20120625-SFDA_10_Determination of PCR premix(已校)

1、10. Determination of PCR premix10. PCR预混合物的确定10.1 Basic Data of Test10.1 实验基本资料Document No.文件号BMT-TF-SFDA-01-R0Test Name实验名称Determination of PCR premix PCR预混合物的确定Purpose of the Test实验目的To determine the composition of PCR premix packaged in BMT HPV Genotyping 9G membrane KIT确定BMT HPV 分型9G膜试剂盒中PCR预混合物

2、的成分Tester实验操作人 (sign)（签名）Confirmor确认人 (sign)（签名）Date of Start (MM/DD/YY)开始日期（年年/月月/日日）Date of End(MM/DD/YY)结束日期（年年/月月/日日）Test Site实验场地 BMT 2-2-2 (Temperature : ,Humidity: ) （温度： ，湿度： ）Used Material/Specimen 使用的材料/标本1) Using a sample produced by diluting DNA HPV 16, 18, 31, 33 from 1.0x107 copies up

3、to 3 copies1) 通过将DNA HPV 16, 18, 31, 33从1.0x107拷贝稀释到3拷贝来获得标本2) Using a sample produced by diluting DNA HPV 45, 26, 35, 39, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 69, 70, 73, 6, 10, 11, 32, 34, 40, 42, 43, 44, 55, 62, 71, 74, 81 from 1.0x107 copies up to 1.0x10 copies2) 通过将DNA HPV 45, 26, 35, 39, 51, 52, 53

4、, 56, 58, 59, 66, 68, 69, 70, 73, 6,10, 11, 32, 34, 40, 42, 43, 44, 55, 62, 71, 74, 81, 52从1.0x107拷贝稀释到1.0x10拷贝来获得标本Product No.产品号Product Name产品名称QC#质控号BMT HPV1 Genotyping 9G Membrane StripBMT HPV1 分型9G膜试纸条BMT HPV2 Genotyping 9G Membrane StripBMT HPV2 分型9G膜试纸条Hybridization Buffer 杂交缓冲液HC Cy5-DNA Was

5、hing Buffer冲洗缓冲液10mM Tris buffer (pH8.0)10mM Tris 缓冲液(pH为8.0)PCR premixPCR预混合物BMT HPV Primer setBMT HPV引物组Name of Folder to Save Original File保存原始文件的文件夹名称 Determination of PCR premix Determination of PCR premix PCR预混合物的确定PCR预混合物的确定 Name of folder where the original file is saved 保存原始文件的文件夹名称 Name of

6、 original file 原始文件名10.2 Test Method10.2 实验方法1) Preparing Materials1) 物品准备The DNA used for test was used within the set effective period by producing as fixed concentration after quantifying with Nanodrop usingHPV L1 DNA (Human Papilloma Virus L1 DNA, Code 08/023) which is the national standard prod

7、uct parceled out by the Korean Food and Drug Administration. The used samples are as follows.在设定的有效期内使用已经过Nanodrop定量检测的确定浓度的DNA作为测试标本。 该测试样本是由韩国食品与药品管理局分配的国家标准品HPV L1 DNA（人乳头瘤病毒L1 DNA, 代码08/023）。使用的标本见下表。Used Material/Specimen使用的材料/标本Sample : HPV L1 DNA (Human Papilloma Virus L1 DNA, Code 08/023)样本：

8、HPV L1 DNA（人类乳状瘤病毒L1 DNA，编码08/023）HPV typeHPV亚型Management No.管理号HPV typeHPV亚型Management No.管理号HPV 16HPV-16-KFDAHPV 06HPV-06-KFDAHPV 18HPV-18-KFDAHPV 10HPV-10-KFDAHPV 31HPV-31-KFDAHPV 11HPV-11-KFDAHPV 33HPV-33-KFDAHPV 32HPV-32-KFDAHPV 45HPV-45-KFDAHPV 34HPV-34-KFDAHPV 26HPV-26-KFDAHPV 40HPV-40-KFDAHP

9、V35HPV-35-KFDAHPV 42HPV-42-KFDAHPV 39HPV-39-KFDAHPV 43HPV-43-KFDAHPV 51HPV-51-KFDAHPV 44HPV-44-KFDAHPV 52HPV-52-KFDAHPV 54HPV-54-KFDAHPV 53HPV-53-KFDAHPV 55HPV-55-KFDAHPV 56HPV-56-KFDAHPV 62HPV-62-KFDAHPV 58HPV-58-KFDAHPV 71HPV-71-KFDAHPV 59HPV-59-KFDAHPV 74HPV-74-KFDAHPV 66HPV-66-KFDAHPV 81HPV-81-K

10、FDAHPV 68HPV-68-KFDAHPV 69HPV-69-KFDAHPV 70HPV-70-KFDAHPV 73HPV-73-KFDA2) Test Process2) 实验步骤The test of determination of PCR premix was performed as follows.PCR预混合物的确定实验操作步骤如下：a) After preparing a sample produced by diluting DNA HPV 16, 18, 31, 33 form 1.0x107 copies up to 3 copies anddiluting DNA

11、HPV 45, 26, 35, 39, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 69, 70, 73, 6,10, 11, 32, 34, 40, 42, 43, 44, 55, 62, 71, 74, 81, 52 from 1.0x107 copies up to 1.0x10 copies将HPV 16, 18, 31, 33 DNA浓度从1.0x107 拷贝稀释至 3 拷贝，将HPV 45, 26, 35, 39, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 69, 70, 73, 6,10, 11, 32, 34, 40, 42, 43,

12、44, 55, 62, 71, 74, 81, 52 DNA浓度从1.0x107 拷贝稀释至1.0x10 拷贝，并用作实验样本。b) This is PCR amplified according to the PCR Method (2-2) of Users Manual using this as template DNA.使用上述样本为模板DNA，根据用户手册的PCR法（2-2）进行PCR扩增。c) Load 5ul of PCR products on 2% of Agarose Gel to do Electrophoresis and analyze the result ima

13、ges. 取出5ul PCR产物加入到2%的琼脂糖凝胶中进行电泳实验并分析所得结果图像。d) Composition of each reaction tube is as follows. d) 每支反应管里的成分如下。Reagents试剂Capacity (based on 1 test)容量（1次实验用量）PCR premixPCR预混合物1 tube (the tube is freeze-dried in the landscape in the mix.)1管（混合时细管应冷冻干燥）Primer I, II引物 I, II10ulThe extracted DNA提取出秋的DNA1

14、0ulTotal volume总量20ule) PCR amplification conditions are as follows: PCR扩增反应的条件如下：PCR conditionPCR反应条件Temperature()温度()time(sec)时间（秒）Number of cycles循环次数94300194104045457245723001941201410.3 Conclusion and Decision10.3 结论和判定34 types of different concentrations of HPV plasmid DNAs were used as target

15、 DNAs to do PCR amplification method(2-2) with Bioneers PCR premix AccuPower PCR PreMix(Cat# K-2016) and 5ul of PCR products were loaded on 2% of Agorose gel to do Electrophoresis finally. The test results are listed in following table(The intensities from strong to weak are: +3+2+10).使用34种不同浓度的HPV

16、质粒DNA作为目标DNA与Bioneer公司的PCR预混合物AccuPower PCR PreMix (Cat# K-2016)进行PCR扩增，最后吸取5ul的PCR产物加至2%的琼脂糖凝胶进行电泳测试。测试结果如下表所示（强度从强到弱表示为：+3+2+10）107 copies105 copies103 copies102 copies101 copies3 copiesHPV161st test第1次测试+3+3+3+2+1-2nd test第2次测试+3+3+3+2+1-3rd test第3次测试+3+3+3+2+1-HPV181st test第1次测试+3+3+3+2+1-2nd te

17、st第2次测试+3+3+3+2+1-3rd test第3次测试+3+3+3+2+1-HPV311st test第1次测试+3+3+3+2+1-2nd test第2次测试+3+3+3+2+1-3rd test第3次测试+3+3+3+2+1-HPV331st test第1次测试+3+3+3+2+1-2nd test第2次测试+3+3+3+2+1-3rd test第3次测试+3+3+3+2+1-107 copies105 copies104 copies103 copies102 copies101 copiesHPV451st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3

18、+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV261st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV351st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV391st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV511st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd tes

19、t第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV521st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV531st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV561st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV581st test第1次测试+3+3+2+2+1

20、-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV591st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV661st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+3+2+1-3rd test第3次测试+3+3+3+2+1-HPV681st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV691st test第1次测试+3

21、+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV701st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV731st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV061st test第1次测试+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+2+2+1-HPV101st test第1次测试

22、+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+2+2+1-HPV111st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV321st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV341st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV401st test第1次

23、测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV421st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV431st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV441st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV541st

24、 test第1次测试+2+1-2nd test第2次测试+2+1-3rd test第3次测试+2+1-HPV551st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV621st test第1次测试+3+2+1+1-2nd test第2次测试+3+2+1+1-3rd test第3次测试+3+2+1+1-HPV711st test第1次测试+3+3+2+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV741st test第1次测试+3+3+2

25、+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+2+1-HPV811st test第1次测试+3+3+2+1-2nd test第2次测试+3+3+2+1-3rd test第3次测试+3+3+2+1-According to Bioneers test results PCR premix validity period is: 2 years in the case of storage at less than 25, 10 days in the case of storage at 37 and 6 days in the case of

26、 storage at 50.根据Bioneer公司实验结果，PCR预混合物在25或以下储存有效期为2年，37为10天，50为6天。10.4 Summary of Gel result10.4 实验结果总结10.4.1 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 16 Concentration10.4.1 HPV 16各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第一次实验结果2nd Test Result第二次实验结果3rd Test Result第3次实验结果10.4.2 Image of PCR Amplified F

27、ragment Gel by Each HPV 18 Concentration10.4.2 HPV 18各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.3 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 31 Concentration10.4.3 HPV 31各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结

28、果10.4.4 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 33 Concentration10.4.4 HPV 33各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.5 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 45 Concentration10.4.5 HPV 45各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Re

29、sult第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.6 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 26 Concentration10.4.6 HPV 26各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.7 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 35 Concentration10.4.7 HPV 35各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test

30、 Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.8 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 39 Concentration10.4.8 HPV 39各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.9 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 51 Concentration10.4.

31、9 HPV 51各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.10 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 52 Concentration10.4.10 HPV 52各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.11 Image of PCR Amplified Fragment Ge

32、l by Each HPV 53 Concentration10.4.11 HPV 53各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.12 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 56 Concentration10.4.12 HPV 56各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.1

33、3 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 58 Concentration10.4.13 HPV 58各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.14 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 59 Concentration10.4.14 HPV 59各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Resul

34、t第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.15 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 66 Concentration10.4.15 HPV 66各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.16 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 68 Concentration10.4.16 HPV 68各浓度的PCR放大片段的分析图像

35、1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.17 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 69 Concentration10.4.17 HPV 69各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.18 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 70 Concent

36、ration10.4.18 HPV 70各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.19 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 73 Concentration10.4.19 HPV 73各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.20 Image of PCR Amplified

37、 Fragment Gel by Each HPV 6 Concentration10.4.20 HPV 6各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.21 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 10 Concentration10.4.21 HPV 10各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次

38、测试结果10.4.22 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 11 Concentration10.4.22 HPV 11各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次测试结果3rd Test Result第3次测试结果10.4.23 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 32 Concentration10.4.23 HPV 32各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次实验结果2nd

39、Test Result第2次实验结果3rd Test Result第3次实验结果10.4.24 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 34 Concentration10.4.24 HPV 34各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次测试结果2nd Test Result第2次实验结果3rd Test Result第3 次实验结果10.4.25 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 40 Concentration10.4.25 HPV 40各浓度的P

40、CR放大片段的分析图像1st Test Result第1次实验结果2nd Test Result第2次实验结果3rd Test Result第3次实验结果10.4.26 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 42 Concentration10.4.26 HPV 42各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次实验结果2nd Test Result第2次实验结果3rd Test Result第3次实验结果10.4.27 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV

41、 43 Concentration10.4.27 HPV 43各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次实验结果2nd Test Result第2次实验结果3rd Test Result第3次实验结果10.4.28 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 44 Concentration10.4.28 HPV 44各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次实验结果2nd Test Result第2次实验结果3rd Test Result第3 次实验结果10.4.29 Image of P

42、CR Amplified Fragment Gel by Each HPV 55 Concentration10.4.29 HPV 55各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次实验结果2nd Test Result第2 次实验结果3rd Test Result第3 次实验结果10.4.30 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 62 Concentration10.4.30 HPV 62各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次实验结果2nd Test Result第2 次实验结果3rd Test Result第3 次实验结果10.4.31 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 71 Concentration10.4.31 HPV 71各浓度的PCR放大片段的分析图像1st Test Result第1次实验结果2nd Test Result第2次实验结果3rd Test Result第3 次测试结果10.4.32 Image of PCR Amplified Fragment Gel by Each HPV 74 Concentrati