扶正解毒颗粒对染镍大鼠肾损伤的影响

1、扶正解毒颗粒对染镍大鼠肾损伤的影响        【摘要】     目的 观察扶正解毒颗粒对硫酸镍染毒大鼠肾损伤的干预作用及其促排镍作用。方法 将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、二巯基丁二酸(DMSA)组及扶正解毒颗粒大、中、小剂量组。除正常组外,其余大鼠以硫酸镍2.5 mg/(kg?d)腹腔注射染毒造模,扶正解毒颗粒大、中、小剂量组分别以扶正解毒颗粒5、10、20 mg/(kg?d)灌胃处理,DMSA组以DMSA 50 mg/(kg?d)灌胃,正常组与模型

2、组予生理盐水灌胃。实验第4周末检测大鼠肾功能、血镍、尿镍水平,并进行肾脏组织病理学检查。结果 随着造模时间的延长,扶正解毒颗粒各组大鼠血尿素氮、肌酐及血镍水平较模型组明显降低(P<0.05和P<0.01),尿中镍排泄增加(P<0.05和P<0.01),肾小管上皮变性、肾小管扩张、间质炎性细胞浸润等病理改变亦较模型组明显减轻。结论 扶正解毒颗粒对染镍大鼠具有良好的促排镍作用,对镍暴露肾损伤有一定的拮抗作用。     【关键词】  扶正解毒颗粒;硫酸镍;肾功能;肾脏组织病理学;大鼠   

3、0;Abstract：Objectives To study the interventing and nickel-excreting promoting effects of Fuzheng Jiedu granula on rats renal damage induced by nickel. Methods Wistar rats were divided into six groups：normal group, model group, DMSA group, and low-, medium-, high-dose of Fuzheng Jiedu granula group.

4、 Model rats were induced with intraperitoneal injection of NiSO4 2.5 mg/(kg?d). Fuzheng Jiedu granula group was administered by gavage of Fuzheng Jiedu granula 5, 10, 20 mg/(kg?d). DMSA group was given DMSA 50 mg/(kg?d), and normal goup and model group were given normal saline. At the end of four we

5、eks, the levels of BUN, SCr, blood nickel and urine nickel were measured and the renal pathological changes were observed, respetively. Results In Fuzheng Jiedu granula groups, BUN, Cr and blood nickel were all decreased (P<0.05, P<0.01), urine nickel increased obviously (P<0.05, P<0.01)

6、, and some pathological changes, such as the degeneration of renal tubularepithelial cell, the dilatation of tubule and interstitial infiltration of inflammatory cell appeared late and were attenuated as time progressed, compared with that of model group. Conclusion Fuzheng Jiedu granula can promote

7、 nickel excretion in rats exposed to nickel and has antagonistic effect on renal damage induced by nickel.Key words：Fuzheng Jiedu granula;nickel sulfate;renal function;renal histopathology;rats镍化合物是一类多器官毒物,可累及肝、肾、肺及心血管、血液等系统。肾脏为镍化合物毒性作用的重要靶器官。本课题组前期研究表明,扶正解毒颗粒对镍化合物毒性具有较好的拮抗作用1-3。本研究通过观察扶正解毒颗粒对硫酸镍暴露大

8、鼠肾功能、血镍、尿镍水平及肾组织病理学变化的影响,探讨扶正解毒颗粒的促排镍作用及其对镍性肾损伤的保护作用,旨在为扶正解毒颗粒的临床应用提供依据。1 实验材料1.1 动物清洁级Wistar大鼠70只,雌雄各半,体质量(180±20)g,兰州大学医学实验动物中心提供(甘动准14-006)。1.2 试剂和仪器硫酸镍为分析纯,含量>99%(西安化学试剂厂);二巯基丁二酸(DMSA),美国Sigma公司;尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr)、尿蛋白试剂盒(南京建成生物工程研究所)。AAS6000系列原子吸收分光光度计(江苏天瑞仪器股份有限公司)。1.3 药物扶正解毒颗粒由红芪、当归、枸杞

9、、丹参和茯苓等中药组成,甘肃省食品药品监督管理局批准(甘药制字Z07031625),兰州太宝制药有限公司生产。2 实验方法2.1 分组、造模及给药70只大鼠称重后随机分为7组。正常组：生理盐水灌胃,每日0.5 mL/只,并同时处死,作为空白对照;模型组：腹腔注射硫酸镍2.5 mg/(kg?d),连续7 d,此后隔日注射1次,造成染毒模型,同时每日生理盐水0.5 mL/只灌胃,直至处死;扶正解毒颗粒大、中、小剂量组(简称FJG大、中、小组)：染毒第8日起以扶正解毒颗粒20、10、5 g/(kg?d)灌胃处理,并予生理盐水0.5 mL/只灌胃,1次/d;DMSA组：除以DMSA 50 mg/(kg

10、?d)灌胃外,余同扶正解毒颗粒组,作为阳性对照。2.2 肾功能及血镍、尿镍水平检测各组灌胃第4周末,给予受试物后禁食不禁水24 h,以大鼠代谢笼收集大鼠24 h尿液,同时眼底静脉丛采集血样,分离血清,依据试剂盒操作说明进行BUN、SCr、24 h尿蛋白定量(24 h-UP)测定,石墨炉原子吸收分光光度法测定血、尿镍含量。2.3 肾脏组织病理学检查各组灌胃第4周末,断头处死,迅速摘取肾脏,剥去包膜,肾门纵切,4%多聚甲醛溶液固定、包埋、切片,HE染色,光镜下常规肾脏病理观察。3 统计学方法采用SPSS13.0统计软件,数据以x±s表示,进行两因素析因设计资料的方差分析及多均数间两两比较

11、的q检验。P<0.05为差异有统计学意义。4 结果4.1 药物对染镍大鼠肾功能的影响(见表1)表1 各组大鼠BUN、SCr 及24 h-UP变化比较4.2 药物对大鼠血镍、尿镍的影响(见表2)表2 各组大鼠血清、尿液镍含量变化比较4.3 药物对大鼠肾脏病理组织学变化的影响正常组大鼠肾组织结构清晰,形态正常。模型组肾间质、皮质肾小管肿胀、淤血,管腔变狭窄,肾小管上皮细胞颗粒变性,部分水肿坏死,脱落于管腔内,部分近曲小管上皮细胞内充满嗜碱性均质状物,集合管可见散在的蛋白管型,肾小球毛细血管充血、扩张,球囊腔狭窄,部分肾小球体积增大、炎细胞浸润。扶正解毒颗粒大、中剂量组仅见肾小管上皮细胞轻度颗

12、粒变性,未见明显肾小球毛细血管扩张、充血,球囊腔狭窄,肾小管肿胀,管内蛋白管型及炎细胞浸润等改变。扶正解毒颗粒小剂量组、DMSA组肾小球病理损害程度略轻于模型组外,其余与模型组相比无明显差异。表明扶正解毒颗粒可减轻肾组织病理改变。5 讨论硫酸镍是镍矿生产过程中的主要镍化合物之一,由于其溶解度较大,接触面较广,因此,进行硫酸镍毒性的干预研究尤为重要。研究表明,水溶性镍盐(如NiSO4)暴露,镍在肾脏中有较高的分布与蓄积1,4。镍暴露可致实验动物肾脏重量增加,尿白蛋白含量及BUN升高,出现氨基酸尿,肾近曲小管广泛坏死、炎症、纤维化等一系列损害5-7。本研究发现,经硫酸镍腹腔注射染毒,大鼠血清镍、尿

13、镍水平增高,并伴随明显的肾功能损害及一系列肾小球、肾小管病理改变。经扶正解毒颗粒灌胃处理后,大鼠肾功能改善,肾脏病理改变明显减轻,血清镍水平降低,尿中镍的排泄显著增加,其中大剂量扶正解毒颗粒促排镍作用接近DMSA。研究表明,扶正解毒颗粒不但具有“类螯合剂”样作用而影响机体镍代谢,还可能通过多途径、多靶点机制而发挥抗镍性肾损伤的综合效应,包括扶正解毒颗粒对镍诱发机体微量元素失衡、ATP酶活性抑制、氧化应激以及遗传毒性的拮抗等8-9,3。    【参考文献】  1 Cempel M, Janicka K. Distribution of nicke

14、l, zinc, and copper in rat organs after oral administration of nickel () chlorideJ. Biol Trace Elem Res,2002,90(1/3)：215-216.2 赵健雄,宁守斌,朱玉真,等.中药防治硫酸镍致肝肾损伤的实验研究J.卫生毒理学杂志,2000,14(4)：240-241.3 滕玉莲,吕晓云,朱玉真,等.扶正解毒汤对镍诱导NRK细胞微核形成的抑制作用J.中国中医基础医学杂志,2009,15(8)：592-595.4 Severa J, Vyskocil A, Fiala Z, et al. Di

15、stribution of nickel in body fluids and organs of rats chronically exposed to nickel sulphateJ. Hum Exp Toxicol,1995,14(12)：955-958.5 Kasprzak KS, Sunderman FW Jr, Salnikow K.Nickel carcinogenesisJ. Mutat Res,2003,533：67-97.6 Obone E, Chakrabarti SK, Bai C, et al. Toxicity and bioaccumulation of nickel sulfate in Sprague-Dawley rats following 13 weeks of subchronic exposureJ. Toxicol Environ Health A,1999,57(6)：379-401.7 Kasprzak KS, Diuan BA, Rice JM. Iron accelerates while magnesium inhibits nickel-induced