用美蓝溶液鉴定酵母菌的死活

1、用美蓝溶液鉴定酵母菌的死活酵母菌细胞较大,不必染色就能用显微镜观察其形态. 用美蓝染色液可以对酵母菌细胞进行死活染色鉴别.美蓝是一种弱氧化剂,氧化态呈蓝色,还原态呈无色.活的酵母因为新陈代谢不断进行,具有一定的还原能力,能将进入细胞的美蓝还原,而细胞不染色.因此,用美蓝对酵母细胞染色一定时间后,无色的为活细胞,蓝色的为死细胞. 需要注意的是:一个活细胞的还原能力是有限的必须严格控制染色的时间和染料的浓度. 方法:取0.1%美蓝液一滴,滴在玻片中央,加一滴酵母菌悬液,混匀.染色35分钟后 加盖片制成水浸标本片,镜检.用美蓝溶液鉴定酵母菌的死活酵母菌细胞较大,不必染色就能用显微镜观察其形态. 用美

2、蓝染色液可以对酵母菌细胞进行死活染色鉴别.美蓝是一种弱氧化剂,氧化态呈蓝色,还原态呈无色.活的酵母因为新陈代谢不断进行,具有一定的还原能力,能将进入细胞的美蓝还原,而细胞不染色.因此,用美蓝对酵母细胞染色一定时间后,无色的为活细胞,蓝色的为死细胞. 需要注意的是:一个活细胞的还原能力是有限的必须严格控制染色的时间和染料的浓度. 方法:取0.1%美蓝液一滴,滴在玻片中央,加一滴酵母菌悬液,混匀.染色35分钟后 加盖片制成水浸标本片,镜检.7.1 酵母菌的形态结构观察目的要求观察并掌握酵母菌的菌落特征、个体形态、生长及繁殖方式。基本原理酵母菌细胞一般成圆形、卵圆形、圆柱形或柠檬形。每种酵母细胞有其

3、一定的形态大小。大多数酵母菌在平板培养基上形成的菌落较大而厚，湿润、较光滑，颜色较单调（多为乳白色，少有红色，偶有黑色）。酵母菌细胞核与细胞质有明显的分化，个体直径比细菌大几倍到十几倍。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖。实验材料酿酒酵母（红酵母），无菌水，0.1%美蓝液，中性红染液，苏丹黑,二甲苯，0.5%蕃红，无菌水，显微镜，载玻片及盖玻片。实验内容(一)        菌落特征的观察取少量酿酒酵母、红酵母划线接种在平板培养基上，28300C培养3d。观察菌落表面湿润或干燥，有无光泽、隆起形状，边缘的整齐度、大小、

4、颜色等。 （二）个体形态与出芽生殖酵母菌细胞较大，观察时可不染色，用水浸片法观察，即在载玻片中央滴加一小滴无菌水或滴加0.1% 美蓝液一小滴，无菌操作用接种环取酿酒酵母少许（并注意酵母菌培养基结合是否紧密），置于无菌水或美蓝液中，使菌体与其混合均匀。将盖玻片斜置轻轻盖在液滴上。制片先用低倍镜，再换高倍镜观察酵母菌细胞的形状及出芽方式。 （三）液泡的活体染色观察在洁净的载玻片上加一滴中性红染液，用接种环取少许酿酒酵母与染液混匀，染色45min，加盖玻片在显微镜下观察。中性红是液泡的活体染色剂，在细胞处于生活状态时，液泡被染成红色，细胞质及核不着色。若细胞死亡，液泡染色消失，细胞质及核呈现弥散性红色。 （四）脂肪粒染色观察方法1：在载玻片上加一滴无菌水，用接种环取少许酿酒酵母制成涂片，自然干燥后滴加苏丹黑染色5min，水洗，自然干燥，滴加二甲苯脱色至涂片透明，干燥后滴加0.5%蕃红染液复染30s, 水洗，自然干燥后显微镜观察。脂肪粒成黑蓝色，细胞质为红色。方法2：加一小滴苏丹黑液于洁净的载玻片上，挑取少许酵母菌体与之混匀，加盖玻片镜检，脂肪粒染成黑色。结