正能量小组QCC成果报告书-优化铁皮石斛粉中甘露糖检测方法2016

1、QCC小组成果报告书汤臣倍健股份有限公司课题名称：优化铁皮石斛粉中甘露糖的检测方法小组名称：正能量小组发 布 人：叶少文日 期：2016年3月一、前言铁皮石斛，属微子目，兰科多年生附生草本植物。其茎直立，圆柱形，长9-35厘米，粗2-4毫米，萼片和花瓣黄绿色，近相似，长圆状披针形，长约1.8cm，宽45mm，花期36月。主要分布于中国安徽、浙江、福建等地。其茎入药，属补益药中的补阴药，是一种名贵中药材。铁皮石斛含有很多功效性多糖，我国将甘露糖作为铁皮石斛的功效检测指标收载在中国药典一部（2015版）铁皮石斛项下。二、小组简介小组名称正能量小组成立日期2015年9月课题名称优化铁皮石斛粉中甘露糖

2、的检测方法小组人数3人小组类型技术攻关出勤率100%活动时间2015年9月-2016年3月小组成员情况姓名性别文化程度职务组内职务组内分工QC培训情况李珍男研究生工程师组 长组员协调、小组策划、监督检查48苏昭仑男本科工程师组员资料搜集、工作开展、实际操作48叶少文男本科工程师组 员质量检查、技术指导48三、QC活动计划表活动阶段步骤负责人时间：2015年9月2016年3月9月10月11月12月1月2月3月P选定课题李珍设定目标苏昭仑确定可行性分析叶少文原因分析全员要因确认全员制定对策叶少文D实施对策苏昭仑C效果检查李珍A巩固措施李珍活动总结李珍计划： 实际：四、选择课题铁皮石斛中甘露糖的检测

3、，按照中国药典一部（2015版）铁皮石斛项下的方法检测，单从样品前处理就至少花费7小时40分钟的检测时间，整个项目检验时间花费10小时，直接导致检测效率不高。为配合实验室2016年将检测效率提高30%的目标，将优化铁皮石斛粉中甘露糖的检测方法作为一个指令性技术攻关型QCC纳入小组课题。五、设定目标：依据实验室2016年将项目检测效率提高30%的目标，设定目标为：优化铁皮石斛粉中甘露糖的检测方法，将检测效率提高30%。六、确定目标可行性首先，对中国药典铁皮石斛中甘露糖的检测方法进行整体分析，发现前处理至少需要耗时8小时，一个批次样品完成需要10小时的检测时间。按照效率提高30%的目标设定，整个流

4、程下来，一批次样品检测时间变成7小时，样品前处理时间应缩减为3小时以下。由下表分析，根据检测经验综合分析，样品前处理加热回流，煎煮和衍生水解步骤应可作简化，提高30%检测效率目标可行。表：中国药典一部（2015版）铁皮石斛中甘露糖的测定方法校正因子测定取盐酸氨基葡萄糖适量，精密称定，加水制成每1ml含12mg的溶液，作为内标溶液。另取甘露糖对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取400l，加0.5mo1L的PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)甲醇溶液与0.3molL的氢氧化钠溶液各400l，混匀，70水浴反应100分钟

5、。再加0.3molL的盐酸溶液500l，混匀，用三氯甲烷洗涤3次，每次2ml，弃去三氯甲烷液，水层离心后，取上清液10l，注入液相色谱仪，测定，计算校正因子。测定法取本品粉末(过三号筛)约0.12g，精密称定，置索氏提取器中，加80乙醇适量，加热回流提取4小时，弃去乙醇液，药渣挥干乙醇，滤纸筒拆开置于烧杯中，加水100ml，再精密加入内标溶液2ml，煎煮1小时并时时搅拌，放冷，加水补至约100ml，混匀，离心，吸取上清液1ml，置安瓿瓶或顶空瓶中，加3.0molL的盐酸溶液0.5ml，封口，混匀，110水解1小时，放冷，用3.0molL的氢氧化钠溶液调节pH值至中性，吸取400l，照校正因子测

6、定方法，自“加0.5molL的PMP甲醇溶液”起，依法操作，取上清液10l，注入液相色谱仪，测定，即得。7七、原因分析本课题是提高检测效率的指令性目标课题,甘露糖的检测方法在中国药典一部2015版本铁皮石斛项下的基础上讨论，按攻关型QCC总结。 年10月23日,小组全体成员开会,运用“头脑风暴法”对该检测项目耗时原因进行查找，画出因果图。环物人对仪器，耗材摆放位置不熟悉，寻找时间长样品粉碎繁琐湿度，温度要求严格样品前处理方法不熟练优化检测方法，提高检测效率 检测耗时长（衍生反应）70水浴反应100分钟仪器检测耗时长仪器预运行时间长方法繁琐，前处理不合理索氏提取加热回流4小时110水解一小时机煎

7、煮一个小时法校正因子测定八、要因确认要因确认计划表序号要因确认内容确认方法判定标准责任人完成时间1样品前处理方法不熟悉人员是否不熟悉方法前处理方法操作，培训记录查看是否有培训叶少文2015.11.022样品粉碎制备繁琐是否繁琐实际操作确认是否耗时超过10分钟叶少文2015.11.053湿度，温度要求严格是否对温湿度要求严格条件对比试验检测结果对比，偏差分析判定游景水2015.11.194仪器预运行时间长是否耗时长实际操作确认预运行时间是否大于半小时李珍2015.11.195仪器检测耗时长是否耗时长实际操作确认总分析时间是否超过2小时李珍2015.11.196样品前处理：索氏提取加热回流4小时分

8、析步骤是否合理实际操作确认分析步骤实际意义苏昭仑2015.11.207样品前处理：煎煮一小时分析步骤是否合理实际操作确认分析步骤实际意义苏昭仑2015.11.208样品前处理：110水解一小时分析步骤是否合理实际操作确认分析步骤实际意义叶少文2015.11.209样品前处理：（衍生反应）70水浴反应100分钟分析步骤是否合理实际操作确认时间能否缩减20%以上叶少文2015.11.20要因确认 样品前处理方法不熟悉查询方法操作培训记录，检测人员都得到良好的培训，不存在对前处理不熟悉导致的效率低下情况，此为非要因。要因确认 对仪器，耗材摆放位置不熟悉，寻找时间长查询检测人员个人档案，该检测项目的检

9、测人员工龄均在2年以上，不存在对仪器，耗材摆放位置不熟悉，寻找时间长的情况，此为非要因。要因确认 样品粉碎制备繁琐 实际操作当中，检测人员将铁皮石斛条分别用手工研磨，粉碎机粉碎，制成铁皮石斛粉，操作时间均不超过15分钟，此为非要因。要因确认 湿度，温度要求严格 在不同的温度湿度下进行样品前处理，检测数据精密度小于3%，说明温湿度环境因素对试验不造成影响，此为非要因。要因确认 仪器预运行时间长 实际操作中，仪器预运行时间不超过半小时，此为非要因。要因确认 仪器检测耗时长实际操作上，仪器分析一个样品的运行时间为10分钟，一批次分析总时间为80分钟，不超过2小时，此为非要因。要因确认 样品前处理：索

10、氏提取加热回流4小时 此步骤是为了去除铁皮石斛中的游离甘露糖，处理时间冗长，操作意义不大，对检测效率却有很大影响，可以通过其它处理方式达到同样效果，从而节省时间，提高效率。此为要因。要因确认 样品前处理：煎煮一小时 此步骤为提取铁皮石斛中的甘露多糖，是一个关键的处理步骤，而处理时间也长，可以通过其它处理方法提高效率，此为要因。 要因确认样品前处理：加入3mol/L盐酸溶液，110水解一小时此步骤将提取的铁皮石斛中甘露多糖水解为单糖（甘露糖），是一个关键的处理步骤，而处理时间也长，可尝试优化条件，提高效率，此为要因。要因确认 样品前处理：（衍生反应）70水浴反应100分钟此步骤将甘露糖衍生处理，

11、可以在C18柱有保留，处理时间为1小时，衍生过程使用三氯甲烷处理，可以通过其它处理方法优化，此为要因。 要因确认 样品前处理：校正因子测定 通过添加校正因子和不添加校正因子的对比试验，检测结果数据对比，效值一致，可不添加校正因子，此为非要因。八、制定对策要因确认后，小组成员制定了一系列的对策、措施及阶段性目标。序号要因对策目标措施地点负责人完成日期1样品前处理：索氏提取加热回流4小时采用超声提取代替索氏提取加热回流使处理时间缩短为0.5小时超声提取2小时，1小时，0.5小时，试验对比对比效果样品处理室叶少文2015.12.012样品前处理：煎煮1小时采用微波提取替代煎煮方式使处理时间缩短为5分

12、钟微波提取30分钟，20分钟，5分钟，作试验对比效果样品处理室叶少文2015.12.023样品前处理：加入3mol/L盐酸溶液，110水解一小时提高温度，缩短水解时间使处理时间缩短为30钟120，水解处理60min,50min,40min作试验对比效果样品处理室叶少文2015.12.034样品前处理：（衍生反应）70水浴反应100分钟采用其他分析体系取代衍生处理不使用高毒试剂三氯甲烷，且后程试验时间不增加采用钙型糖柱体系分析测试精密仪器室一叶少文2015.12.05九、实施对策实施（一）采用超声提取代替索氏提取加热回流 试验条件实验结果（%）结论超声功率40kw,超声时间2小时22.16,22

13、.34与原方法效值一致超声功率40kw,超声时间1小时22.24,22.46与原方法效值一致超声功率40kw,超声时间0.5小时22.36,22.55与原方法效值一致药典方法（索氏提取加热回流4h）22.23,22.41小结：选择效率最优步骤：超声功率40kw,超声时间0.5小时实施（二）样品前处理：微波提取代替煎煮1小时 试验条件实验结果（%）结论微波提取30分钟22.52,22.83与原方法效值一致微波提取20分钟22.46,22.71与原方法效值一致微波提取5分钟22.37,22.31与原方法效值一致药典方法（煎煮1小时）22.28,22.91小结：选择效率最优步骤：微波提取5分钟实施（

14、三）优化样品前处理步骤（加入3mol/L盐酸溶液，110水解一小时） 试验条件实验结果（%）结论120水解60分钟22.75,22.63与原方法效值一致120水解50分钟22.44,22.37与原方法效值一致120水解40分钟22.13,22.47与原方法效值一致药典方法（110水解60分钟）22.22,22.14小结：选择效率最优步骤：120水解40分钟实施（四）取代样品前处理：（衍生反应）70水浴反应100分钟此步骤是为了生成甘露糖衍生物，从而在C18色谱柱中保留（不衍生无法在C18色谱柱中保留，从而无法进行检测）。样品衍生处理需要100分钟的反应时间，其次衍生后需要用三氯甲烷（高毒试剂）

15、洗涤样品。因此，小组经过讨论，制定出一个不需要衍生，不需要用三氯甲烷洗涤样品的方法处理步骤。仪器分析体系变化：钙型糖柱（8%交联度，填料聚苯乙烯-二乙烯苯）体系：（流动相：纯化水，示差折射光检测器）C18色谱柱体系：（流动相为乙腈:0.02mol/L乙酸铵=20:80，紫外检测器：波长250nm） 试验对比实验结果（%）结论钙型糖柱体系22.78 ,22.49与原方法效值一致原方法（C18色谱柱体系）22.75, 22.67 变化前：衍生反应处理100分钟，上机分析需要50分钟，总共需要150分钟。 变化后：无需衍生，上机分析需要210分钟。小 结：变化后，无需使用高毒试剂三氯甲烷，但检验时间比改变前增加了40分钟，综合考虑，由于改变体系后检测步骤简化，耗能相对减少，权重考虑，选择了变化后的方法步骤。十、效果检查1、 目标检查经过方法优化后，QC活动达到以下目标：检测时间为285分钟，原方法检测时间为610分钟，优化后方法效率提高46%，无需使用高毒试剂三氯甲烷，达到实验室2016提高检验效率30%目标。2、其它收获：小组人员素质在过程中得到进一步提高。评价项目QC知识质量意识创新意识团队意识分析能力平均得分活动前得分687169726869活动后得分828486838884十一、制定巩固措施1、巩固