高温曲中产酱香细菌的分离和筛选试验

1、高温曲中产酱香细菌的分离和筛选试验1.产酱香细菌的分离1.1采样：曲样放入无菌袋密闭及时送实验室，用无菌小刀切开曲块，将大曲外中内层混合均匀，粉碎后备用。1.2平板分离培养基：分离培养基：营养琼脂（g/l）或葡萄糖蛋白胨培养基： 牛肉膏5 蛋白胨10 氯化钠5 琼脂15-20 或蛋白胨5 葡萄糖5 K2HPO4 5高盐培养基：牛肉膏5 蛋白胨10 氯化钠60 琼脂15-20 PH均为7.2-7.4斜面培养基：牛肉膏5 蛋白胨10 氯化钠5 琼脂15-20 种子培养基：酵母膏5 蛋白胨10 氯化钠10或蛋白胨5 葡萄糖5 K2HPO4 5筛选培养基：麸皮99g 葡萄糖1g 加水70ml 高压灭菌

2、30min 或麦粒培养基：小麦粉碎成麦粒麦粉各半，加水1:1.0-1.2 润浸18h，经蒸熟 冷却 打散，称取30-50g/250ml三角瓶，高压灭菌45min。1.3产酱香菌分离：高温培养法 热处理培养法 高盐培养法取1.0g曲粉加入99ml/250ml生理盐水，150r/min 30min，适当稀释，取三个梯度涂布于营养琼脂培养基 45-50培养24h.1.0g曲粉加入50ml/250ml种子培养基中，37 150r/min富集培养24h，80-85热处理20min，适当稀释，取三个梯度涂布于营养琼脂培养基37培养24h.高盐培养法：取1.0g曲粉加入99ml/250ml生理盐水，150r

3、/min 30min，适当稀释，取三个梯度涂布于营养琼脂培养基37培养24h.分离结果与讨论：高温培养法：花瓣状 光滑状 毛绒状三种热处理培养法：花瓣状 毛绒状两种高盐培养法：光滑状 毛茸状 乳头状 水滴状 高温法 热处理法 高盐法 菌落总数：x106 50 1 4高温法耐受高温细菌和高温处于休眠的芽孢，高盐法除芽孢菌外，还有一些耐高盐的微生物。制曲过程中，随制曲温度的升高，水分蒸发，微生物处于高渗高盐状态，部分耐盐微生物生长良好。1.4产酱香细菌的筛选：从三种方法分离得到菌株中选取不同形态菌株各三个进行培养，通过对发酵产物的感观评价筛选出产酱香的细菌。将分离纯化的不同的单菌落接种于种子培养基

4、中，37 200r/min培养24h.吸取1ml加入麦粒培养基三角瓶中，按37 50 60温度梯度依次培养48h（14d），感观评定，选择产酱香较好的菌株作为鉴定菌株。1.5产酱香细菌的鉴定 对28株供试菌株发酵后感观评定筛选出4株产酱香明显的细菌L1 L2 L3 L4菌落形态： 项目 L1 L2 L3 L4 形状 不规则 圆形 丝状 圆形 大小（cm） 0.2-0.4 边缘 不规则 整齐 波状 整齐 表面 皱褶 光滑 皱褶 皱褶 干湿 干燥 湿润 干燥 干燥 透明 不 不 不 不 粘性 无 有 无 无 光泽 无 无 无 无 颜色 灰白 灰白 灰白 灰白 附着程度 易挑 易挑 易挑 易挑菌苔特

5、征： 丰厚 丰满 丰满 丰满 丰满 边缘 突起 突起 突起 突起 粘性 无 有 无 无 透明 不 不 不 不 光泽 无 无 无 无 颜色 灰白 灰白 灰白 灰白生长特征： 菌膜 + + + + 浑浊 - - - - 沉淀 - - - -形体特征： 形状 杆状 杆状 杆状 杆状 两端钝圆 革兰染色 + + + + 位置 中生 中生 中生 中生 芽孢 孢囊 不膨大 不膨大 不膨大 不膨大 形状 圆柱 圆柱 圆柱 圆柱 鞭毛 周生 周生 周生 周生 不同温度生长： 温度 30 40 50 60 70 L1 + + + + +L2 + + + + +L3 + + + + -L4 + + + + -不同

6、PH下生长： PH 3 5 7 9 11 L1 - + + + - L2 - + + + - L3 - + + + -L4 - + + + -糖醇发酵：菌株 葡萄糖 蔗糖 乳糖 半乳糖 阿拉伯糖 木糖 三梨糖 甘露醇 L1 + + - + + + + +L2 + + - + + + + +L3 + + - + + + + +L4 + + - + + + + +菌株其他生理生化试验特征： 过氧化氢酶 + + + + 厌氧生长 + + + + 丙酸盐利用 + + + + V-P反应 + + + + 硝酸盐还原 + + + + 卵磷脂酶 + + + + 7氯化钠 + + + + 石蕊牛奶产酸 - - - - 淀粉水解 + + + + 明胶水解 + + + + 酪素水解 + +