值日生林啟平、陳彥熹、劉遠萱、廖文敬、蕭尊先、

1、值日生:陳俊蓉、吳欣潔、 張紹涵、許瑋元、朱恩佑、賴瑋萱、張雅迪、林思妤輔導員:李淑蘭、林群峰、蕭尊先實驗單元: SDS-PAGE and Western blotting日期/值日生/教學助理項目數量配法4/21星期二下午1:30-4:20值日生:許瑋元朱恩佑教學助理:林群峰RO H2O15L5L之塑膠beaker裝(滅菌時下墊大洞試管架) x 3Tip10 x21000、200l5ml tip3X裝在500ml 玻璃beaker中。RO H2O 1L6瓶儲在1000ml玻璃血清瓶中(需標示)(蓋子旋緊後倒旋半圈)空的500ml廣口血清瓶3X空的500ml三角錐瓶5XEppendorf tu

2、be 5杯500ml 燒杯裝，另2包裝在塑膠袋備用。3M NaCl600mlNaCl:編號:NaCl分子量:1. 先在1000ml塑膠燒杯以量筒標定600ml的標定線。2. 稱取NaCl 先溶於約500ml無菌水中全溶解後。3. 加無菌水至體積600ml4. 裝在1000ml廣口血清瓶中。以上均需殺菌4/24星期五上午8:30-12:00紹涵教學助理:蕭尊先0.5MTris-HCl (pH=6.8)500mlTris base:編號:Tris base分子量:1. 先在1000ml塑膠燒杯以量筒標定500ml的標定線。2. 稱取Tris base 先溶於約400ml無菌水中全溶解後。3. 以H

3、Cl調pH至6.84. 加無菌水至體積500ml5. 裝在1000ml廣口血清瓶中。 4/24星期五雅迪1.5MTris-HCl (pH=8.8)500mlTris base:編號:Tris base分子量:1. 先在1000ml塑膠燒杯以量筒標定500ml的標定線。2. 稱取Tris base 先溶於約400ml無菌水中全溶解後。3. 以HCl調pH至8.84. 加無菌水至體積500ml裝在1000ml廣口血清瓶中。4/24雅迪1M Tris-HCl (pH=7.5)500mlTris base:編號:Tris base分子量:1. 先在1000ml塑膠燒杯以量筒標定500ml的標定線。2.

4、 稱取Tris base 先溶於約400ml無菌水中全溶解後。3. 以HCl調pH至7.54. 加無菌水至體積500ml裝在1000ml廣口血清瓶中。助教Acrylamide/Bis ( 30% W/V stock)100ml29.2g /0.8g acrylamide/N-bis-methlene-acrylamide加去離子水至體基100ml(在瓶身畫好刻度)(戴口罩手套、清場)4/24星期五上午8:30-10:00欣潔教學助理:蕭尊先10% SDS(W/V)300 mlSDS:編號:SDS分子量:1. 先在500ml塑膠燒杯以量筒標定300ml的標定線。2. 稱取SDS 先溶於約250m

5、l無菌水中全溶解後。3. 加無菌水至體積300ml4. 裝在500ml廣口血清瓶中。4/24星期五上午8:30-10:00欣潔教學助理:蕭尊先10%ammonium persulfate(APS) (W/V)20ml(1ml/eppendorf tube)(20 vial)新鮮配置或分裝在-20oC保存)4/24星期五上午9:00-12:00俊蓉教學助理:蕭尊先5X 電泳液(Running Buffer)pH=8.3不必調 pH值10LTris base 15gGlycine 72gSDS 3g依序放入含去離水500 ml容器中，完全溶解後，加水至體積1000ml。使用時稀釋五倍進行電泳。4/

6、24星期五上午9:00-12:00俊蓉教學助理:蕭尊先4Xsample buffer (SDS reducing buffer)50mlDistilledwater 2.4ml0.5MTris-HCl(pH=6.8) 1.0mlGlycerol 3.6ml10%SDS 1.6ml2-b-mercatoethanol 0.4 ml0.5%(W/V)bromophenolblue 0.2ml(2-b-mercatoethanol(毒)最後加、分裝前須搖勻)1ml/eppendorf(10 vial)4/24星期五上午瑋萱CBG染液 500ml將400ml之甲醇(methanol)加入400ml水中

7、，加入100ml純醋酸(acetic acid)混合均勻後，加入10g Coomassie blue G250，加水至體積1000ml(儲存在棕色瓶中)。4/24星期五瑋萱退染液5L1L配法:1. 在1L塑膠燒杯加入400ml蒸餾水2. 加入400ml之甲醇(methanol) 3. 加入100ml純醋酸(acetic acid)混合均勻後，加水至體積1000ml。5L配法:1. 在5L塑膠燒杯加入 ml蒸餾水2. 加入 ml之甲醇(methanol) 3. 加入 ml純醋酸(acetic acid)混合均勻後，加水至體積1000ml。儲存在2.5L棕色瓶，其餘純放在500ml棕色瓶4/24星

8、期五上午思妤3M filter paper50 張戴手套，以鉛筆畫線以裁紙刀裁切(9 x 11 cm)思妤PVDF50 張戴手套，以鉛筆在護膜上畫線用剪刀(連護膜一起剪下)(8 x 10 cm)思妤玻離紙裁切50 張思妤: 2張3M filter paper +1張PVDF放在一個5號塑膠袋中(25個)05/11教學助理林群峰05/13黃俊超TBS-Blotting solns 1Lx2瓶 Tris-HCl 20mM (pH=7.5)NaCl 500mM non-fat dry milk 5%(final)1. 在內涵攪拌子廣口血清瓶中加無菌水500ml刻度。2. 加1M Tris-HCl m

9、l3. 3M NaCl ml加無菌水至體積1000ml刻度，混勻(以下新鮮配製)4. 到出500ml混合意至滅菌的玻璃燒杯中，加milk 25g攪拌均勻。5. 倒入500ml廣口血清瓶中儲存。05/11、05/13教學助理蕭尊先Transfer buffer(1.5 L/Set)10L(體積8L)1L的量Tris-base 3.03 gGlycine 14.3 gMethanol 200 ml(最後加)adding H2O to lL05/11教學助理蕭尊先Tris-buffer saline(TBS)(lL/set)1L x 5瓶Tris-HCl 20mM (pH=7.5) NaCl 500mM1L1M Tris-HCl ml3M NaCl ml1. 在廣口血清瓶中加無菌水500ml刻度。2. 加1M Tris-HCl ml3. 3M NaCl ml加無菌水至體積1000ml刻度，混勻。05/15教學助理林群峰3% starch solution需新鮮配製300ml1. 在500玻離三角瓶(fla