂置20±1恒温水浴锅中备用。9.2.3.2.分组操作试验分组及稀释操作方法简表组号混合液A混匀作用10min混合液B混匀作用10min取混合液B或混合液B的稀释级溶液0.5ml平板计数（2皿/组）取0.5ml工作菌液加入下列溶液中取混合液A 0.5ml加入下列溶液1消毒剂4.5ml稀释液4.5ml混合液B、10-12消毒剂4.5ml中和

20、剂4.5ml混合液B、10-13中和剂4.5ml稀释液4.5ml10-2、10-34中和产物4.5ml（消毒液与中和剂比例为1:1）稀释液4.5ml10-2、0-35稀释液4.5ml稀释液4.5ml10-2、10-36稀释液和中和剂各1.0ml注入无菌平皿中，各制备2皿，作为阴性对照组。具体操作l 第1组目的：观察消毒液对试验菌有无杀灭或抑制能力。操作：取消毒剂4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10min后，取混合液B 0.5ml+稀释液4.5ml，混匀作用10min，取混合液B和10-10.5ml注皿，平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌和环境分离菌用营养琼脂培养基

21、，倒置3035培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置2328培养5天计数计数。l 第2组目的：观察残留消毒剂被中和后受到消毒剂作用后的试验菌是否恢复生长。操作：取消毒剂4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10min后，取混合液A 0.5ml +中和剂4.5ml，混匀作用10min，用稀释液稀释成10-1。分别取未稀释溶液即混合液B（混合液0.5mll+中和剂4.5ml的混合液）及10-1 0.5ml注皿，各平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌和环境分离菌用营养琼脂培养基，倒置于3035培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置于2328培养5天计数。

22、l 第3组目的：观察中和剂是否有抑菌性、毒性操作：取中和剂4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10min，取混合液0.5ml l+稀释液4.5ml，混匀作用10min后，用稀释液进行10倍系列稀释成10-2、10-3。取相应稀释级0.5ml注皿，各稀释级平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌和环境分离菌用营养琼脂培养基，倒置3035培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置2328培养5天计数计数。l 第4组目的：观察中和产物，或未被完全中和残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。操作：取消毒剂和中和剂1:1的混合液4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10mi

23、n，取混合液0.5ml l+稀释液4.5ml，混匀作用10min后，用稀释液进行10倍系列稀释成10-2、10-3。取相应稀释级0.5ml注皿，各稀释级平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌和环境分离菌用营养琼脂培养基，倒置3035培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置2328培养5天计。l 第5组目的：作阳性对照用操作：取稀释液4.5ml+工作菌液0.5ml，混匀作用10min，取混合液0.5ml l+稀释液4.5ml，混匀作用10min后，用稀释液进行10倍系列稀释成10-2、10-3。取相应稀释级0.5ml注皿，各稀释级平行制备2皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希

24、菌、枯草杆菌芽孢菌和环境分离菌用营养琼脂培养基，倒置3035培养3天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置2328培养5天计数。l 第6组目的：作为阴性对照用操作：分别取稀释液和中和剂各1.0ml注入无菌平皿中，各制备2皿。9.2.3.3.结果判断试验结果应符合下列全部条件，判断所选中和剂合格。l 第1组无菌生长，或仅有少数试验菌菌落生长。l 第2组菌落数比第1组菌落数多，但比第3、4、5组菌落数少，且符合下表要求第1组平板平均菌落数第2组平板平均菌落数05x(x+5)y(y+0.5y)l 第3、4、5组有相似菌落数生长，其每组间菌落数误差率不超过15%。计算公式如下：（3组间菌落平均数-

25、各组菌落平均数）的绝对值之和误差率×1003×3组间菌落平均数l 第6组无菌生长。否则，说明试剂有污染，应重新进行试验。9.2.4.中和剂鉴定试验记录见附录4。9.3.定量悬浮试验9.3.1.试验目的由于0.1%新洁尔灭溶液、0.01%新洁尔灭溶液、0.04%84消毒液、1:256酸性苯酚、1:128碱性苯酚、Spor-Klenz杀孢子剂是通过浸泡或液封消毒，通过定量悬浮试验，确定其消毒效力是否符合要求。9.3.2.试验操作9.3.2.1.配制0.1%新洁尔灭溶液、0.01%新洁尔灭溶液、0.04%84消毒液、1:256酸性苯酚、1:128碱性苯酚、Spor-Klenz杀孢

26、子剂。将配置好的消毒剂置20±1恒温水浴锅中备用。9.3.2.2.由于0.1%新洁尔灭溶液、0.01%新洁尔灭溶液、0.04%84消毒液、1:256酸性苯酚、1:128碱性苯酚中低效消毒剂，且不能杀灭芽孢，故定量悬浮试验用菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌和环境分离菌。Spor-Klenz杀孢子剂为高效消毒剂，能杀灭芽孢，故定量悬浮试验用菌枯金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌和环境分离菌。9.3.2.3.将菌液制备成1×1071×107CFU/ml的工作菌液，菌液的制备及计数同8.1.2。9.3.2.4.将试管按需要分组排列在试管架上，试

27、验组分3组（8min、10min、12min各一组），并由左向右逐管标明消毒剂、中和剂、10-1、10-2。对照组1组，并由左向右逐管标明稀释液、中和剂、10-1、10-2、10-3、10-4。9.3.2.5.向各消毒剂、中和剂、稀释液试管加入4.5ml相应的试剂，向标明10-1、10-2、10-3、10-4。加入4.5ml的稀释液。9.3.2.6.吸取工作菌液0.5ml加入标明消毒剂的试管中，对照组加入标明稀释液的试管中，迅速混匀，并开始计时。9.3.2.7.待菌液与消毒剂相互作用至8min、10min、12min，吸取菌液和消毒剂混合液0.5ml，加入标明中和剂的试管中，迅速混匀。 9.3

28、.2.8.中和作用10min后，吸取0.5ml加入标明10-1的试管中，混匀后吸取0.5ml加入标明10-2试管中（对照组以此类推，对照组直至10-4）。9.3.2.9.试验组分别取中和剂管、10-1、10-2管溶液1ml按平皿法测定存活菌数；对照组取10-3、10-41ml按平皿法测定存活菌数。每管平行制备2皿。9.3.2.10.金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌和环境分离菌用营养琼脂培养基，倒置于3035培养2天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置于2328培养3天计数计数。9.3.3.结果计算计算试验组和对照组的活菌浓度 （CFU/ml），并换算为对数值（N），并

29、按下式计算杀灭对数值: 杀灭对数值 (KL)对照组平均活菌浓度的对数值（NO）试验组活菌浓度对数值（NX）9.3.4.可接受标准杀灭对数值 (KL)应不低于35个对数单位。9.3.5.定量悬浮试验记录见附录59.4.表面试验法9.4.1.试验目的由于75%乙醇、手消毒液、1:256酸性苯酚、1:128碱性苯酚、Spor-Klenz杀孢子剂是通过擦拭消毒，故选用不锈钢载片和玻璃裁片进行表面试验法，确定其消毒效力是否符合要求。9.4.2.菌种选择由于75%乙醇、手消毒液、1:256酸性苯酚、1:128碱性苯酚为中低效消毒剂，且不能杀灭芽孢，故表面试验用菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃

30、希菌、白色念珠菌和环境分离菌。Spor-Klenz杀孢子剂为高效消毒剂，能杀灭芽孢，故表面试验用菌枯金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌和环境分离菌。9.4.3.工作菌液制备工作菌液的制备方法、浓度及验证同步计数操作同8.1.2。9.4.4.试验操作9.4.4.1.（1） 染菌不锈钢载片制备将经灭菌的载片平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌含菌和环境分离菌量为1×1085×108CFU的菌液0.1ml，并均匀涂布于整个载体表面。滴染菌液后，载片置超净工作台晾干后备用。每种菌平行制备两个染菌不锈钢载片。（2）染菌玻璃载片制备因培养皿的

31、材质为玻璃，故用培养皿代替玻璃载片进行染菌试验。进行菌液滴染前，用记号笔在培养皿菌液滴染面的背面画出染菌面积（50mm×50mm），标注清晰。菌液滴染操作同染菌不锈钢载片制备。9.4.4.2.l 试验组：将消毒剂擦拭在制备好的染菌载片上，消毒剂作用时间分别为8min、10min、12min，不锈钢载片和玻璃载片每个作用时间分别制备2个。作用结束后，用接触碟取样（接触碟规格：f55mm，取样面积为25m2）。取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟；取样白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基接触碟。接触碟取样方法：打开接触碟盖，使无菌培养基表面与取样面直接接触，

32、均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样面表面均匀接触10秒左右，在盖上跌盖。l 对照组对照组的活菌浓度计数见8.3.3。.l 阴性对照：用接触碟在已灭菌的载片上（未染菌片的载）按压取样，操作同上。每种载片及每种接触碟平行制备两份。9.4.4.3.培养将取样金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌的接触碟倒置于3035培养2天计数；取样白色念珠菌的接触碟倒置于2328培养3天计数计数。9.4.4.4.结果计算计算试验组和对照组的活菌浓度 （CFU/ml），并换算为对数值（N），并按下式计算杀灭对数值: 杀灭对数值 (KL)对照组平均活菌浓度的对数值（NO）试验组活菌浓度

33、对数值（NX）9.4.5.可接受标准杀灭对数值 (KL)应不低于35个对数单位。9.4.6.表面试验法记录见附录69.5.现场考察试验9.5.1.消毒前对洁净区进行表面微生物取样。取样地点： QC阳性菌室（D级）一墙壁和设备表面、QC微生物消毒检测室（C级）墙壁和设备表面、QC无菌检验室（B级）墙壁和设备表面、QC无菌检验室室超净工作台（A/B级）设备表面。取样操作及检验执行洁净区表面微生物监测SOP。9.5.2.QC检验室操作结束后操作人员按照微生物实验室管理SOP对洁净区进行清洁消毒。9.5.3.清洁消毒完毕15分钟后，现场QA对清洁消毒后的洁净区进行表面微生物取样。QC无菌检验

34、室室超净工作台下（A/B级）设备表面、QC无菌检验室（B级）墙壁和设备表面、QC微生物消毒检测室（C级）墙壁和设备表面、QC洁净走廊（D级）墙面及设备（小车）。取样操作及检验执行洁净区表面微生物监测SOP。9.5.4.至少进行3次试验,每次间隔7天。9.5.5.可接受标准消毒后：A级：<1CFU/25cm2B级：5CFU/25cm2C级：25CFU/25cm2D级：50CFU/25cm29.5.6.现场考察试验记录见附录79.6.消毒剂有效期确认试验9.6.1.试验目的通过该试验，确定消毒剂在有效期内是稳定的，并且消毒效力不会发生变化，符合要求。在进行消毒剂有效期确认时，每天开启装消毒剂

35、的容器不少于5次，以模拟实际操作的最差条件。9.6.2.试验操作9.6.2.1.配制75%乙醇、0.1%新洁尔灭溶液、0.01%新洁尔灭溶液、0.04%84消毒液、手消毒液、1:256酸性苯酚、1:128碱性苯酚、Spor-Klenz杀孢子剂。0.1%新洁尔灭溶液、0.01%新洁尔灭溶液和0.04%84消毒液为现用现配，配制临配新用，不做有效期考察。其他消毒液基于如下贮存条件及贮存期，采取下表取样周期名 称贮存条件及贮存期0天3天7天14天30天60天75%乙醇密闭保存。C级及以下区域的7天，除菌过滤后用于B级区域为3天。手消毒液密闭保存，1个月酸性苯酚溶液密闭保存。C级及以下区域的14天，除

36、菌过滤后用于B级区域为3天。碱性苯酚溶液密闭保存。C级及以下区域的14天，除菌过滤后用于B级区域为3天。Spor-Klenz杀孢子剂低于24，密闭保存1年9.6.2.2.l 手消毒液、1:256酸性苯酚、1:128碱性苯酚、Spor-Klenz杀孢子剂试验操作同8.2定量悬浮试验（10min）。l 75%乙醇、1:256酸性苯酚、1:128碱性苯酚、Spor-Klenz杀孢子剂试验操作同8.3表面试验（10min）。9.6.2.3.结果计算计算试验组和对照组的活菌浓度 （CFU/ml），并换算为对数值（N），并按下式计算杀灭对数值： 杀灭对数值 (KL)对照组平均活菌浓度的

37、对数值（NO）试验组活菌浓度对数值（NX）9.6.2.4.可接受标准在消毒液有效期末，杀灭对数值 (KL)应不低于35个对数单位。9.6.2.5.消毒剂有效期确认试验记录见附录810.偏差和变更处理10.1.测试过程中发生的任何偏差都应该记录，并给予相应的纠偏措施，每一偏差给予唯一的偏差编号，在“附录9：偏差清单”中，汇总所有的偏差。偏差编号原则：DCA+ 三位流水号，如：DCA-001 (DCA表示偏差，001是测试项目发生的第一个偏差)。在“附录10：偏差报告”中描述偏差的实际情况，提出相应的纠正方案，描述再测试结果。纠正方案必须经批准。偏差报告根据需要可复印，一个偏差，一份偏差

38、报告。10.2.变更控制所有在验证过程中产生的变更都参考验证主计划的要求执行，确保所有的变更得到评估和批准，验证的结果达到预定的目的和要求。将验证过程中产生的“变更报告”记录在附录11。10.3.将所有的附件填写于附录12“附件清单”11.验证记录序号文件名称附录1文件检查附录2培训检查和签字确认附录3验证用试剂与材料附录4中和剂鉴定试验记录附录5定量悬浮试验记录附录6表面试验记录附录7现场考察试验记录附录8消毒剂有效期确认试验记录附录9偏差清单附录10偏差报告附录11变更报告附录12附件清单附录1文件检查资料类型资料名称文件/档案号存放地点 SOP结果分析与评价：备注： 验收标准：文件资料已

39、经完备，并且是最终批准版本。是否符合验收标准？是: 否: 如果为否，输入异常情况编号_检查人：日期：复核人：日期：附录2培训检查和签字确认目的：确认参与验证的人员都经过此方案的培训，和识别所有签字和草签本方案任何数据表的人员。测试方法：检查培训记录。可接受标准：参与验证的人员进行此方案前已经完成此方案的培训。培训方法（选一个） ¨ 阅读 ¨ 录像/DVD ¨ 幻灯片讲解 ¨ 在岗培训 ¨ 指导型 ¨其他 持续时间段： 到 . 培训/草签确认签名部门 签名部门 备注：验收标准：所有参与验证人员已接受方案培训，并完成签字确认。是否符合验收

40、标准？是: 否: 如果为否，输入异常情况编号_检查人：日期：复核人：日期：附录3 验证用试剂与材料1 器具及设备序号名称规格型号编码生产厂家123456782 菌种序号名称序列号代次来源123453 培养基及稀释液序号名称批号来源1234564 消毒液及对应的中和剂序号消毒剂名称中和剂备注1234567备注：验收标准：所有验证用物品，来源合规合法，并处相应管理状态下。是否符合验收标准？是: 否: 如果为否，输入异常情况编号_检查人：日期：复核人：日期：附录4 中和剂鉴定试验1 工作菌液的制备浓菌液名称菌液编号稀释级别工作菌液计数取样量操作过程大肠埃希菌将稀释好的工作菌液分别加至2个90mm平皿

41、中，每皿加入15ml20ml已融化好并冷却至约45的营养琼脂培养基或改良马丁琼脂培养基，盖上平皿，倾斜或旋转，使菌悬液与培养基充分混匀，置室温使其凝固。按规定条件培养后进行计数。金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌环境分离菌2 工作菌液的计数：细菌培养箱型号及编号：培养温度： 培养起止时间：霉菌培养箱型号及编号：培养温度： 培养起止时间：菌种名称稀释级结果 （CFU/ml）平均值（CFU/ml）12大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌环境分离菌3 中和剂鉴定试验结果序号项目类型菌落数 CFU/ml平皿1平皿211%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯802Dey-Engley Neutrali

42、zing Broth（D/E）30.9%氯化钠溶液3.1 阴性对照组结果仅限有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。3.2 工作菌液为金黄色葡萄球菌时，中和剂鉴定试验结果组号项目类型菌落计数结果（ CFU/ml）75%乙醇溶液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯800.1%新洁尔灭溶液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯800.01%新洁尔灭溶液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯800.04%84消毒液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯80手消毒液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯801:256酸性苯酚中和剂：D/E1:128碱性苯酚中和剂：D/ESpor-Klenz杀孢子

43、剂中和剂：D/E1（消毒剂+工作菌液)+稀释液，混合液B、10-12(消毒剂+工作菌液)+中和剂，混合液B、10-13中和剂+工作菌液，10-2、10-34(消毒剂+中和剂)+工作菌液，10-2、10-35阳性对照组，10-2、10-36稀释液和中和剂各1.0ml 7第3、4、5组间误差率可接受标准l 第1组无菌生长，或仅有少说试验菌菌落生长；l 第2组菌落数比第1组菌落数多，但比第3、4、5组菌落数少；l 第3、4、5组有相似菌落数生长，其每组间菌落数是误差率不超过15%；l 第6组阴性对照组应无菌生长。结论3.3 工作菌液为枯草芽孢杆菌时，中和剂鉴定试验结果组号项目类型菌落计数结果（ CF

44、U/ml）75%乙醇溶液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯800.1%新洁尔灭溶液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯800.01%新洁尔灭溶液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯800.04%84消毒液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯80手消毒液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯801:256酸性苯酚中和剂：D/E1:128碱性苯酚中和剂：D/ESpor-Klenz杀孢子剂中和剂：D/E1（消毒剂+工作菌液)+稀释液，混合液B、10-12(消毒剂+工作菌液)+中和剂，混合液B、10-13中和剂+工作菌液，10-2、10-34(消毒剂+中和剂)+工作菌液，10-2、10-35

45、阳性对照组，10-2、10-36稀释液和中和剂各1.0ml 7第3、4、5组间误差率可接受标准l 第1组无菌生长，或仅有少说试验菌菌落生长；l 第2组菌落数比第1组菌落数多，但比第3、4、5组菌落数少；l 第3、4、5组有相似菌落数生长，其每组间菌落数是误差率不超过15%；l 第6组阴性对照组应无菌生长。结论3.4 工作菌液为大肠埃希菌时，中和剂鉴定试验结果组号项目类型菌落计数结果（ CFU/ml）75%乙醇溶液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯800.1%新洁尔灭溶液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯800.01%新洁尔灭溶液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯800.04%84消

46、毒液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯80手消毒液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯801:256酸性苯酚中和剂：D/E1:128碱性苯酚中和剂：D/ESpor-Klenz杀孢子剂中和剂：D/E1（消毒剂+工作菌液)+稀释液，混合液B、10-12(消毒剂+工作菌液)+中和剂，混合液B、10-13中和剂+工作菌液，10-2、10-34(消毒剂+中和剂)+工作菌液，10-2、10-35阳性对照组，10-2、10-36稀释液和中和剂各1.0ml 7第3、4、5组间误差率可接受标准l 第1组无菌生长，或仅有少说试验菌菌落生长；l 第2组菌落数比第1组菌落数多，但比第3、4、5组菌落数少；l 第3、4、5组有相似菌落数生长，其每组间菌落数是误差率不超过15%；l 第6组阴性对照组应无菌生长。结论3.5 工作菌液为白色念珠菌时，中和剂鉴定试验结果组号项目类型菌落计数结果（ CFU/ml）75%乙醇溶液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯800.1%新洁尔灭溶液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯800.01%新洁尔灭溶液中和剂：1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯800.04%84消毒液中和