实验五福医大计数ppt课件

1、 实验五实验五 血小板计数临检指点血小板计数临检指点P48P48目的目的 掌握普通光学显微镜直接血小板计数掌握普通光学显微镜直接血小板计数法。法。 1.概述概述 血小板是由骨髓中成熟巨核细胞的胞质分割而生成。血小板是由骨髓中成熟巨核细胞的胞质分割而生成。其生成受血小板生成素其生成受血小板生成素TPO的调理。的调理。 正常静息形状下，血小板为双面微凸的圆盘形，直正常静息形状下，血小板为双面微凸的圆盘形，直径径24m、平均体积、平均体积7.2fl的非细胞构呵斥分。的非细胞构呵斥分。 v染色后镜下可见血小板的胞质呈淡蓝色，内含染色后镜下可见血小板的胞质呈淡蓝色，内含v 较多的紫红色嗜天青颗粒。较多的

2、紫红色嗜天青颗粒。v血涂片上，为红细胞数的血涂片上，为红细胞数的1/301/20，通常每个，通常每个v 油镜视野可见油镜视野可见735个，分散或个，分散或35成群分布。成群分布。2.光学显微镜直接计数法光学显微镜直接计数法1原理原理 血液血液(20l)经稀释液经稀释液(0.38ml)按一定比例稀释按一定比例稀释和破坏红细胞后，充入血细胞计数池内，在显微和破坏红细胞后，充入血细胞计数池内，在显微镜下计数一定范围内的血小板数，经换算求出每镜下计数一定范围内的血小板数，经换算求出每升血液中的血小板数量。升血液中的血小板数量。 由于血小板易黏附、聚集以致破坏，优质的血小板稀释液应具备的条件是： 1有效

3、地阻止凝血。2很快地固定血小板，防止血小板聚集和变形。3溶血稀释液要求红细胞破坏完全。4组成简单、容易保管、不长细菌。 根据所采用的稀释液不同而又分为根据所采用的稀释液不同而又分为破坏红细胞稀释法溶血法：破坏红细胞稀释法溶血法： 草酸铵溶血法：草酸铵溶血法： 对红细胞破坏力强，血小板形状对红细胞破坏力强，血小板形状清楚。清楚。 为首选常规计数方法。为首选常规计数方法。 复方尿素溶血法：尿素可溶解红细胞、甲醛可固复方尿素溶血法：尿素可溶解红细胞、甲醛可固定血小定血小 板和防腐，稀释后血小板胀大板和防腐，稀释后血小板胀大易识别，易识别， 尿素容易分解，试剂容易失效。尿素容易分解，试剂容易失效。尿素

4、尿素 不能完全破坏红细胞。不能完全破坏红细胞。 高铁氰化钾溶血法：试剂稳定易于长期保管但不高铁氰化钾溶血法：试剂稳定易于长期保管但不能完全能完全 破坏红细胞。破坏红细胞。 不破坏红细胞稀释法：复方碘稀释液。红细胞未破不破坏红细胞稀释法：复方碘稀释液。红细胞未破坏及试剂易细菌生长，干扰计数，已被淘汰坏及试剂易细菌生长，干扰计数，已被淘汰 。实验五实验五 血小板计数血小板计数2操作步骤操作步骤 1汲取稀释液：准确汲取汲取稀释液：准确汲取10g/L草酸铵溶血剂草酸铵溶血剂0.38ml于小于小 试管内。试管内。 2采血：准确采血采血：准确采血20l参与上述试管，立刻充分参与上述试管，立刻充分混匀。混匀

5、。 3静置：待完全溶血后再混匀静置：待完全溶血后再混匀1min。 4充池：混匀血小板悬液，并取充池：混匀血小板悬液，并取1滴充入血细胞计滴充入血细胞计数池，数池， 静置静置10min。 5计数：用高倍镜计数中央大方格内的中央及四计数：用高倍镜计数中央大方格内的中央及四角共角共5个个 中方格内的中方格内的 血小板数量。血小板数量。实验五实验五 血小板计数血小板计数3计算计算 血小板数血小板数/L=N51020106=N109/L 参考值：参考值： 100300109/L实验五实验五 血小板计数血小板计数4本卷须知本卷须知 1稀释液必需符合优质的血小板稀释液，稀释液必需符合优质的血小板稀释液，因此

6、稀释因此稀释 液必需新颖、干净，无杂物和细菌污染；液必需新颖、干净，无杂物和细菌污染；定期检定期检 查稀释液的质量，实验前应先做稀释液查稀释液的质量，实验前应先做稀释液空白计空白计 数，符合仪器运用阐明方可运用。数，符合仪器运用阐明方可运用。2器材及操作必需规范化和规范化器材及操作必需规范化和规范化 所用器材必需校准、干净、枯燥。所用器材必需校准、干净、枯燥。采血、充液、计数均应规范，防止血小板激活或破坏。采血、充液、计数均应规范，防止血小板激活或破坏。血小板悬液充入计数池后必需静置血小板悬液充入计数池后必需静置15min再计数，并在采再计数，并在采 血后血后1h内完成计数。时间过短或过长那么

7、可导致血小板内完成计数。时间过短或过长那么可导致血小板未完未完 全下沉或失去光泽，使计数结果偏低。全下沉或失去光泽，使计数结果偏低。充液前必需悄然摇动血小板悬液充液前必需悄然摇动血小板悬液2min2min或或200200次以上，但用力次以上，但用力不宜过大，以免呵斥血小板破坏或产生气泡，引起计数误差。不宜过大，以免呵斥血小板破坏或产生气泡，引起计数误差。镜下察看时的光线要适中，并留意与细胞碎片、灰尘、微生镜下察看时的光线要适中，并留意与细胞碎片、灰尘、微生物等鉴别。物等鉴别。 3及时核准血小板计数结果 由阅历丰富的检验人员进展。 常用的方法有： 用同1份血标本制备良好的血涂片，察看血小板数量、

8、形 态和分布情况，进展核对。 用血小板计数的参考方法核对计数结果。 每份标本最好做2次计数，假设2次计数误差小于10%，取 其均值报告；假设计数误差大于10%，应做第3次计数，取 2次相近结果的均值报告。4排除非技术要素的影响排除非技术要素的影响 某些病理情况可干扰计数，出现血小板假性减少或某些病理情况可干扰计数，出现血小板假性减少或增多。增多。血小板聚集或凝集、异常蛋白血症、宏大血小板、卫血小板聚集或凝集、异常蛋白血症、宏大血小板、卫 星景象、高脂血症导致血小板假性减少。星景象、高脂血症导致血小板假性减少。HbH包涵体病人的红细胞碎片、慢性淋巴细胞性白血包涵体病人的红细胞碎片、慢性淋巴细胞性

9、白血 病病人的淋巴细胞核和细胞质碎片、小红细胞等可被病病人的淋巴细胞核和细胞质碎片、小红细胞等可被 误以为血小板，导致血小板假性增多。误以为血小板，导致血小板假性增多。5标本采集标本采集 最好清晨采血，采集过程中应防止反复握拳、拍打采最好清晨采血，采集过程中应防止反复握拳、拍打采血部位、扎止血带的时间过长血部位、扎止血带的时间过长1min，以免血小板激，以免血小板激活而影响计数结果。活而影响计数结果。 采血后立刻进展血小板检测。采血后立刻进展血小板检测。5方法学评价方法学评价 1普通光学显微镜直接计数法：普通光学显微镜直接计数法： 以草酸铵溶稀释液法为常规方法和参考方法。以草酸铵溶稀释液法为常规方法和参考方法。 2相差显微镜直接计数法：相差显微镜直接计数法： 此法计数的准确性高，血小板易于识别，并可于照相此法计数的准确性高，血小板易于识别，并可于照相 后核对计数结果，是计数血小板的参考方法。但由于后核对计数结果，是计数血小板的参考方法。但由于 所用仪器昂贵，临床上较少选用。所用仪器昂贵，临床上较少选用。 3血细胞分析仪计数法血细胞分析仪计数法 ： 简便、快速、反复性好，可同时测定血小板、简便、快速、反复性好，可同时测定血小板、MPV及及PDW等多个目的的特点，已广泛用于临床。但由于电阻抗等多个目的的特点，已广泛用于临床。但由于电阻抗法不