基因工程技术原理与应用

1、基因工程技术原理与应用（ 总分： 1046.00 ，做题时间： 90 分钟 ）一、填空题 （ 总题数： 51，分数： 198.00）1. BarnH I是识别6个核苷酸的酶，其切割产物的平均长度的理论值是1。（分数： 1.50 ）填空项 1: （正确答案： 40）解析：2. 通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的大小不同的片段，可以构建显 示该区域各限制酶切位点位置的 1 。（分数： 1.50 ）填空项 1: （正确答案：限制酶切图谱）解析：3. EC0K是I类限制性内切酶，分子组成是a 2 B 2丫。a亚基的作用是; B亚基的作用是亚基的作用是 。（分数： 4.50

2、 ）填空项 1: （正确答案：限制 修饰 识别）解析：4. 个体之间DNA限制性片段长度的差异称为1。（分数： 1.50 ）填空项 1: （正确答案：限制性片段长度多态性）解析：5. 限制性内切核酸酶的命名原则是：第一个字母来自 ；第二、三两个字母来自 ；第四个字母则表示 。（分数： 4.50 ）填空项 1: （正确答案：属名 种名 菌株名）解析：6. 在限制性内切核酸酶切反应管中添加各种成分后，需要离心数秒钟，其目的是和（分数： 3.00 ）填空项 1: （正确答案：混匀 防止部分酶切）解析：7. 为了进行部分酶切可以采用下列措施： 、和等。（分数： 4.50 ）填空项 1: （正确答案：降

3、低酶量 缩短反应时间 增大反应体积）解析：8限制性内切核酸酶的识别序列分别由4、6、8对碱基组成，它们在 DNA序列上的切割频率的理论值分别是 、 和 。（分数： 4.50 ）填空项 1:解析：9. 限制性内切核酸酶通常保存在（正确答案： 44 4 8 4 8）1 浓度的甘油溶液中。（分数： 1.50 ）填空项 1: （正确答案： 50%）解析：10.测序酶是修饰了的 T7 DNA聚合酶，它只有 酶的活性，而没有 活性。（分数： 3.00 ）填空项 1:解析：11. 切口平移 （nick translation）（正确答案：5' -3'合成 3' -5'外切）法

4、标记DNA勺基本原理在于的和的作用（分数： 4.50 ）填空项1: （正确答案：DNA酶I内切酶活性 DNA聚合酶I的5' -3'合成酶活性）解析：12.欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变为平末端的双链形式，通常采用的方法是 和（分数： 3.00 ）填空项1: （正确答案：DNA聚合酶I 5' -3'外切酶 5' -3'合成酶）解析：13.反转录酶具有催化 DNA合成的作用，同时还具有 的作用，可以将 DNA-RNA杂合双链中的 消化掉。（分数： 3.00 ）填空项1: （正确答案：RNAB H RNA解析：14. 基因工程中所用的载体

5、主要有三类： 、 和（分数： 4.50 ）填空项 1: （正确答案：质粒 病毒 人工染色体）解析：15. 一个最简单的质粒载体必须包括以下几个部分： 、 和16. 如果两个质粒不能稳定共存于同一个寄主细胞中，则属于 群，这是因为他们的 所致。（分数： 3.00 ）填空项 1: （正确答案：同一不亲和群 复制机制相同）解析：17. 质粒的拷贝数是指细胞中 1 。（分数：1.50 )填空项 1解析：: （正确答案：质粒的拷贝数与基因组数的比值）18.ColEl 质粒复制的起始需要三种酶： 、 和（分数： 4.50 ）填空项1: （正确答案：DNA聚合酶RNA聚合酶RNA酶H）解析：19. 那些没有

6、可以检测表型的质粒称为 1 。（分数： 1.50 ）填空项 1: （正确答案：隐蔽性质粒）解析：20. 噬菌体可以被改造作为基因工程载体，主要是由于 和 （分数： 3.00 ）填空项 1: （正确答案：在大肠杆菌细胞中繁殖复制 背景知识清楚）解析：21. 入噬菌体载体主要有两种类型， 插入型和置换型。就酶切位点来说，插入型为 个；置换型为 个。（分数： 3.00 ）填空项 1: （正确答案：一个 两个）解析：22. M13噬菌体DNA的复制分为三个阶段：、和（分数： 4.50 ）填空项1: （正确答案：S4R RFRF RPSS解析：23. 噬菌粒是由质粒和噬菌体 DNA共同构成的.其中来自质

7、粒的结构主要是 和;来自噬菌体的主要结构是 。24. 入噬菌体由于包装的限制，插入外源DNA片段后，总长度应在噬菌体基因组的1范围内。（分数： 1.50 ）填空项1: （正确答案：75% 105%解析：25. 引物在基因工程中至少有 4 方面的用途： 、 、和 （分数： 4.50 ）填空项1: （正确答案：合成 CDNA合成探针PCR引物DNA序列测定）解析：26. 利用Taq DNA聚合酶进行PCF反应所得产物不是平末端，而是在 端带有一个突出的 ;据此人们设计了 PCR产物的隆法。（分数： 4.50 ）填空项 1: （正确答案： 3' A T 载体）解析：27. 简并引物PCR主要

8、是依据蛋白质的氨基酸序列设计1引物来扩增相应的基因（分数： 1.50 ）填空项 1: （正确答案：简并）解析：28. 现有的克隆基因的策略大体上可以分为三类： 、和分数： 4.50 ）填空项 1:（正确答案：定位克隆功能克隆 表型克隆）解析：29.DNA重组连接的方法大致有4 种： 、 、和 。（分数： 6.00 ）填空项 1:（正确答案：黏末端平末端 同聚物加尾接头连接法）解析：30.SD序列是mRN毋子中与结合的序列， 位于_密码子的上游;在基因组中的对应位置是位点与 位点之间（分数： 6.00 ）填空项 1: （正确答案：核糖体 起始 转录起始 翻译起始）解析：31. 携带有外源基因并能

9、持久传递给子代的植物称为 植物；这些外源基因就叫做 （分数： 3.00 ）填空项 1: （正确答案：转基因 转基因）解析：32. 重组子的筛选有两层含义，一是 ；二是 。（分数： 3.00 ）填空项 1: （正确答案：区分重组子和非重组子 区分带有重组子和非重组子的大肠杆菌）解析：33限制性内切核酸酶切割 DNA后产生5'端突出的黏性末端，可以用 进行3'端标记；如果限制性内切核酸酶切割DNA后产生3'端突出的黏性末端，可以用 进行5'端标记。（分数： 3.00 ）填空项1: （正确答案：Klenow酶T4DNA聚合酶）解析：34. 为了获得单链标记的 DNA探

10、针可以采用以下三种方法：、和（分数： 4.50 ）填空项1: （正确答案：M13载体反转录不对称PCR解析：35. 根据 Northern 杂交的结果可以说明 ；根据 Southern 杂交的结果可以说明 ；根据 western杂交的结果可以说明 ；根据原位杂交的结果可以说明 。（分数： 6.00 ）填空项1: （正确答案：基因是否转录和mRNA勺大小DNA是否存在和酶切片段的大小 相应抗原的存在 互补序列的位置）解析：36. Northern 杂交和 Southern 杂交的根本区别在于 和 。（分数： 3.00 ）填空项 1: （正确答案：样品的区别 电泳方式的区别）解析：37. 欲将某一

11、具有单链突出末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常采用的方法有 和（分数： 3.00 ）填空项1: （正确答案：S1核酸酶切割DNA聚合酶补平）解析：38. 由于不同构型的DNA插入EB的量的不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中迁移率也不同，scDNA的泳动速度; oc DNA的泳动速度 ; 1DNA居中。39. 在基因工程中，导入外源基因的主要方法有 、和 等。（分数： 6.00 ）填空项 1: （正确答案：转化 噬菌体侵染 显微注射 基因枪）解析：40. 在基因组计划中用来构建人基因组DNA文库的载体通常有4种，分别是、和（分数： 6.00 ）填空项1: （正确答案：质粒 入噬菌体YAC

12、 BAC）解析：41. 反向PCR的方法通常用来 ;重组PCF的方法通常用来 ;原位PCR的方法通常用来 分数： 4.50 ）连接两个DNA片段获得靶序列的填空项 1: （正确答案：扩增已知片段两侧的序列 位置信息） 解析：42. 核酸凝胶电泳中常用的染料是 1（分数： 1.50 ）填空项 1: （正确答案： EB）解析：43. 为对某一生物的基因进行全面的研究，只需建立 个基因组文库，同时必须建立 个CDNA文库。（分数： 3.00 ）填空项 1: （正确答案：一个 多个）解析：44. 双脱氧链终止法测定 DNA碱基序列需要的试剂为 、和等。（分数： 6.00 ）填空项1: （正确答案：dN

13、TP ddNTP引物DNA聚合酶）解析：45. Taq DNA聚合酶需要适当浓度的 Mg+才能发挥作用。Mg+浓度升高对Taq DNA聚合酶的效应是; Mg+浓度降低，对Taq DNA聚合酶的效应是 。（分数： 3.00 ）填空项 1: （正确答案：活性升高特异性降低 活性降低特异性升高）解析：46. 普通质粒载体、入噬菌体载体、黏粒载体和噬菌粒的容量由大到小依次为 、 、和（分数： 6.00 ）填空项1: （正确答案：黏粒载体入噬菌体载体 噬菌粒 普通质粒载体）解析：47. 目前栽培面积较大的 5种农作物是 、和。其中以 为最大（分数： 9.00 ）填空项 1: （正确答案：大豆 玉米 棉花

14、 油菜 马铃薯 大豆）解析：48. 外源基因导入植物细胞的方法为 、和。（分数： 4.50 ）填空项 1: （正确答案： Ti 质粒 Ri 质粒 基因枪）解析：（分数： 7.50 ）填空项 1:解析：50. 大肠杆菌中选择性标记一般为49. 外源基因导人动物受精卵的方法有 、 、和 （正确答案：显微注射 病毒侵染 细胞移植 细胞核移植 精子介导）；酵母菌中选择性标记一般为 。（分数： 3.00 ）填空项 1:（正确答案：抗生素抗性基因营养缺陷型）解析：51. 核型多角体病毒有两种表现型和 ；分别感染 _和 （分数： 6.00 ）填空项 1: （正确答案：包埋型 出芽型病毒 不同个体 同一个体的

15、不同细胞）解析：二、判断题（总题数： 26，分数： 26.00）52. 限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的修饰和对自身DNA的限制而实现的。（）（分数： 1.00 ）A. 正确B. 错误 V解析：53. 限制性内切核酸酶在 DNA中的识别/切割位点的二级、三级结构也影响酶切效率。（）（分数： 1.00 ）A. 正确 VB. 错误解析：54. 能够产生限制酶从而防御病毒的侵染的细菌，其本身的基因组DNA中没有该酶的识别序列。（）（分数： 1.00 ）A. 正确B. 错误 V解析：55. 限制性酶切图谱和限制性片段长度多态性图谱的区别在于前者是物理图谱，而后者是连锁图谱。（

16、 ）（分数： 1.00 ）A. 正确 VB. 错误解析：56. 某一限制酶在一环状 DNA上有3个切点，用此酶切割该环状DNA可以得到3个片段。（）（分数： 1.00 ）A. 正确 VB. 错误解析：57. 基因工程中所使用的内切酶不仅具有内切核酸酶活性，也具有甲基化的活性。（ ）（分数： 1.00 ）A. 正确B. 错误 V解析：58. 用同一种限制性内切核酸酶切割载体和外源DNA得到黏性末端后，为防止它们自身环化，要用CIP将他们脱磷酸。 （ ）（分数： 1.00 ）A. 正确B. 错误 V 解析：59. Gap和Nick的含义是不同的，前者是指DNA的单链中有较小的缺失， 后者仅是断开了

17、一个磷酸二酯键。 （ ）（分数： 1.00 ）A. 正确 VB. 错误解析：（分数： 1.00 ）A. 正确 VB. 错误解析：61. 有a、b、c三个质粒，a和b能够共存于一个细胞中，a和c也可以共存于一个细胞中，所以b和c也一定能够共存于一个细胞中。 （ ）（分数： 1.00 ）A. 正确B. 错误 V解析：62. 如果两个质粒可以稳定共存于一个细胞中，这两种质粒则属于同一个不亲和群。（ ）（分数： 1.00 ）A. 正确B. 错误 V解析：63. 能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。 （ ）（分数： 1.00 ）A. 正确 VB. 错误解析：64. 置换型载体是指同一种限制性内切

18、核酸酶在入DNA中具有两个切点，外源DNA通过取代这两个点间的片段被克隆。 （ ）（分数： 1.00 ）A. 正确 VB. 错误解析：65. 噬菌体载体集质粒和丝状噬菌体的有利特征于一身的载体，既能合成单链DNA又能合成双链 DNA （）（分数： 1.00 ）A. 正确 VB. 错误解析：66. 入噬菌体DNA和M13单链噬菌体DNA在成熟前的DNA复制都是用滚环模型。（）分数： 1.00 ）A. 正确 VB. 错误解析：67. 所谓引物就是与DNA互补的一小段RNA分子。（）（分数： 1.00 ）A. 正确B. 错误 V解析：68. 简并引物是根据已知 DNA序列设计的引物群。（）（分数：

19、1.00 ）A. 正确B. 错误 V解析：69. 通过原位杂交得到的阳性克隆就是重组子，但不能判断插入的外源基因是否表达了。（ ）（分数： 1.00 ）A. 正确 VB. 错误解析：70. 核酸杂交的原理是根据 DNA分子间的互补。（）（分数： 1.00 ）A. 正确 VB. 错误解析：71. 突出的 3' 端或凹端的 3' 端都可以用 Klenow 酶进行末端标记。 （ ）（分数： 1.00 ）A. 正确B. 错误 V解析：72. 用氯霉素处理细菌可以使内含的严紧型质粒大量扩增，从而极大地提高其产量。（ ）（分数： 1.00 ）A. 正确 VB. 错误解析：73. 为了在大肠

20、杆菌中高效表达外源蛋白质，常需要考虑的因素有启动子的强弱、SD序列、蛋白的存在方式以及 Poly（A） 加尾信号等。 （ ）分数： 1.00 ）A. 正确B. 错误 V解析：74. 反转录酶是一种依赖于 RNA的DNA聚合酶。（）（分数： 1.00 ）A. 正确 VB. 错误解析：75. 反转录酶催化的信息流是蛋白质-RNA>DNA （）（分数： 1.00 ）A. 正确B. 错误 V解析：76. 在克隆载体pUC系列中，lacZ'基因提供了一个外源基因的选择标记，蓝色的转化菌落通常表明克隆是 失败的。 （ ）（分数： 1.00 ）A. 正确 VB. 错误解析：77. 只有用同一种

21、限制性内切核酸酶切割获得的DNA片段末端才能够用 DNA连接酶连接起来。（）（分数： 1.00 ）A. 正确B. 错误 V解析：三、选择题 （总题数： 72，分数： 72.00）78. 在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是 （ ）（分数： 1.00 ）A. 化学合成法B. 基因组文库法C. cDNA文库法D. 聚合酶链反应E. 差异显示法 V解析：79. 在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制哪一项最好?（）分数： 1.00 ）A. 反应时间B. 酶量 VC. 反应体积D. 酶反应的温度解析：80. T4 DNA连接酶是从T4噬菌体感染的E.coli中分离的，这种酶（）（分数：

22、1.00 ）A. 催化连接反应时既能以 ATP又能以NAD乍为能量来源B. 既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接VC. 是一种单肽酶，分子质量为 74kDaD. 既能催化单链DNA连接又能催化双链DNA连接 解析：81. 限制性片段长度多态性是 （ ） 。（分数： 1.00 ）A. 用于遗传的“指纹结构”模式分析的技术B. 二倍体细胞中的两个等位基因限制性图谱的差别C. 物种中的两个个体限制性图谱的差别 VD. 两个物种中个体间的限制性图谱的差别E. 两种酶在单个染色体上限制性图谱的差别 解析：82. 建cDNA文库时，首先需分离细胞的（）。（分数： 1.00 ）A. 染色体 DNAB. 线

23、粒体 DNAC. 总 mRNA VD. tRNAE. rRNA解析：83. 从大肠杆菌的两个菌株中提纯的一种质粒， 一个可以被某种限制性内切核酸酶切开而另一个不可以， 因为 （ ） 。（分数： 1.00 ）A. 该质粒在一个菌株中有切割B. 该质粒在一个菌株中是线性的C. 该质粒在一个菌株中被甲基化了 VD. 不能被酶切的质粒是线性的解析：84. 外源基因在大肠杆菌中高效表达受很多因素影响，其中SD序列的作用是（）分数： 1.00 ）A. 提供一个mRNA专录终止子B. 提供一个 mRNA起始点C. 提供一个核糖体结合位点 VD. 提供一个翻译的终点解析：85. 在基因工程技术中，不常用到的酶

24、是 （ ）（分数： 1.00 ）A. 限制性内切核酸酶B. DNA聚合酶C. DNA连接酶D. 反转录酶E. DNA解链酶 V解析：86限制性内切核酸酶切割 DNA后产生（）（分数： 1.00 ）A. 3' 磷酸基末端和 5' 羟基末端B. 5' 磷酸基末端和 3' 羟基末端 VC. 3' 磷酸基末端和 5' 磷酸基末端D. 5' 羟基末端和 3' 羟基末端E. 3' 羟基末端、 5' 羟基末端和磷酸 解析：87. 最常用的筛选转化细菌是否含质粒的方法是 （ ）（分数： 1.00 ）A. 营养互补筛选B. 抗药性筛

25、选 VC. 免疫化学筛选D. PCR筛选E. 分子杂交筛选解析：88. PCR变性温度一般为（）（分数： 1.00 ）A. 94CVB. 85CC. 72CD. 62CE. 55C解析：89. 在切口平移标记DNA探针时只能使用（）（分数： 1.00 ）A. Klenow 酶B. DNA聚合酶IVC. DNA聚 合酶UD. DNA聚合酶山解析：90. RFLP产生自（）（分数： 1.00 ）A. 使用不同的限制性内切核酸酶B. 每种类型的染色体有两条C. 染色体中碱基的随机变化VD. Southern 印迹E. 不同探针的使用 解析：91. 山型限制性内切核酸酶（）。（分数： 1.00 ）A.

26、 由两个亚基组成，仅识别半甲基化位点B. 甲基化和限制活性相互排斥：MS亚基促使甲基化，R亚基促使限制C. 由两个亚基组成，在识别位点附近识别并进行甲基化或限制VD. 在错配修复中起关键作用，因为酶结合到DNA上是以结构扭曲为基础，而不是序列错误识别解析：92. 限制性内切核酸酶可以特异性的识别 （ ）（分数： 1.00 ）A. 双链DNA的特定碱基对B. 双链DNA的特定碱基序列VC. 特定的三联体密码D. 以上都正确解析：93. 以质粒为载体将外源基因导入受体菌的过程称 （ ）（分数： 1.00 ）A. 转化 VB. 转染C. 感染D. 转导解析：94. Klenow酶与DNA聚合酶相比，

27、前者丧失了 （）活性（分数： 1.00 ）A. 5' -3合成酶B. 3' 5'外切酶C. 5' -3'外切酶VD. 转移酶解析：95. CDNA文库包括该种生物的（）（分数： 1.00 ）A. 某些蛋白质的结构基因VB. 所有蛋白质的结构基因C. 所有的结构基因D. 内含子和调控区解析：96. 基因工程研究中所用的质粒大多是经过改造的， 真正的天然质粒载体很少。 在下列载体中被视为基因工 程载体的天然质粒是 （ ） 。（分数： 1.00 ）A. pBR322B. pSC101 VC. pBSD. pUC18解析：97. 限制性内切核酸酶的星号活性是指

28、（ ） 。（分数： 1.00 ）A. 在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性VB. 活性大大提高C. 切割速度大大加快D. 识别序列与原来的完全不同解析：98. 切口平移是指在（ ） 作用下，使 （ ） 带上放射性标记。（分数： 1.00 ）A. DNA聚合酶I,B. DNA聚合酶I,C. DNA聚合酶山，D. DNA聚合酶山，解析：RNADNA VRNADNA99. a互补筛选法属于（）（分数： 1.00 ）A. 抗药性标志筛选B. 酶联免疫筛选C. 标志补救筛选 VD. 原位杂交筛选E. 免疫化学筛选解析：100. DNA被某限制性内切核酸酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因

29、中哪一项不太可能?（）（分数： 1.00 ）A. 酶失活 VB. 底物DNA不纯，污染有蛋白质C. 酶切条件不合适D. 由外切核酸酶污染解析：101. 要对一双链的DNA分子进行3'端标记可用（）（分数： 1.00 ）A. Klenow 酶B. DNA聚合酶IC. T4 DNA聚合酶VD. T7 DNA聚合酶解析：102. 下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?（ ）（分数： 1.00 ）A. 甘油含量过量B. 反应体系中含有有机溶剂C. 含有非Mg+的二价阳离子D. 酶切反应时酶浓度过低 V 解析：103. 基因工程技术常用的限制性内切核酸酶为 （ ）（分数： 1.00 ）A. I类

30、酶B. U类酶 VC. m类酶D. W类酶E. V类酶解析：104. 用于 Northern 杂交的探针可以是放射性标记的 （ ）（分数： 1.00 ）A. DNA VB. dNTPC. 抗体D. 抗原解析：105. 有关理想质粒载体的特点，正确的是 （ ）分数： 1.00 ）A. 为线性单链 DNAB. 含有多种限制酶的单一切点VC. 含有同一限制酶的多个切点D. 其复制受宿主控制E. 不含耐药基因解析：106. M13K07是一种辅助噬菌体，可以用来帮助噬菌粒制备单链DNA这是由于（）（分数： 1.00 ）A. M13K07能够进行滚环复制，得到大量单链噬菌体DNAB. M13K07能够提

31、供成熟包装蛋白质C. M13K07提供成熟包装所需的信号D. M13K07提供噬菌粒进行单链复制所需的所有蛋白质V解析：107. 同一种质粒DNA可以以三种不同的形式存在，它们的迁移速率是（）（分数： 1.00 ）A. oc DNA > sc DNA> 1DNAB. sc DNA > 1DNA> oc DNA VC. 1DNA>oc DNA>sc DNAD. sc DNA>oc DNA>1DNA解析：108. 第1个作为重组DNA载体的质粒是（）。（分数： 1.00 ）A. pBR3222B. ColE1C. pSC101 VD. pUC18解析

32、：109. 基因工程技术中实现目的基因与载体DNA连接的酶是（）。（分数： 1.00 ）A. DNA聚合酶B. RNA聚合酶C. DNA连接酶 VD. RNA连接酶E. 限制性内切核酸酶解析：110. 能够用来克隆30kb以上大小外源DNA片段的质粒载体是（）（分数： 1.00 ）A. charomidB. plasmidC. cosmidVD. phagemid解析：111. 随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的 ?（ ）（分数： 1.00 ）A. 双链DNA单链DNA RNA都是可以标记的B. 不需用DNA酶I预处理C. 反应时可用 Klenow 酶D. 反应时可用DNA聚合酶IV

33、解析：112. 将Pstl限制酶切割后的目的基因与用相同内切酶切割后的载体DNA连接属（）（分数： 1.00 ）A. 同聚物加尾连接B. 人工接头连接C. 平端连接D. 黏性末端连接 VE. 非黏性末端连接 解析：113. 选用融合蛋白的表达策略的主要优点是 （ ）（分数： 1.00 ）A. 容易检测表达蛋白B. 构建表达载体方便C. 表达产物较稳定 VD. 易获得有天然活力的蛋白质 解析：114. 为了正确地构建一个真核基因组的物理图谱 （ ）（分数： 1.00 ）A. 必须分离单条染色体B. 必须从单倍体细胞中分离 DNA这样避免由于二倍体细胞中同源染色体的存在而产生的干扰C. 必须进行单

34、个染色体分析D. 必须找到对于每个染色体只切割一次的限制酶E. 必须首先分离核DNA和细胞器DNA然后分别对它们作图 V解析：115. 下面关于细菌人工染色体的特征描述，除了 （ ） 外都正确。（分数： 1.00 ）A. 通过电激法将其转化大肠杆菌比CaCb的转化率提高了 10100倍B. 细菌人工染色体在细菌中以超螺旋环状存在，使分离操作相对容易C. 细菌人工染色体在大肠杆菌中保持高拷贝数 VD. 克隆到细菌人工染色体上的外源片段可以直接进行序列测定以获得末端序列 解析：116. 用下列方法进行重组体的筛选，表明出现了外源基因的产物的方法是分数： 1.00 )A. Southern 印迹B.

35、 Northern 印迹C. Western 印迹 VD. 菌落原位杂交 解析：117. 关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确 ?（ ）（分数： 1.00 ）A. 在不同的宿主中具有不同的复制机制B. 在不同的宿主中使用不同的复制起点 VC. 在不同的宿主中使用不同的复制酶D. 在不同的宿主中具有不同的复制速率 解析：118. 关于质粒的相容性，下面哪种说法不正确 ?（ ）（分数： 1.00 ）A. 不同不相容群的质粒能够共存于同一细胞中B. 质粒可以分为若干个不相容群，但不能分为若干相容群C. 如果 a、b 两种质粒不相容，说明它们的复制机制相同D. 属于同一个不相容群的质粒，不仅复制机制

36、相同，而且拷贝数和相对分子质量也相同V解析：119. 基因工程中，可以用碱性磷酸酶 （ ） 。（分数： 1.00 ）A. 防止DNA的自身环化 VB. 降解DNA样品中混杂的RNAC. 制备突出的 3' 端D. 上述方法都正确解析：120. 胰岛素通常以融合蛋白的方式在大肠杆菌中表达，利用融合处有一个甲硫氨酸残基，可以用何种方法 将胰岛素从融合蛋白上切下来。 （ ）（分数： 1.00 ）A. 氢氟酸裂解B. 羟氨裂解C. 蛋白水解酶D. 溴化氰裂解 V解析：121. 分析限制性内切核酸酶切割DNA所得到的片段长度有助于物理作图，这是因为（）（分数： 1.00 ）A. 即使只有一种限制酶

37、，因为 DNA是线性的，所以也可以迅速准确确定限制片段序列B. 内切酶在等距离位点切割 DNA同时对于每个生物体的长度是特异的C. DNA的线性意味着单限制酶切片段的长度之和等于DNA勺总长 VD. 内切酶的消化活性是物种特异的E. 这一技术同时为核苷酸序列提供了广泛信息 解析：122. CDNA是指（）。分数： 1.00 ）A. 在体外经反转录合成的与 RNA互补的DNA VB. 在体外经反转录合成的与 DNA互补的DNAC. 在体外经转录合成的与 DNA互补的RNAD. 在体内经转录合成的与 DNA互补的RNA解析：123. 下面关于松弛型质粒性质的描述中，不正确的是 （ ）（分数： 1.

38、00 ）A. 质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约B. 可以用氯霉素作用进行扩增C. 通常带有抗药性标记 VD. 同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型复制子 解析：124. U型限制性内切核酸酶（）。（分数： 1.00 ）A. 具内切酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列B. 仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性有另一种酶提供VC. 限制性识别非甲基化的核苷酸序列D. 有外切核酸酶和甲基化酶活性解析：125. 基因组代表一个细胞或生物体的 （ ） 。（分数： 1.00 ）A. 部分遗传信息B. 整套遗传信息 VC. 可转录基因D. 非转录基因E. 可表达基因 解析：12

39、6. 以质粒为载体将重组 DNA导入受体细胞的过程称为（）分数： 1.00 ）A. 转化 VB. 转导C. 接合D. 转染解析：127. 关于DNA接头在基因工程中的作用，下面的说法中哪一项不正确?（）（分数： 1.00 ）A. 给外源DNA添加适当的酶切位点B. 人工构建载体C. 调整外源基因的可读框D. 增加调控元件 V 解析：128. 关于多克隆位点的描述不正确的是 （ ）（分数： 1.00 ）A. 仅位于质粒载体中 VB. 具有多种酶的识别序列C. 不同酶的识别序列可以有重叠D. 一般是人工合成后添加到载体中的 解析：129. Ti 质粒（ ） 。（分数： 1.00 ）A. 存在于所有

40、农杆菌细胞中B. 作为双链DNA被转移C. 在植物中导致肿瘤VD. 在植物细胞中作为染色体外质粒解析：130. 通过限制酶切片段分析，可以对等位基因进行精确的分析比较，其原因是（ ）（分数： 1.00 ）A. 限制性内切核酸酶只切割两个变异等位基因中的一个B. 它利用限制性位点作为遗传标记 VC. 一个特定细胞中等位基因的核苷酸序列不会是相同的D. 限制性内切核酸酶的酶切位点被限制在编码区域内 解析：131. 在细菌转化实验中，如将DNA酶加入培养基，将使转化（）分数： 1.00 ）A. 不能实现 VB. 加速C. 不受影响D. 失去规律解析：132. 下列常用于原核表达体系的是 （ ）（分数

41、： 1.00 ）A. 酵母细胞B. 昆虫细胞C. 哺乳类细胞D. 真菌E. 大肠杆菌 V解析：133. 下列哪个酶要求有引物才能发挥作用 （ ）（分数： 1.00 ）A. 限制性内切核酸酶B. DNA连接酶C. 末端转移酶D. 反转录酶 V解析：134. 黏粒是一种人工构建的载体， （ ）（分数： 1.00 ）A. 具有 cos 位点，因此可以进行体外包装 VB. 具有质粒DNA的复制特性，必须利用 CaCIz制备的感受态细胞转化入大肠杆菌C. 进入受体细胞后，可引起裂解反应D. 进入受体细胞后，可引起溶原化反应 解析：135. 在蓝白斑筛选法中，IPTG的作用是（）。（分数： 1.00 ）A

42、. 诱导宿主合成B -半乳糖苷酶的羧基端VB. 诱导宿主合成B -半乳糖苷酶的氨基端C. 作为酶反应的底物D. 作为显色反应的指示剂 解析：136. 下列酶中，催化反应不需要ATP的是（）。分数： 1.00 ）A.EcoKB. EcoBC. T4 DNA 连接D. BamHIV解析：137. 当大量的RNA与有限的DNA杂交时（）(分数： 1.00 )A. 所有的DNA都杂交上了B. 50%的DNA杂交上了VC. 50%的RNA杂交上了D. 没有RNA杂交上，而所有的 DNA全部复性成为双链DNA 解析：138. 用菌落原位杂交法筛选重组子时， ( ) 。(分数： 1.00 )A. 需要外源基

43、因的转录产生 mRNA才能进行。B. 需要外源基因的翻译产生蛋白质，才能进行。C. 所用探针必须与克隆的基因有同源性VD. 上述说法都正确解析：139. 下列哪种酶不能用于聚合酶链反应 (PCR)?( )(分数： 1.00 )A. Taq DNA合成酶B. T7 DNA合成酶C. 引物酶 VD. Klenow 片段 解析：140. 报道基因 ( ) 。(分数： 1.00 )A. 必须是原核生物的基因B. 以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动区C. 产物容易检测D. 能用于确定启动子何时何处有活性 V解析：141. 目前在转基因小鼠中常用的基因敲除技术是根据 ( ) 的原理而设计的(分数：

44、 1.00 )A. 反义核苷酸的抑制作用B. 转座成分的致突变作用C. 离体定向诱变作用D. 同源重组 V解析：142. 就分子结构而论，质粒是 ( )分数： 1.00 )A. 环状双链DNA分子 VB. 环状单链DNA分子C. 环状单链RNA分子D. 线状双链DNA分子E. 线状单链DNA分子解析：143. 重叠群是一群克隆，在这个克隆群体中各克隆（ ）（分数： 1.00 ）A. 相互间重叠 VB. 都是来自不同生物间的克隆C. 插入片段位于不同染色体的不同区段D. 位于同一染色体的不同区段 解析：144. 催化聚合酶链反应的酶是 （ ） 。（分数： 1.00 ）A. DNA连接酶B. 反转

45、录酶C. 末端转移酶D. 碱性磷酸酶E. Taq DNA聚合酶 V解析：145. 在对目的基因和载体 DNA进行同聚物加尾时，需采用（）（分数： 1.00 ）A. 反转录酶B. 多聚核苷酸激酶C. 引物酶D. RNA聚合酶E. 末端转移酶 V解析：146. 在基因工程中通常所使用的质粒存在于 （ ）（分数： 1.00 ）A. 细菌染色体B. 酵母染色体C. 细菌染色体外 VD. 酵母染色体外E. 以上都不是解析：147. 在基因工程中通常所使用的质粒是 （ ）（分数： 1.00 ）A. 细菌的染色体 DNAB. 细菌染色体外的 DNA VC. 病毒染色体 DNAD. 病毒染色体外的 DNAE.

46、 噬菌体 DNA 解析：148. 下列载体中对外源DNA片段的容量最大的是（）（分数： 1.00 ）A. 质粒B. 黏粒C. 酵母人工染色体 （YAC）D. 入噬菌体 V解析：149. 构建基因组DNA文库时，首先需要分离细胞的 （）（分数： 1.00 ）A. 染色体 DNA VB. 线粒体 DNAC. 总 mRNAD. tRNAE. rRNA解析：四、简答题（总题数： 50，分数： 750.00）150. 当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若进行双酶切，应采取何种措施?为什么 ?（分数： 15.00 ） 正确答案： （ 用通用缓冲液；先用低盐酶，后用高盐；先低温后高温。 ） 解析：15

47、1. 什么是限制性内切核酸酶的星号活力?它受哪些因素的影响 ?分数： 15.00 ） 正确答案： （ 酶切条件的改变会对限制性内切核酸酶的专一性造成影响， 识别序列和切割都有一些变化， 改 变后的活性就是星号活力。诱发因素包括：甘油浓度大于 5%限制酶过量；低离子强度；高 pH;有机溶剂 的存在；非Mg+的二价阳离子存在等。）解析：152. 按照适当的顺序，列出将一种 mRNA经反转录克隆到表达载体所用到的酶。分数： 15.00 ）正确答案：（反转录酶、DNA聚合酶、SI核酸酶、限制性内切核酸酶、连接酶。）解析：153. 什么是测序酶 （sequenase）?分数： 15.00 ）正确答案：（

48、采用缺失的方法，使野生型的酶失去3'-5'外切酶活性，保留聚合酶活性，聚合能力提高了数倍。属于序列测定专用酶。 ）解析：154. 什么是 Klenow 酶?具有哪些活性 ?简要说明其在基因工程中的用途。分数： 15.00 ） 正确答案：（用枯草杆菌蛋白水解酶处理 DNA聚合酶I,得到一个大的片段，具有3-5'外切酶活性和5'-3' 聚合酶活性，失去了 5' -3'外切酶活性的酶。主要用途包括：补平 DNA的突出单链末端；标记 3'突出端; 随机引物法标记DNA探针等。）解析：155. 如何利用T4 DNA聚合酶进行双链 DNA的

49、3'端标记？分数： 15.00 ） 正确答案：（首先利用该酶的3' -5'外切酶活性在无 dNTP的条件下切割双链 DNA产生突出的5'端，然后 加入放射性标记的dNTP,利用5' -3'聚合酶活性进行 DNA合成，得到两端 3'端都被标记的双链 DNA ） 解析：156. YAC载体上具有什么样的功能性DNA序列？分数： 15.00 ）正确答案：（复制起点、着丝粒和端粒。具有克隆数百kb碱基对DNA的能力。因此，利用它作载体构建基因文库可以显著减少克隆的数目，降低在因文库筛选的难度，同时也加快了染色体步移的速度。）解析：157. 作为一

50、个理想的质粒载体必须具备什么样的特征 ?分数： 15.00 ） 正确答案： （ 复制起点、选择性标记、克隆位点。 ） 解析：158. 什么是质粒的不亲和性 ?其分子机制如何 ?分数： 15.00 ） 正确答案： （ 两种质粒不能稳定共存于同一个细胞中的现象。同一不亲和群中的质粒具有相同的复制机制，相互间产生干扰。同时，细胞分裂时细胞质的不均等分配也是其原因之一。）解析：159. 简述质粒载体的发展改造过程。分数： 15.00 ） 正确答案： （ 改造质粒的复制特性和可选择性，把选择性标记引入到松弛型质粒中；调整质粒的结构，提高 载体的效率，把载体的长度降低到最小，添加多克隆位点；在质粒中引入多

51、种用途的辅助序列。 ） 解析：160. 什么是蓝白斑筛选 ?为什么蓝白斑筛选也会有假阳性 ?分数： 15.00 ） 正确答案： （质粒上含有 lacZ' 基因，此基因为 lacZ 的5'端，编码氨基端；宿主菌中含有 lacZ 基因的 3' 端，编码羧基端；二者同时存在时发生分子内互补，成为具有活性的 LacZ 蛋白；当培养基中含有 IPTG 和 X-gal 时可以形成蓝色化合物。 ）解析：161. 什么是辅助噬菌体 ?它和相应的噬菌粒是如何协同工作的 ?分数： 15.00 ）正确答案：（在主要基因间隔区含有突变，使得自身DNA复制效率低下的一类噬菌体突变体。但它们可以为

52、寄主中噬菌粒的复制与包装提供蛋白酶与外壳蛋白，同时噬菌粒中所具有的复制子完全正常，可以利用这 些蛋白质迅速复制自身。 ）解析：162. 什么是接头连接法 ?人工接头在基因工程中有何用途 ?分数： 15.00 ）正确答案：（人工合成的一段含有限制性内切核酸酶识别位点的一小段DNA连接到载体或外源DNA片段上,从而方便地制造出新的酶切位点，便于二者的连接。主要用途是介导载体和插入片段的高效结合。）解析：163. CDNA文库和基因组文库有何区别 ？分数： 15.00 ）正确答案： （ 前者不含内含子，后者有。前者仅是部分结构基因的克隆，后者包含了基因组的全部信息。）解析：164. 什么是黏粒 ?为

53、什么它可以克隆大片段外源 DNA?分数： 15.00 ）正确答案：（具有cos位点的质粒载体就是黏粒。由于它具有该位点可以被入噬菌体的包装蛋白包装，从而具有克隆大片段外源 DNA的能力。）解析：165. 如果知道某一基因的功能及其相应的蛋白质的氨基酸序列组成，可以通过何种方法克隆该基因?分数： 15.00 ）正确答案：（简并引物PCR合成寡核苷酸探针筛选基因组文库或cDNA文库、构建cDNA表达文库利用相应的抗体筛选。 ）解析：166. 某一质粒载体具有 Tetr和Kanr的选择性标记，在 Kanr基因内部有一 BarnH I切点。现用Barn H I切 割该载体进行基因克隆， 问： （1） 转化后涂皿时应加何种抗生素 ?（2） 培养后长出的菌落具有什么样的抗性表 型?（3） 如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组子 ?分数： 15.00 ）正确答案：（加抗生素Tet ;抗Tet，对Kan敏感；把涂皿形成的菌落影印到新的含Kan的平皿中，凡是不能生长的克隆就是阳性克隆。 ）解析：167. 简单比较 Sotlthern 印迹、 North