柱层析和薄层层析实验报告

1、-/柱层析和薄层层析实验报篇一：柱层析实验报告柱层析分离色素一、【实验目的】1. 了解柱层析的分类，掌握各种柱 层析的原理。2. 熟练掌握吸附层析的原理和操作 技术。二、【实验原理】a、叶绿体色素是植物吸收太阳光能进 行光合作用的重要物质，主要有叶绿素 叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识 和了解的前提。禾o柱层析等。柱 是根据混合物中各组分对固定相的吸附能 力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特 ，可用95%乙醇或无水乙醇提取。 分 离色素的方法有多种，如纸层析、 主层析法是色谱法中的一种，它度不同将各组分分离。常用的柱色谱有吸

2、附色柱谱和 分配柱色谱两类。吸附柱色谱通常是在 玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或 粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅 胶），当混合物的溶液端,脱。流经吸附柱时，就被吸附在柱的上 然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗 由于不同化合的吸附能力不同，在物在吸附柱溶剂中的溶解度也不同，因此各组 分随溶剂以不同速度下移，形成色带。继续用溶剂洗 脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先 流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再 解吸。用柱层析法可以分别收集各组分， 并逐个鉴定。本实验是把三氧化二铝填 入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂， 将叶绿体色素的石油醚,色素即被吸提取液倾于吸附柱附。I于色素

3、的种类不同，被吸附的强 弱不同，就在吸附三上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力， 用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的 色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡 萝卜素）的分离。三、【实验材料】 原料： 新鲜的菠菜叶 试剂：无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化1. 二铝石英砂6 .饱和氯化钠溶液 丙酮7.水硫酸钠石油醚（60-90C） 8洗脱液： =1: 9器材：层析柱（1 研钵，蒸馏装置，脱脂 天平， 烧杯，过滤漏斗，玻璃 分液漏斗，试管，铁2.!1!3.nm!1!3. 丙酮：石油醚 X 30cm）, 棉， 棒，锥形瓶， 架台四、【实验操作】1. 色素的提取：20克菠菜

4、，加少许石英砂，再加20 毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤， 保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一 次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中，再加入40 毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶 液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无 色，保留上层溶液，转移至三角瓶中， 加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用.样品的浓缩:2将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多 余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右， 以备加样使丿3. 层析拄的制备：15克碱性三氧化二铝加入30毫升 石油醚搅拌，浸泡10min.。在层 IR析拄内加入一团棉花在底部，再加 入石英砂0.5cm以上，然后用石

5、油醚 充满柱子，再重复使用下面的石油醚，nm将浸泡好的三氧化二铝倒入柱内， 倒时应该缓慢， 直到装完。用石卜样油醚洗柱内壁，顶部加一小团棉花， 然后再填入石英砂0.5厘米高3品的分离层析：吸附层析分离HIR色素 打开层析拄下部开关，向拄内加 入2毫升浓缩液，至液体没入砂内，再 加入石油醚冲洗拄壁，液体浸入砂内， 加洗脱液开始层析，可以看到不同色带 如图片1，直至第一条色带洗脱完毕，在拄 下面用试管接收第一条色带的洗脱液， 如图片2。二层析柱中五、【实验结果】 实验结果如下图：图出现黄色带 图二：提取出的黄色胡萝 素结果分析：洗脱过程中，首先有一条黄色的色 带圈沿着层析柱下移，色带圈的各个方 向

6、的移动速度并不是完全相同，原因在于层析柱 的制作过程并不完全均一，使层析柱内 部不均匀，以至于色带各方向的移动速度不同。最后 收集得到亮黄色的胡萝卜素。七、【注意事项】1、萃取时不要剧烈振荡，以防止发 生乳化现象。使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中是必'要的，2、为了保持柱子的均一性'性。因此要保证否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干裂, 影响渗透和显色的均 整个装样过程中溶剂要高于三氧化二铝的表面3、在吸附剂上端加入脱脂棉（或滤 纸）是使加样品时不致把吸附剂冲起； 在吸附柱下端加脱脂棉（或沙子）可以防止吸附 剂细粒流出。4、层析柱填装紧密与否，对分离效 果很有影响，若各部分松

7、紧不匀，会影 响渗透速度和显色的均匀。紧凝胶，色素分离不开；也不要过 使柱装得太松，导致层析过程中，凝胶床高度下降, 色素洗脱很慢。因此应控制洗脱流速， 以每分钟60-80滴为宜。7、样品一定要足够浓缩，加样量不 要过大，过大，分离条带过宽，如果层 析拄不够长，各组分不易分开，易同时洗脱下来;6、洗脱流速不宜过快，避免因此压 紧凝胶，色素分离不开；也不要过慢，加样量过少，色带不是很清楚，不易观 察，效果不好。8层析柱粗细必须均匀，柱管大小 可根据试剂需要选择。一般来说，细长 的柱分离效果柱管较好。若样品量多，最好选用内径 较粗的柱，但此时分离效果稍差。 内径太小时，会发生“管壁效应”，即柱管中

8、心部分的 组份移动慢，而管壁周围的移动快。柱 越长，分离效果越好，但柱过长，实验时间长，样品 稀释度大，分离效果反而不好八、【实验小结】在该柱层析分离色素实验中，我了 解了柱层析技术的相应方法和原理，学 会了层析柱的制作和准备，进一步了解绿叶中色 素的组成及各色素的颜色和性质、洗脱 液的配比、层析柱的制作及洗脱液的流速是本实验成 功与否的二大关键因素。 知识拓展：1、溶剂的选择：（1）吸附剂要求较纯，否则会影响 样品的吸附和洗脱（2）溶剂和吸附剂不能起化学反应。）、二（3）溶剂的极性应比样品小，如果 品不宜被吸附剂吸附（4）溶剂对样品的溶解度不能太 大，否则影响吸附，但也不能太小，溶 液的体

9、积增加，易使色谱分散。（5）可使用混合溶剂，如有的组分 含有较多的极性基团，在极性小的溶剂 中溶 解度太小。也可选用极性大的溶剂 溶解，然后加入一定量的非极性溶剂 这样既降低了极性，又减少了溶液的体积。卜样后 尸用合适 的溶剂进行洗脱,这种溶剂称为洗脱剂。 如果原来用于溶解样品的溶剂冲洗柱不能达到 分离的目的，可以改用其他溶剂， 极性较强的溶剂影响样品和氧化铝之间的吸附，容易 将样品洗脱下来，达不到分离的目的 因此常用一系列极性渐次增强的溶剂， 既先使用极性最弱的溶剂，然后加入不 同比例的般2、洗脱剂的选择： 品吸附在氧化铝柱极性溶剂配成洗脱溶剂。常用的洗 脱溶剂的极性按如下次序递增。己烷和

10、IR石油醚V环己烷V!1!四氯化碳V三氯乙烯V二硫化碳V 甲苯V二氯甲烷V氯仿V乙醚V乙酸乙 酯V丙酮V丙醇V乙醇V甲醇V水V吡啶V乙酸。篇 二：实验六：薄层层析与柱层析 实验六 薄层层析与柱层析实验目的1. 了解偶氮苯的光学异构反应，加 深对光化学反应的理解。2. 掌握薄层层析的基本操作，薄层 层析分离顺、反式偶氮苯。3. 了解柱层析分离有机化合物的原 理，初步掌握层析柱装填和洗脱的操作 方法4. 采用柱层析分离反式偶氮苯与靛 红的混合物实验原理偶氮苯是最简 单的芳香偶氮化合物，众多偶氮染料的 母体结构。含有两个苯基分别与偶氮基-n二n-两端相连的结构。偶氮 苯有毒，易燃。偶氮苯有顺（Z）-

11、反（e） -异构体。反式MIR为橙红色棱形晶体，蒸气为深红色， 溶于乙醇、乙醚、醋酸和水。反式的热力学性质稳定。当溶于乙醇的偶氮苯用一定强度的 紫外光照射时，顺式的比例逐渐增大， 直至达到平衡，形成顺反异构体的混合物。偶氮苯的 光致异构是很多偶氮类功能材料光响应 的基础。顺式为橙红色片状晶体，不稳定，在加热或 可见光照射下能够变成反式。色谱方法 是通过在固定相和流动相间分配的不同 而将物质分离开。待分离混合物各组分在固定相上的吸附强度不同，与流 动相一起移动的速度也不同，因此被分 离开。薄层色谱属于固-液吸附色谱。薄 层色谱板中的固定相中的微孔结构使得 溶剂在毛细管作用下能够沿着色谱板向上移动

12、。由 于混合物中各组分对吸附剂（固定相） 的吸附能力不同，当展开剂（流动相）流经吸附剂时 发生无数次吸附解附过程，吸附力弱的 组分随流动相迅速最终在固定相薄层析上分离。向前移动，吸附力强的组分滞留在 I于各组分具有不同的移动速度，tic除了用于分离外，还可以通过与已知结构的的化合物比 对，鉴定少量有机混合物的组成，它也 是柱色谱寻求最佳展1图中红色化合物的开剂的手段。rf等于竖直红线的长度除以竖直蓝线的 长度。柱层析也属于固-液吸附色谱。在 一根玻璃“分离柱”中进行。管中装上 适当的粉末作为国定相。待分离或纯化物质的溶液 （流动相）在重力作用下流经吸附剂时， 不同物质对溶剂和吸附剂的亲和力不同

13、，因而被吸 附的程度不同，从而以不同速度流动， 使化合物得以分离。靛红与偶氮苯在极性上具有较大差 异，从而可以使用极性适中的展开剂， 通过柱层析将二者分离。仪器与试剂吕，分析天平，tic，锥形瓶，毛细管， 层析柱，棉花，量筒，硅胶，蒸发皿， 展缸；etoac, IRch2cl2,石油醚，靛红；请自带尺子 （用于计算rf值）颜老师在实验开始之前已经准备好的试剂：a.偶氮苯的溶液（15 mg in 1ml etoh）； b. 靛红的溶液（15 mg in 1ml ch2cl2）;c.靛红与偶氮苯的均匀混合物（靛红1.4 g +偶氮苯 3.5 g）。实验内容a）光照异构化取0.1 g反式偶氮苯溶于5

14、 ml无水乙 醇中，将此溶液放于试管中，密封，置 于可见光下二星期，以便与光照前的溶液进行 对比。b）薄层层析取管口平整的毛细管吸取光照后的 偶氮苯溶液，在离薄层板边沿约0.5 cm的起点线上点卜样。待乙醇挥发后,样。再用另一毛细管吸取未经光照 的反式偶氮苯溶液点 将点好样品的薄）、二八、层板放入内衬滤纸的展缸中。展缸 内已放置展开剂（乙酸乙酯/石油醚 =1/40）。薄层板的点端在下方，浸入展开剂，展开剂不 要没过起点线，也不要碰到样品点。待 展开剂前沿上升到离板的上端约1 cm处时，取出薄 层板，立即用铅笔在展开剂上升的前沿 处划一记号，置于空气中晾干。可观； 到薄）、二层板上经光照后的偶氮

15、苯溶液点处上端有两个黄色斑点（哪一个斑点是 顺式的？哪一个斑ethyl点是反式的？）。计算异构体的rf 值。用上述相同的方法，采丿、 acetate : p etroleum ether = 1:1 为展开 剂，对靛红与偶氮苯的混合物进行tlc,为下面 的柱层析选择展开剂。c）柱层析1. 将层析柱固定在铁架台上，一定 要保持柱子竖直。2. 将层析柱洗净后在柱底部放入一 小团脱脂棉花。”3.在锥形瓶中称重7g硅胶（sio2）,并用 ethyl acetate : petroleum ether （1:40） 调匀。在层析柱的下方放置一个锥形瓶， 以收集流下的液体。加入少量洗脱剂于 层析柱中，以润

16、湿棉花，使其贴在柱子 下端。4. 打开层析柱活塞，控制溶剂下流， 将硅胶悬浊液沿柱子侧壁加入，并用少量的溶剂洗去残余的硅胶，并加入柱 中。用装有橡皮管或塞子由下向 二 轻敲击柱子外壁，将气泡赶出，使硅胶 填装均匀。并加压使硅胶紧密，以获得较好的分离效果。轻轻敲击，使硅胶 最上层成均匀平面，然 后用药匙沿柱 子侧壁，轻轻地、慢慢地在硅胶表面覆 盖一层海砂（注意：不要破坏硅胶 即。关闭活塞，备用5.打开活塞，当溶剂液面降至海砂 表面时，关闭活塞。用滴管沿柱子侧壁 加入靛红与偶氮苯混合物的溶液（称取 40 mg,置于1.5ml的塑的上平业、丰¥7料样二品管，加入 1 ml二氯甲烷（ch2c

17、l2）,超声振荡使其 溶解）。打开活塞，使溶剂液面降至海砂 表面，关闭活塞。再用少量的展开剂洗 塑料样品管，加入层析谱中，并注意洗去粘附在柱壁上的液滴， 打开活塞，流到液面，关闭活塞。重复 上述操作，直到将所有化合物冲到硅胶里面。petroleum ether （1:40），打开活 保持一定的流速，观察色带的6.沿侧壁加入大量的洗脱剂ethyl acetate : 塞，加压 形成和分离7 当第一个有色带到达柱底时，并 且没有流出之前，关闭活塞，倒空锥形 瓶，打开活塞，收集全部色带。然后， 改用 ethyl acetate : petroleum ether (1:1) 作为洗脱剂。关闭活塞，换

18、一个空 的且干净的锥形瓶，打开活塞。 当第二 个有色带到达柱底时，并且没有流出之 前，关闭活塞，倒空锥形 塞，收集全部色带三层析分离结束后，采用tlc对 上述分离的两个溶液进行分析，总结分 离效果。同时，打开层析柱活塞，在加 压下让展开剂流8瓶，打开活 主层析分离结束。，然后将硅胶 倒入 指定的固体废物桶中。切勿倒入水槽或 通垃圾桶。预习时的问题1. 在薄层层析实验中，为什么点样的 样品斑点不可浸入展开剂的溶液中？为 什么进行薄层层析时展缸要盖上盖？2. 当用混合物进行薄层层析时，如何 判断各组分的在薄层板上的位置？靛红 与偶氮苯，哪一个的极性较强？为什么？3. 柱层析时柱中若留有空气或者是

19、填装不均匀，对分离效果有何影响？如何避免？4. 偶氮苯和靛红物理化学性质？毒 性？有什么应用？偶氮苯光照异构化的 机理？ why is其它阅读材料trans-azobenzene more stable than cis-azobenzene?1. 光化学11由光的作用引起的化学反应近年来 日益受到人们的重视，光合作用就是最 :要的光化学反应。研究激发态分子化学行为的 光化学反应已经成为有机化学的一个 要分支。光不仅可以引起多种多样的化学反应，合成 各种前所未有的奇妙反应分子，而且与 我们的日常生活及生命现象有着密切的联系。2. 薄层色谱1. 固定相的选择氧化铝和硅胶是薄层层析色谱常用 的固定

20、相。氧化铝多用于分离碱性或中 性有机物；而硅胶的吸附性源于表面的si-oh基， 主要用于分离酸性、中性有机物质。薄层色谱用的硅胶有薄层色谱用的硅胶有60g、6ogf254、60h、60hf254 和 60hf254+366竺类型，八、中g表示含有13%硫酸 钙（作为黏合剂）；h表示不含硫酸钙； f254表示含有2%无机荧光物质，在254 nm的紫外光 照射下发出绿色荧光。与硅胶相似，氧 化铝也因含有黏合剂或荧光剂而分为氧化铝h、氧化铝 g、氧化铝hf254和氧化铝gf254等类型。 黏合剂除硫酸钙外，还可用淀粉、羧甲 基纤维素（cmc）。2. 操作方法卜样点、匕）、二在薄层板一端约1cm处，用

21、铅笔轻 轻划一条作为起点线。 溶剂溶解后，用毛细管吸取样品溶液，轻轻接触 到起点线的某一位置 可多点几次，但要等第一次样品溶剂挥发后，再点 第二次。点好样品后，待溶剂挥发干净， 才可以进行下面的展开过程。展开剂品用易挥发,如果溶液太稀，的选择I于硅选择展开剂，首先应考虑对被分离 物有一定的溶解度和解吸能力。 胶和氧化铝都是极性吸附剂，所以展开剂的极性 越大，试样在薄板上移动的距离越远，rf 值（rf值是一个化合物在薄层板 开剂上升的高度的比二升的高度与展 值）越大。例如， 在分离过程中常发现rf太小，说明展开 剂极性不够，需要考虑加入一种极性强 的展开剂进行调控。发现rf值太小，说 明展开剂极

22、性不够，需要考虑加入一种 极性强的展开剂进行调控。常用展开剂 的洗脱力由小到大的顺序为：石油醚、 环己烷、四氯化碳、二氯甲烷、氯仿、 乙醚、四氢咲喃、乙酸乙醋 IRniR普、等。丙酮、 正丁醇、乙醇、甲醇、水、冰乙酸、吡 啶、有机酸等。此外，在展开过程中， 展开缸内展开剂的蒸气须始终处于饱和 状态。一般可用一块方型滤纸贴于缸壁上（下端浸于展开剂 中），盖好密封一段时间。取放薄层板应 迅速。显色篇三： 层析知识总结柱层析知识总结/、 小木虫（金币+1）:奖励一下，鼓励发 有价值的话题篇二：氨基酸的薄层层析实验报告 生物化学实验报告姓 名:XXXXX学 号: XXXXXXXXXXXXXX 专业年级

23、：XXXXXXXXXXXXXXX 组别：第X实验室生物化学与分子生物学实验教学中 心实验名称实验日期 XXXX-XX-XX合作者评分XXXX氨基酸的薄层层析实 验地点指导老师第X实验室XXX教 师签名批改日期一、实验目的1、掌握薄层层析法的实验原理。2、掌握氨基酸薄层层析法的基本操 作方法。3、掌握如何根据移动速率（Rf值） 来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液） 的方法。二、实验原理1、薄层层析法是色谱分析技术的一,形成薄层（常用厚度为种。是将吸附剂、载体或其他活性物质 均匀涂铺在平面板（如玻璃板、塑料片、 金属片等）卜样以彼此分开0.25毫米左右）后，在此薄层上进行层 析分离的分析方法。一般

24、是将固体吸附 剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。 当液相（展开溶剂）在固定相上流动时， 由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一 样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度 ，点在薄板上的混合氨基酸样品 随着展开剂的移动速率也不同，因而可 。（即通过吸附-解吸-再吸附- 再解吸的反复进行，而将样品各组分分 离开来）硅胶吸附薄层层析： 吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶。硅胶：表达式为SiO2 - XH2Q 层析用硅胶是一种多孑孔性物质，它的硅 氧环交链结构表面上密布极性硅醇基（-Si OH）,这种极性的硅醇基能和许 多化合物形成氢键而产生吸附.相关。、匕硅胶吸附薄层层析的特点： 硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱

25、， 其吸附活性也与含水量呈负，'生、或酸性成分的分离, 硅醇基显较弱的酸性，因此，硅 胶只能用于中，碱性成分不能用它分离。 硅胶的活化温度通常为105C 110C，不能过高。2、氨基酸与茚三酮的显色反应：茚三酮水化后生成水化茚三酮，它 与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、 氨及醛，与此同时，还原茚三酮又与氨 及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基 酸斑点显色。3、混合氨基酸被分离后在薄层层析 图谱上的位置用相对迁移率一 Rf值（rate of flow） _来表示。层析中，物质沿溶剂运动方向迁移 的距离与溶液前沿的距离之比为 Rf值。即:Rf=原点到层析斑点中心的距离原 点到斑点对应前沿的距

26、离由于物质在一定溶剂中的分配系数 是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒 定的，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物!1!1!niR!1!1!质。2、材料与方法：（一）、材料：分析样品（氨基酸混氨酸）、展开-合液）、吸附剂（硅胶）、粘合剂（0.5% 的羧甲基纤维素钠）、氨基酸的异丙醇溶 液（丙氨酸、精氨酸、甘 显色剂（正丁醇、乙酸、水、茚三酮溶 液）；（二）、器材：层析板（5cm X 15cm） 尺子、铅笔、小烧杯、玻棒、量筒（10ml）、 吹风机、毛细玻璃管、层析缸、药匙、 烘箱；（三）、方法：1、实验流程：2、操作步骤：（1）（2）（3）（4）四、结果与讨论：卜样薄层板的制备： 占 八、 层析

27、 显色（一）结果：1、实验数据：篇三：柱层析、薄层层析 主色谱、薄层色谱、实验目的1、了解色谱法分离提纯有机化合物 的基本原理和应用。2、掌握柱层析、薄层层析的操作技术。二、实验原理色谱法（Chromatography）亦称色 层法、层析法等。色谱法是分离、纯化和鉴定有机化 合物的重要方法之一。色谱法的基本原 理是利用混合物各组分在某一物质中的 吸附或溶解性能（分配）的不同，或其 亲和性的差异，使混合物的溶液流经该 种物质进行反复的吸附或分配作用，从 而使各组分分离。色谱法在有机化学中的应用主要包 括以下几方面：可得到满意的结果1、分离混合物 一些结构类似、理 化性质也相似的化合物组成的混合物

28、， 一般应用化学方法分离很困难，但应用 色谱法分离，有时制提纯化合物有机化合物中 含有少量结构类似的杂质，不易除去， 可利用色谱法分离以除去杂质，得到纯 品。3、鉴定化合物在条件完全一致的 情况，纯粹的化合物在薄层色谱或纸色 谱中都呈现一定的移动距离，称比移值 （Rf值），所以利用色谱法可以鉴定化合等。物的纯度或确定两种性质相似的化合物 是否为同一物质。但影响比移值的因素 很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的大 小，酸碱性，活性等级，外界温度和展 开剂纯度、组成、挥发性等。所以，要 获得重现的比移值就比较困难。为此， 在测定某一试样时，最好用已知样品进 行对照。4、观察一些化学反应是否完成，可 以

29、利用薄层色谱或纸色谱观察原料色点 的逐步消失，以证明反应完成与否。,而后用溶剂洗脱或展开,柱色谱常用的有吸附色谱和分吸附色谱主要是以氧化铝、硅胶 为吸附剂，将一些物质自溶液中吸附到 它的表面 利用不同化合物受到吸附剂的不同吸附 作用，和它们在溶剂中不同的溶解度， 也就是利用不同化合物在吸附剂上和溶 液之间分布情况的不同而得到分离。吸 附色谱分离可采用柱色谱和薄层色谱两 种方式。配色谱两种。吸附色谱常用氧化铝和硅 胶为吸附剂。分配色谱以硅胶、硅藻土 和纤维素为支持剂，以吸收较大量的液 体作为固定相。柱色谱常用的吸附剂有氧化铝、硅中性和碱,、匕niRHIR!1!1!V级的吸II , III胶、氧化

30、镁、碳酸钙和活性炭等。供色 谱使用的氧化铝有酸性、种。碱性氧化铝适用于碳氢化合物、生 物碱以及其它碱性化合物的分离。中性 氧化铝应用最广，适用于醛、酮、醌以 及酯类化合物的分离。酸性氧化铝适用 于有机酸类的分离。氧化铝的活化分IV 五级，I级的吸附作用太强， 附作用太弱。所以一般常采用 级。化合物的吸附性和它们的极性成正 比，化合物分子中含有极性较大的基团 其吸附性较强。氧化铝对各种化合物的 吸附性按下列顺序递减。酸、碱>醇、胺、硫醇>酯、醛、酮lill；gt;芳香族化合物>卤代物、醚>烯>饱和烃。试样吸附在氧化铝柱 的溶剂

31、进行洗脱，这种溶剂称为洗脱剂。 常用洗脱溶剂的极性按以下次序递增：己烷、石油醚V环已烷V四氯化碳 V三氯乙烯V二硫化碳V甲苯V苯V二 氯甲烷V三氯甲烷V乙醚V乙酸乙酯V 丙酮V丙醇V乙醇V甲醇V水V吡啶V 乙酸 IR!1!后，用合适薄层色谱又叫薄板层析，是色谱法 中的一种，是快速分离和定性分析少 物质的一种很重要的实验技术，属固-液 吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸色谱的 优点，一方面适用于少量样品（几微克， 甚至0.01微克）的分离；另一方面在制 作薄层板时，把吸附层加厚加大，又可 用来精制样品，此法特别适用于挥发性 较小或较高温度易发生变化而不能用气 相色谱分析的物质。此外，薄层色谱法 还可用

32、来跟踪有机反应及进行柱色谱之 前的一种“预试”。，口果、活化后点上待分离的样品。当）、二薄层色谱分为薄层吸附色谱与薄层 分配色谱两种，本节介绍的是薄层吸附 色谱。薄层色谱是将吸附剂均匀地涂在 玻璃板（或某些高分子薄膜）上作为固定 相，经干燥 用适当极性的有机溶剂作为展开剂（即 流动相）。当展开剂在吸附剂上展开时， 品中各组分对吸附剂吸附能力不 同，发生了无数次吸附和解吸过程，吸 附能力弱的部分（即极性较弱的）随流 动相迅速向前移动，吸附能力强的组分 （即极性较强的）移动慢。利用各组分在展开剂中溶解能力和被吸附能力的不同，最终将各组分彼 此分开。如果卜样的。各组分本身有颜色则薄层板干燥后 会出现

33、一系列高低不同的斑点，如果本 身无色，则可用各种显色方法使之显色， 以确定斑点位置。在薄板上混合物的每 个组分上升的高度与展开剂上升的前沿 之比称为该化合物的R f值，又称比移 值。对于一个化合物当实验条件相同时 其 R f值是薄层色谱最常用的吸附剂是硅胶及 氧化铝。硅胶是无定形多孔物质。略具酸性， 适用于中性或者酸性物质的分离，薄层 色谱用的硅胶可分为：硅胶H-不含粘合剂和其他添加剂。硅胶G-含煅烧石膏(CaS04 1/2H2O)、粘合剂。硅胶HF254-含荧光物质，可在波长 254nm紫外光下观察荧光。硅胶GF254-含煅烧石膏及荧光物质。与硅胶相似氧化铝也因含粘合剂或 荧光剂而分为氧化铝

34、G及GF254及氧化 铝HF254氧化铝的极性比硅胶大，比较适用分离极性小的化合物。通常将薄板按加粘合剂和不加粘合 剂分为两种，加粘合剂的薄层称硬板， 不加粘合剂的称软板。常用的粘合剂除 煅烧石膏外还有淀粉、羧甲基纤维素钠(CMC)。化合物的吸附能力与它们的极性成 正比，极性大则与吸附剂的作用强，随 展开剂移动慢，Rf值小；反之极性小则 Rf值大，因此利用硅胶或氧化铝薄层色 谱可把不同极性的化合物分离，甚至结 构相近的顺、反异构体也可分开三、基本操作：(含仪器装置和主要 流程图)1、柱色谱操作步骤：(1) (2)(3)柱色谱装置(1 )装柱：取清洁、薄层板在不同的层析缸中展开的方 式盖-层厚约

35、一张比柱直径略 币后将氧化铝装入管内燥色谱柱, 在玻璃管底铺一层玻璃棉或脱脂棉，轻 轻塞紧，再在玻璃棉上 0.5cm的石英砂(或丿 小的滤纸代替)，(湿法或干法)。湿法装柱：是将备用的溶剂装入管 内，约为柱高的四分之三，而后将氧化 铝和溶剂调成糊状，慢慢地倒入管中。 此时应将管的下端旋塞打开干法装柱：是在管的上端放一干燥漏斗，使氧化铝均匀地经干燥漏斗成一 细流慢慢装入管中，中间不应间断，时 时轻轻敲打柱身，使装填均匀，全部加 入后，再加入溶剂，使氧化铝全部润湿 另外也可先将溶剂加入管内，约为柱高 的四分之三处，而后将氧化铝通过一粗 颈玻璃漏斗慢慢倒入并轻轻敲击柱身。 此法较简便卜样（2）加样：

36、把要分离的试样配制成 适当浓度的溶液。将氧化铝上多余的溶 剂放出，直到柱内液体表面到达氧化铝 表面时，停止放出溶剂。沿管壁加入试溶液，注意不要使溶液把氧化铝冲松 浮起，试样溶液加完后，开启下端旋塞， 使液体渐渐放出，至溶剂液面和氧化铝 表面相齐（勿使氧化铝表面干燥）即可 用溶剂洗脱（3）洗脱和分离：在洗脱和分离的 彳寸程中 应当注意： '不断加入洗脱剂，并保持一定高旦流干，再加溶剂， 匚气泡和裂缝，影响分度的液面，在整个操作中勿使氧化铝表 面的溶液流干，- 易使氧化铝柱产生 离效果。可直接观察。洗脱后 收集洗脱液，如试样各组分有颜 色，在氧化铝柱分别收集各个组分。在多数情况下，化 合物

37、没有颜色，收集洗脱液时，多采用 等份收集，每份洗脱剂的体积随所用氧 化铝的量及试样的分离情况而定。个柱 控制洗脱液的流出速度，一般不 宜太快，太快了柱中交换来不及达到平 衡，因而影响分离效果。 由于氧化铝 表面活性较大，有时可能促使某些成分 破坏，所以应尽量在一定时间内完成一主色谱的分离，以免试样在柱上停留的时间过长，发生变化。2、薄层色谱操作步骤： IR卜样尸小、，垂直轻轻的点在起点线 溶液太稀。一次点样不够，则可待前一。若 点样 在距薄板一端1cm处用铅 笔轻轻划一横线作为起始线。将样品溶 于低沸点溶剂（如甲醇、乙醇、丙醇、 氯仿、苯、乙醚及四氯化碳）配成 1%左 右的溶液，用内径1mm管

38、口平齐的毛细 管占l=r 八、次试样点干后，在原点样处再点，点样 后的直径不要超过2mm,点样斑点过大， 往往会造成脱尾、扩散等现象，影响分 离效果。一块薄层板可以点多个样，但 点样点之间距离以0.51.5cm为宜。展开剂的选择和展开、展开剂的根据样品的极性、溶解度和因素。溶液的极性越大，选择主要 吸附剂的活， 则对化合物解吸的能力越强，也就是说 R f值也越大。如果出现样品各组分R f 值都较小，则可加入适量极性较大的溶 剂。晾干。（3）显色晾干后若分离的化合物本 身有色，在薄层板 分斑点。如果本身无色，用的是含荧光可看到分开的各组薄层色谱的展开需要在密闭容器内 进行。将选择的展开剂倒入层析

39、槽或层 析缸中（液层高度约为0.5cm）,待容器 内容积蒸汽达到饱和后，再将点好的薄 层板放入槽或缸中进行展开（含粘合剂 的板可倾斜45°60°角）,注意点样的 位置必须要在展开剂液面之上。当展开 剂展开，其前沿上升到板顶端 510mm 处时，取出薄板，用铅笔划处前沿的位 置、剂的薄层板在紫外光下一般呈暗色斑 点；有时用腐蚀性的显色剂如浓硫酸、 浓盐酸和浓磷酸等显色；也可待溶剂挥 发后的薄板放入有几粒碘并充满碘蒸汽 的密闭容器中许多化合物都能与碘形成 黄色斑点，但要注意当碘蒸汽挥发后斑 点易消失。除此之外，也可以在薄层板 上溶剂蒸发前喷雾显色。用各种显色方法使斑点出现后，应 立即用铅笔划出斑点的位置，并计算R 值。1 、柱四、实验内容：主层析(1) 试剂荧光黄和碱性湖蓝BB的分离 分离样品：0