糖皮质激素及其受体在细胞数量稳态调节方面的作用及机制ppt课件

1、糖皮质激素及其糖皮质激素及其受体在细胞数量受体在细胞数量稳态方面的调理稳态方面的调理作用及机制作用及机制v研讨结果阐明，糖皮质激素研讨结果阐明，糖皮质激素glucocorticoids,GCglucocorticoids,GC一方面可以抑制体一方面可以抑制体内多种细胞的增殖，另一方面还对多种凋亡内多种细胞的增殖，另一方面还对多种凋亡诱导因子导致的细胞凋亡具有拮抗作用。诱导因子导致的细胞凋亡具有拮抗作用。v因此，以为因此，以为GCGC能经过上述作用来坚持细胞数能经过上述作用来坚持细胞数量的稳定，这种对细胞数量的稳态调理能够量的稳定，这种对细胞数量的稳态调理能够是是GCGC对机体稳态调理的一个重要

2、方面。对机体稳态调理的一个重要方面。v本次课主要讲授糖皮质激素本次课主要讲授糖皮质激素/ /受体抑制细胞增受体抑制细胞增殖和抗细胞凋亡的作用及其作用机制。这方殖和抗细胞凋亡的作用及其作用机制。这方面的研讨有助于充分了解面的研讨有助于充分了解GCGC的生理和药理作的生理和药理作用以及副作用产生的机制，同时对我们同窗用以及副作用产生的机制，同时对我们同窗做一些较深化的新药研讨任务能够会有一定做一些较深化的新药研讨任务能够会有一定的启发。的启发。v细胞对一些体内外刺激缺氧、炎症、细胞对一些体内外刺激缺氧、炎症、基因毒物质、活性氧、血液中某些神经基因毒物质、活性氧、血液中某些神经内分泌激素浓度的过度增

3、高等的反响内分泌激素浓度的过度增高等的反响取决于刺激的强度和细胞本身所处的形取决于刺激的强度和细胞本身所处的形状。状。v适度的刺激可以经过激活细胞内信号转适度的刺激可以经过激活细胞内信号转导途径导致细胞的增殖反响，而过强的导途径导致细胞的增殖反响，而过强的有害刺激那么可诱导细胞凋亡或导致细有害刺激那么可诱导细胞凋亡或导致细胞坏死。胞坏死。v因此因此, ,体内必然存在着维持细胞数量稳体内必然存在着维持细胞数量稳态的调控机制。态的调控机制。v该机制一方面可以防止细胞过度增殖而该机制一方面可以防止细胞过度增殖而导致的细胞数量异常增多肿瘤发生的导致的细胞数量异常增多肿瘤发生的根底，另一方面还可以维护细

4、胞免于根底，另一方面还可以维护细胞免于各种有害刺激所致的细胞凋亡或坏死。各种有害刺激所致的细胞凋亡或坏死。v维持细胞数量的稳态对于有机体的生长维持细胞数量的稳态对于有机体的生长发育、组织器官功能的维持以及防止肿发育、组织器官功能的维持以及防止肿瘤等疾病的发生开展具有重要意义。瘤等疾病的发生开展具有重要意义。v糖皮质激素糖皮质激素GCGC是调理机体生长发育是调理机体生长发育以及维持机体稳态的重要激素，该激素以及维持机体稳态的重要激素，该激素和其受体和其受体GRGR在坚持细胞数量的稳态在坚持细胞数量的稳态方面具有重要作用方面具有重要作用. .一、一、GC/GRGC/GR抑制细胞增殖和抗凋亡的作用抑

5、制细胞增殖和抗凋亡的作用 vGCGC可以抑制胸腺细胞、淋巴细胞和白血病细可以抑制胸腺细胞、淋巴细胞和白血病细胞的增殖后来证明胞的增殖后来证明GCGC还能诱导这些细胞凋还能诱导这些细胞凋亡，因此，亡，因此，GCGC被临床广泛用于抗炎，治疗被临床广泛用于抗炎，治疗本身免疫性疾病和淋巴细胞性肿瘤。本身免疫性疾病和淋巴细胞性肿瘤。vGCGC还能抑制成纤维细胞、成骨细胞的增殖，还能抑制成纤维细胞、成骨细胞的增殖，这是临床长时间运用这是临床长时间运用GCGC后导致皮肤萎缩、伤后导致皮肤萎缩、伤口愈合妨碍、骨质疏松、甚至股骨头坏死口愈合妨碍、骨质疏松、甚至股骨头坏死如在如在SARSSARS治疗中出现的情况的

6、重要缘由。治疗中出现的情况的重要缘由。vGCGC还能抑制上皮细胞如胃上皮细胞及多还能抑制上皮细胞如胃上皮细胞及多种上皮来源的肿瘤细胞如肺癌细胞、乳腺种上皮来源的肿瘤细胞如肺癌细胞、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌等的增殖，这种作癌、卵巢癌、前列腺癌等的增殖，这种作用是经过受体介导的。用是经过受体介导的。v除了能抑制多种细胞的增殖外，除了能抑制多种细胞的增殖外，GCGC对细胞凋对细胞凋亡同样具有重要的调理作用。如亡同样具有重要的调理作用。如GCGC可诱导淋可诱导淋巴细胞、白血病细胞、多种骨髓瘤细胞凋亡巴细胞、白血病细胞、多种骨髓瘤细胞凋亡. .v但对另一些细胞却有抗凋亡作用。如在神经但对另一些细胞却有抗

7、凋亡作用。如在神经细胞、心肌细胞、中性粒细胞、原代培育的细胞、心肌细胞、中性粒细胞、原代培育的肝细胞、肺上皮细胞以及卵巢卵泡细胞中，肝细胞、肺上皮细胞以及卵巢卵泡细胞中，GCGC能拮抗有害刺激如去除血清或生长因子、能拮抗有害刺激如去除血清或生长因子、缺氧、缺血缺氧、缺血/ /再灌、再灌、TNF-TNF-等诱导的细胞凋等诱导的细胞凋亡。亡。v有报道在乳腺癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细有报道在乳腺癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、前列腺癌细胞以及神经纤维肉瘤细胞等胞、前列腺癌细胞以及神经纤维肉瘤细胞等肿瘤细胞中，由于放射线、抗癌药顺铂、卡肿瘤细胞中，由于放射线、抗癌药顺铂、卡铂等诱导的细胞凋亡也能被铂等诱

8、导的细胞凋亡也能被GCGC明显抑制。明显抑制。v人工合成的人工合成的GCGC地塞米松地塞米松DexDex能抑制人卵能抑制人卵巢癌细胞系巢癌细胞系HO-8910HO-8910以及骨肉瘤以及骨肉瘤HOS-8603HOS-8603细胞的增殖细胞的增殖 . .v 察看察看DexDex与顺铂联用对卵巢癌与顺铂联用对卵巢癌HO-8910HO-8910细细胞的作用胞的作用: :发现发现DexDex单用可以抑制细胞增殖单用可以抑制细胞增殖25-30%25-30%，但是与化疗药物顺铂联用时，但是与化疗药物顺铂联用时，却可以明显降低顺铂诱导该细胞凋亡的作用却可以明显降低顺铂诱导该细胞凋亡的作用细胞凋亡从细胞凋亡从

9、70%70%降至降至30%30% 。v由于由于GC/GRGC/GR在同一细胞中既能抑制细胞增殖，在同一细胞中既能抑制细胞增殖，又具有抗凋亡的作用，这就剧烈提示又具有抗凋亡的作用，这就剧烈提示DexDex对细对细胞数量的调控并非单向的。胞数量的调控并非单向的。 DexDex对多种上皮来源的肿瘤细胞的数量调理能对多种上皮来源的肿瘤细胞的数量调理能够是一种稳态调理。它能使上皮来源的肿瘤够是一种稳态调理。它能使上皮来源的肿瘤细胞在多种刺激要素的作用下既不会过度增细胞在多种刺激要素的作用下既不会过度增殖，也不因出现凋亡诱导要素而导致细胞数殖，也不因出现凋亡诱导要素而导致细胞数量的过度减少。量的过度减少。

10、GC/GRGC/GR对细胞数量的稳态调理不仅与对细胞数量的稳态调理不仅与GCGC的生理的生理作用如调理生长发育，维持內环境稳定等作用如调理生长发育，维持內环境稳定等有关，还与有关，还与GCGC的药理作用及其副作用生长的药理作用及其副作用生长妨碍、伤口愈合缓慢、骨质疏松、肌肉萎缩妨碍、伤口愈合缓慢、骨质疏松、肌肉萎缩等有关。等有关。因此，研讨因此，研讨GC/GRGC/GR对细胞数量稳态的调理作用对细胞数量稳态的调理作用及其作用机制是非常必要的。及其作用机制是非常必要的。 vGCGC对机体的作用广泛而复杂，除了其受体介对机体的作用广泛而复杂，除了其受体介导的对基因表达的调理作用外，近年来的研导的对

11、基因表达的调理作用外，近年来的研讨已证明讨已证明GCGC还有非基因组还有非基因组nongenomic nongenomic actionaction作用，而作用，而GRGR也能够有配体非依赖性也能够有配体非依赖性的作用。的作用。vGCGC可以经过多种复杂机制影响在细胞增殖和可以经过多种复杂机制影响在细胞增殖和细胞凋亡通路中起关键作用的效应分子以及细胞凋亡通路中起关键作用的效应分子以及上游的信号转导蛋白和通路，调理细胞增殖上游的信号转导蛋白和通路，调理细胞增殖和凋亡，维持细胞数量的稳态。和凋亡，维持细胞数量的稳态。二、二、GC/GRGC/GR经过调理基因表达发扬抑经过调理基因表达发扬抑制细胞增殖

12、和抗细胞凋亡作用制细胞增殖和抗细胞凋亡作用v作为转录调理因子，作为转录调理因子，GRGR主要经过调理基因表主要经过调理基因表达介导达介导GCGC的作用的作用vGRGR促进或抑制基因表达的作用可以发生在转促进或抑制基因表达的作用可以发生在转录和转录后程度录和转录后程度v目前了解比较多的是目前了解比较多的是GRGR介导的转录调理。介导的转录调理。 一一GC/GRGC/GR调理基因转录的机制调理基因转录的机制 v迄今对迄今对GRGR调理基因转录的过程已有较深化的调理基因转录的过程已有较深化的研讨，已证明没有与配体结合时研讨，已证明没有与配体结合时GRGR主要存在主要存在于胞浆，于胞浆，GCGC与与G

13、RGR结合可以导致其激活，激活结合可以导致其激活，激活的的GRGR转入核内，经过以下方式调理基因转录：转入核内，经过以下方式调理基因转录：v经过蛋白质经过蛋白质DNADNA相互作用直接调理靶基因转相互作用直接调理靶基因转录录 v经过蛋白质蛋白质之间的相互作用间接调经过蛋白质蛋白质之间的相互作用间接调理靶基因转录理靶基因转录 1.1.经过蛋白质经过蛋白质DNADNA相互作用直接调理相互作用直接调理靶基因转录靶基因转录 v配体结合的配体结合的GRGR在核内与靶基因启动子在核内与靶基因启动子(promoter)(promoter)中中具有加强子作用的糖皮质激素反响元件具有加强子作用的糖皮质激素反响元

14、件glucocorticoid response element, GREglucocorticoid response element, GRE结合，结合，在该部位募集转录辅因子如共激活因子，对组在该部位募集转录辅因子如共激活因子，对组蛋白进展部位特异性的修饰，使染色质从严密的抑蛋白进展部位特异性的修饰，使染色质从严密的抑制形状转为疏散的易于转录的激活形状。制形状转为疏散的易于转录的激活形状。v之后，核受体与之后，核受体与RNARNA聚合酶聚合酶IIII以及通用转录因子以及通用转录因子GTFGTF相互作用，直接促进基因的转录；相互作用，直接促进基因的转录；v或者经过与负性的或者经过与负性的G

15、REGREnGREnGRE结合，取代该部位结合，取代该部位原有的转录因子，抑制靶基因的转录。原有的转录因子，抑制靶基因的转录。v组蛋白是真核生物染色体的根本构造蛋组蛋白是真核生物染色体的根本构造蛋白白, , 是一类小分子碱性蛋白质是一类小分子碱性蛋白质, , 有五种有五种类型：类型：H1 H1 、H2A H2A 、H2B H2B 、H3 H3 、H4H4，它，它们富含带正电荷的碱性氨基酸们富含带正电荷的碱性氨基酸, , 可以与可以与DNADNA中带负电荷的磷酸基团相互作用。中带负电荷的磷酸基团相互作用。v组蛋白是染色质中核小体的主要构造元件。组蛋白是染色质中核小体的主要构造元件。核小体主要由四

16、种组蛋白核小体主要由四种组蛋白H2A,H2B,H3H2A,H2B,H3和和H4H4构成。这四种组蛋白和缠绕着组蛋白的构成。这四种组蛋白和缠绕着组蛋白的DNADNA共共同组成了染色质。同组成了染色质。v研讨发现基因的表达并不仅仅由研讨发现基因的表达并不仅仅由DNADNA决议，组决议，组蛋白的修饰乙酰化、磷酸化和甲基化所蛋白的修饰乙酰化、磷酸化和甲基化所引起的构造变化同样能影响基因的开关，并引起的构造变化同样能影响基因的开关，并且这种变化同样也调控着基因的转录，影响且这种变化同样也调控着基因的转录，影响着基因的表达。着基因的表达。v组蛋白的乙酰化和去乙酰化能翻开或封锁某组蛋白的乙酰化和去乙酰化能翻

17、开或封锁某些基因，加强或抑制某些基因的表达。些基因，加强或抑制某些基因的表达。 v在多种疾病中，都存在组蛋白编码错误的在多种疾病中，都存在组蛋白编码错误的迹象。因此，有人将组蛋白编码称之为迹象。因此，有人将组蛋白编码称之为“第二套遗传密码。组蛋白的乙酰化修第二套遗传密码。组蛋白的乙酰化修饰对于研讨基因的表达调控至关重要。饰对于研讨基因的表达调控至关重要。v蛋白的乙酰化和去乙酰化是蛋白活性调理蛋白的乙酰化和去乙酰化是蛋白活性调理的一种重要的方式，经过乙酰化或去乙酰的一种重要的方式，经过乙酰化或去乙酰化，改动了染色质构造或是转录因子的活化，改动了染色质构造或是转录因子的活性，可以调理基因转录的活性

18、。性，可以调理基因转录的活性。 v染色质免疫沉淀技术染色质免疫沉淀技术(chromatin (chromatin immunoprecipitation assay,CHIP)immunoprecipitation assay,CHIP)是目前独是目前独一研讨体内一研讨体内DNADNA与蛋白质相互作用的方法与蛋白质相互作用的方法. .v根本原理根本原理: :在活细胞形状下固定蛋白质在活细胞形状下固定蛋白质-DNA-DNA复复合物合物, ,并将其随机切断为一定长度范围内的染并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段色质小片段, ,然后经过免疫学方法沉淀次复合然后经过免疫学方法沉淀次复合体体,

19、,特异性地富集目的蛋白结合的特异性地富集目的蛋白结合的DNADNA片段片段, ,经经过对目的片段的纯化与检测过对目的片段的纯化与检测, ,从而获得蛋白质从而获得蛋白质与与DNADNA相互作用的信息相互作用的信息. .v该方法可以用来研讨组蛋白的各种共价修饰该方法可以用来研讨组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系与基因表达的关系. .2.2.经过蛋白质蛋白质之间的相互作用经过蛋白质蛋白质之间的相互作用间接调理靶基因转录间接调理靶基因转录 vGRGR可在转录程度与其他转录因子相互作用，可在转录程度与其他转录因子相互作用，调理启动子中不含调理启动子中不含GREGRE的基因表达。这种方式的基因表达。这种

20、方式不需求不需求GRGR与与DNADNA结合。结合。v与其他转录因子相互作用的结果以抑制基因与其他转录因子相互作用的结果以抑制基因表达为主，其确切机制还不清楚，有能够与表达为主，其确切机制还不清楚，有能够与不同转录因子之间竞争数量有限的共激活因不同转录因子之间竞争数量有限的共激活因子有关。子有关。vGRGR与与AP-1 AP-1 、NF- BNF- B等转录因子之间的相互等转录因子之间的相互作用是作用是GC/GRGC/GR抗炎作用的重要机制之一。抗炎作用的重要机制之一。NFNFBB与本身免疫性疾病与本身免疫性疾病v目前已有证听阐明核转录因子目前已有证听阐明核转录因子NFNFBB能够经过信号传导

21、通路，调控基因的表能够经过信号传导通路，调控基因的表达，从而参与了很多本身免疫性和炎症达，从而参与了很多本身免疫性和炎症性疾病的发生和开展。性疾病的发生和开展。v在正常情况下，在正常情况下，NFNFBB位于细胞胞浆内，普位于细胞胞浆内，普通由两个功能亚单位，即通由两个功能亚单位，即P65P65和和P50P50，所组成，所组成，同时和其天然性的抑制因子同时和其天然性的抑制因子IBIBa a和和IBIBb b结合在一同，而后者阻止结合在一同，而后者阻止NFNFBB进入细胞进入细胞核，调控相关的靶基因。一旦细胞遭到刺激核，调控相关的靶基因。一旦细胞遭到刺激感染、氧化和抗原等，感染、氧化和抗原等，IB

22、IB磷酸化，相磷酸化，相应的蛋白酶体发生降解，应的蛋白酶体发生降解，NFBNFB激活，进入激活，进入细胞核，与靶基因结合，后者可产生大量的细胞核，与靶基因结合，后者可产生大量的炎症介质如白介素炎症介质如白介素1b1b和肿瘤坏死因子和肿瘤坏死因子a a，引起炎症反响的发生，同时基因的产物会进引起炎症反响的发生，同时基因的产物会进一步激活一步激活NFNFBB，从而扩展部分的异常炎症，从而扩展部分的异常炎症反响。反响。v糖皮质激素可以抑制某些转录因子和相应基糖皮质激素可以抑制某些转录因子和相应基因的表达，如因的表达，如APAP1 1和和NFBNFB，从而抑制炎，从而抑制炎症反响。有证据显示，糖皮质激

23、素能够是目症反响。有证据显示，糖皮质激素能够是目前最强的前最强的NFNFBB抑制因子。糖皮质激素可经抑制因子。糖皮质激素可经过结合糖皮质激素受体，抑制活化的过结合糖皮质激素受体，抑制活化的NFNFBB细胞胞浆内和细胞核核内，同时能抑制细胞胞浆内和细胞核核内，同时能抑制NFNFBB与靶基因结合，起到抑制异常炎症反与靶基因结合，起到抑制异常炎症反响的作用。最新研讨显示，糖皮质激素还能响的作用。最新研讨显示，糖皮质激素还能添加添加NFNFBB的抑制因子的抑制因子IBIB的转录和表达。的转录和表达。v由此可以推测：由此可以推测：GCGC经过抑制经过抑制NFBNFB而抑制肿而抑制肿瘤细胞的增殖的机制能够

24、与其上述抗炎机制瘤细胞的增殖的机制能够与其上述抗炎机制是类似的。是类似的。GRGR与转录因子与转录因子AP-1AP-1、NF-B NF-B 、p53p53、STAT5STAT5等等的相互作用在的相互作用在GC/GRGC/GR对细胞增殖和凋亡调控中对细胞增殖和凋亡调控中亦具有重要作用。亦具有重要作用。已证明核转录因子已证明核转录因子NF-BNF-B的靶基因的靶基因IL-6IL-6对激对激素非依赖性的前列腺癌素非依赖性的前列腺癌AIPCAIPC细胞具有明细胞具有明显增殖促进作用，显增殖促进作用，DexDex能抑制能抑制AIPCAIPC细胞的增殖。细胞的增殖。国内外研讨结果均阐明，国内外研讨结果均阐

25、明，GC/GRGC/GR抑制抑制NF-BNF-B的的转录活性和转录活性和IL-6IL-6的表达是的表达是GCGC抑制抑制AIPCAIPC细胞增细胞增殖的重要机制之一。殖的重要机制之一。二介导二介导GC/GR对细胞增殖和凋亡对细胞增殖和凋亡调控作用的靶基因调控作用的靶基因v已证明GC/GR的增殖抑制造用是经过对细胞周期如G1期的阻滞实现的.v并发现GC抑制细胞增殖的作用与其调理细胞周期的调理性蛋白的表达有关。vGC/GRGC/GR也可以经过调理凋亡相关蛋白的表达也可以经过调理凋亡相关蛋白的表达发扬抗凋亡作用，如有报道发扬抗凋亡作用，如有报道GCGC可以抑制凋亡可以抑制凋亡诱导因子诱导因子FasF

26、as或或Bcl-2Bcl-2蛋白家族中促凋亡成员蛋白家族中促凋亡成员表达，上调表达，上调Bcl-2Bcl-2蛋白家族中抗凋亡成员蛋白家族中抗凋亡成员Bcl-2Bcl-2或凋亡抑制因子或凋亡抑制因子Inhibitors of Inhibitors of apoptosis, IAPsapoptosis, IAPs的表达产生抗凋亡作用。的表达产生抗凋亡作用。vGC/GRGC/GR抑制增殖和抗凋亡的作用还与它们在多抑制增殖和抗凋亡的作用还与它们在多种细胞中诱导以下蛋白表达有关，如与种细胞中诱导以下蛋白表达有关，如与AKT/PKBAKT/PKB有高度同源性的血清和糖皮质激素调有高度同源性的血清和糖皮质

27、激素调理蛋白激酶理蛋白激酶1 1serum and glucocorticoid serum and glucocorticoid regulated kinase,Sgkregulated kinase,Sgk、MAPKMAPK磷酸酶磷酸酶MAPKphosphatase-1,MKP-1MAPKphosphatase-1,MKP-1、胰岛素样生、胰岛素样生长因子结合蛋白长因子结合蛋白1 1、细胞抑制和、细胞抑制和DNADNA损伤诱导损伤诱导的蛋白的蛋白growth arrest and DNA damage-growth arrest and DNA damage-inducible,GADD

28、45inducible,GADD45等。等。v在以往研讨在以往研讨GRGR对细胞增殖和凋亡调理的根底对细胞增殖和凋亡调理的根底上，选择了一些参与细胞增殖、凋亡和变形上，选择了一些参与细胞增殖、凋亡和变形运动的重要信号转导蛋白，研讨了运动的重要信号转导蛋白，研讨了GCGC对它们对它们的表达的表达/ /活性的影响，发现了以下一些表达受活性的影响，发现了以下一些表达受GCGC调理的调理的GRGR功能性靶基因。功能性靶基因。v小小G G蛋白蛋白RhoB RhoB vTGF1IITGF1II型受体型受体TRIITRII v信号调控蛋白信号调控蛋白SIRPSIRP 1.1.小小G G蛋白蛋白RhoB Rh

29、oB v RhoB是小G蛋白Rho亚族成员，有报道该蛋白具有抑制细胞增殖的作用，并能被多种细胞毒应激原，如紫外线UV和化疗药5-FU，顺铂等诱导。 vDex在人卵巢癌HO-8910和骨肉瘤细胞中能以浓度和时间依赖性的方式上调RhoB mRNA和蛋白质表达，GR的抑制剂RU38486可以抑制Dex上调RhoB的作用，阐明这种作用经过GR介导。 v将野生型的将野生型的RhoBRhoB表达载体转入表达载体转入HO-8910HO-8910细细胞，使其过度表达，可以使胞，使其过度表达，可以使DexDex抑制该细抑制该细胞增殖的作用加强；而用胞增殖的作用加强；而用RNARNA干扰技术抑干扰技术抑制制Rho

30、BRhoB的表达，那么可明显阻断的表达，那么可明显阻断DexDex的上的上述作用。述作用。 v以上结果阐明，以上结果阐明，GRGR上调上调RhoBRhoB参与了参与了GCGC对该对该细胞的增殖抑制造用。细胞的增殖抑制造用。v用同样的方法也证明用同样的方法也证明RhoBRhoB的上调与的上调与DexDex诱导该细胞形状改动有关。近期的研讨诱导该细胞形状改动有关。近期的研讨发现发现RhoBRhoB过表达或过表达或RhoBRhoB激活能使激活能使NF-BNF-B的核转位添加，根底转录活性加强，因的核转位添加，根底转录活性加强，因此，推测过表达的此，推测过表达的RhoBRhoB有能够参与了有能够参与了

31、GCGC对该细胞顺铂诱导的抗凋亡作用。对该细胞顺铂诱导的抗凋亡作用。2.TGF1II2.TGF1II型受体型受体TRIITRII v转化生长因子转化生长因子11TGF1TGF1对多种类型肿瘤对多种类型肿瘤细胞具有增殖抑制造用。介导其作用的有细胞具有增殖抑制造用。介导其作用的有I I型型和和IIII型型TGFTGF受体受体TRITRI和和TRIITRII。国外。国外报道报道DexDex可以抑制雄激素非依赖性的前列腺癌可以抑制雄激素非依赖性的前列腺癌PC-3PC-3细胞的增殖，并能诱导该细胞表达细胞的增殖，并能诱导该细胞表达TGF1TGF1。 vDexDex在在PC-3PC-3细胞和细胞和HO-8

32、910HO-8910细胞中能上调细胞中能上调TRIITRII表达约为对照的表达约为对照的2.52.5倍。该作用经倍。该作用经过过GRGR介导。介导。v将含有将含有TRIITRII启动子的报告基因转入启动子的报告基因转入PC-3PC-3细细胞中，证明胞中，证明DexDex可以以浓度依赖性的方式加可以以浓度依赖性的方式加强强TRIITRII报告基因的转录活性，阐明报告基因的转录活性，阐明DexDex上上调调TRIITRII的作用发生在转录程度。的作用发生在转录程度。v用用TRIITRII抗体阻断实验显示该抗体能明显阻抗体阻断实验显示该抗体能明显阻断断DexDex对对PC-3PC-3细胞的增殖抑制效

33、应，阐明细胞的增殖抑制效应，阐明DexDex能经过诱导的能经过诱导的TRIITRII表达，加强其信号转导表达，加强其信号转导介导其对介导其对PC-3PC-3细胞的增殖抑制造用。细胞的增殖抑制造用。 3.3.信号调控蛋白信号调控蛋白SIRPSIRP v信号调控蛋白信号调控蛋白Signal regulatory Signal regulatory protein,SIRPprotein,SIRP为一跨膜糖蛋白，属于为一跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族和抑制性受体家族成员。免疫球蛋白超家族和抑制性受体家族成员。在单核巨噬细胞中高表达。其胞内区可以和在单核巨噬细胞中高表达。其胞内区可以和多种具有酶活性

34、的信号转导蛋白和接头蛋白多种具有酶活性的信号转导蛋白和接头蛋白结合，在多条信号转导通路发扬作用，参与结合，在多条信号转导通路发扬作用，参与多种细胞功能的调理，包括抑制细胞增殖、多种细胞功能的调理，包括抑制细胞增殖、调理细胞的粘附和运动等。调理细胞的粘附和运动等。 v近来发如今小鼠巨噬细胞近来发如今小鼠巨噬细胞RAW264.7RAW264.7中，中，DexDex可以浓度和时间依赖性的方式诱导该蛋白可以浓度和时间依赖性的方式诱导该蛋白的表达。而在用的表达。而在用RNARNA干扰技术阻断了干扰技术阻断了GRGR表达的表达的稳转细胞系稳转细胞系RAW-H5RAW-H5中，中，SIRPSIRP明显下调，

35、其明显下调，其mRNAmRNA和蛋白质程度仅为对照的和蛋白质程度仅为对照的20%20%左右。将左右。将SIRPSIRP表达载体转入表达载体转入RAW-H5RAW-H5细胞，可以明显细胞，可以明显减慢细胞的增殖速率。以上阐明减慢细胞的增殖速率。以上阐明SIRPSIRP表达表达受受DexDex调理，后者介导了调理，后者介导了GRGR对该细胞的增殖抑对该细胞的增殖抑制造用。制造用。三、三、GC/GRGC/GR对细胞增殖、凋亡调控的对细胞增殖、凋亡调控的其他能够机制其他能够机制vGC/GR的非核作用或非基因组作用的非核作用或非基因组作用 vGR非配体依赖性的作用非配体依赖性的作用 一一GC/GRGC/

36、GR的非核作用或非基因组作用的非核作用或非基因组作用 vGC/GRGC/GR能经过快速的非基因组作用方式改动细能经过快速的非基因组作用方式改动细胞内多种信号转导通路，如胞内多种信号转导通路，如MAPKMAPK家族信号转家族信号转导通路、导通路、PI-3K-AKBPI-3K-AKB信号转导通路、信号转导通路、Ca2Ca2信信号转导通路等的活性形状，而这些通路又可号转导通路等的活性形状，而这些通路又可以经过影响下游的转录因子的活性，最终导以经过影响下游的转录因子的活性，最终导致细胞内基因表达的改动，参与了细胞的增致细胞内基因表达的改动，参与了细胞的增殖、凋亡的调控。殖、凋亡的调控。 vGCGC还能

37、抑制还能抑制CaspasesCaspases如如Caspase3,89Caspase3,89的活的活性，产生抗凋亡效应。性，产生抗凋亡效应。 二二GRGR非配体依赖性的作用非配体依赖性的作用v用用RNARNA干扰技术阻断了小鼠巨噬细胞系干扰技术阻断了小鼠巨噬细胞系RAW264.7RAW264.7细胞中细胞中GRGR的表达，建立了的表达，建立了GRGR表达受抑的稳转细胞系表达受抑的稳转细胞系RAW-H5RAW-H5，不测发现该细胞的增殖明显加快，传代后，不测发现该细胞的增殖明显加快，传代后第第6 6天细胞的数量是对照细胞的天细胞的数量是对照细胞的3 3倍左右。阐明倍左右。阐明GRGR有有明显抑制

38、该细胞增殖的作用。明显抑制该细胞增殖的作用。 v用人工合成的用人工合成的DexDex处置处置RAW264.7RAW264.7，在，在DexDex浓度为浓度为10-710-7和和10-6mol/L10-6mol/L时细胞增殖的抑制率分别仅为时细胞增殖的抑制率分别仅为25%25%和和35%35%，这种配体作用和抑制受体表达导致的对细胞，这种配体作用和抑制受体表达导致的对细胞增殖影响的差别，提示增殖影响的差别，提示GRGR抑制该细胞增殖的作用除抑制该细胞增殖的作用除了配体依赖性的以外，能够还具有配体非依赖性的了配体依赖性的以外，能够还具有配体非依赖性的作用。作用。v近年来越来越多的报道显示近年来越来

39、越多的报道显示, ,包括包括GRGR在内的核在内的核受体的转录激活功能并非只依赖于配体，受受体的转录激活功能并非只依赖于配体，受体的翻译后修饰，如磷酸化、硝化体的翻译后修饰，如磷酸化、硝化/ /亚硝基化亚硝基化nitration/nitrosylationnitration/nitrosylation、乙酰化等也、乙酰化等也可以影响受体与激素结合、核转位、可以影响受体与激素结合、核转位、DNADNA结合结合和转录激活功能。如已证明多种跨膜信号转和转录激活功能。如已证明多种跨膜信号转导通路中激活的蛋白激酶如蛋白激酶导通路中激活的蛋白激酶如蛋白激酶A A、ERKERK等和磷酸酶能经过对核受体的可逆

40、性磷等和磷酸酶能经过对核受体的可逆性磷酸化修饰，导致受体构象改动并影响其转录酸化修饰，导致受体构象改动并影响其转录激活功能。激活功能。 v有报道将雄激素受体有报道将雄激素受体ARAR的表达载体转染的表达载体转染没有没有ARAR表达的前列腺癌表达的前列腺癌PC-3PC-3细胞，使其表达，细胞，使其表达，可以导致该细胞的增殖和侵袭才干降低，同可以导致该细胞的增殖和侵袭才干降低，同时细胞表皮生长因子受体时细胞表皮生长因子受体EGFREGFR的磷酸化的磷酸化和和EGFREGFR引发的引发的PI-3KPI-3K信号转导通路也减弱。用信号转导通路也减弱。用免疫共聚焦和免疫共沉淀方法显示免疫共聚焦和免疫共沉

41、淀方法显示EGFREGFR和和ARAR在细胞内有共同的定位，提示在细胞内有共同的定位，提示ARAR有能够经过有能够经过直接与直接与EGFREGFR相互作用，改动其下游的信号转相互作用，改动其下游的信号转导通路活性，调理细胞的增殖、粘附和侵袭导通路活性，调理细胞的增殖、粘附和侵袭等生物学行为。等生物学行为。GRGR能否也有与能否也有与ARAR同样的作用同样的作用方式是个有兴趣的问题，值得进一步研讨。方式是个有兴趣的问题，值得进一步研讨。 四、四、GRGR靶基因群或基因表达调控网络的研讨靶基因群或基因表达调控网络的研讨v近年来一些实验室将高通量基因芯片技术和近年来一些实验室将高通量基因芯片技术和定

42、量定量PCRPCR技术相结合，研讨技术相结合，研讨GCGC处置组与对照组处置组与对照组细胞基因表达的差别，以挑选对细胞基因表达的差别，以挑选对GCGC反响性的反响性的基因基因 v优点：快速和高通量，实验获得的优点：快速和高通量，实验获得的GC/GRGC/GR靶基靶基因数量多因数量多 v缺陷：用这种方法发现的表达差别的基因既缺陷：用这种方法发现的表达差别的基因既可以是可以是GRGR的直接靶基因的直接靶基因primary GR target primary GR target genegene，也可以是，也可以是GRGR间接调理的靶基因间接调理的靶基因v染色质免疫沉淀染色质免疫沉淀Chromati

43、n Chromatin Imumnoprecipitation,ChIPImumnoprecipitation,ChIPv是一种用来研讨蛋白质是一种用来研讨蛋白质DNADNA相互作用相互作用的技术，用于检测每个候选靶基因的启的技术，用于检测每个候选靶基因的启动子区域能否存在能与特定转录因子结动子区域能否存在能与特定转录因子结合的特定合的特定DNADNA序列，如与序列，如与GRGR结合的糖皮结合的糖皮质激素反响元件质激素反响元件GREsGREs。假设一个基。假设一个基因的表达既受因的表达既受GCGC的调理，其启动子部位的调理，其启动子部位又存在又存在GREGRE，那么阐明该基因是，那么阐明该基因

44、是GRGR直接直接调理的靶基因。调理的靶基因。 WangWang等用等用DexDex处置体外培育的具有肺泡处置体外培育的具有肺泡IIII型上型上皮细胞特点的人肺腺癌细胞皮细胞特点的人肺腺癌细胞A549A549后，用基因后，用基因芯片分析和定量芯片分析和定量PCRPCR方法察看了基因表达的改方法察看了基因表达的改动，并用动，并用ChIPChIP技术检测了在这些靶基因启动技术检测了在这些靶基因启动子区域能够存在的能与子区域能够存在的能与GRGR结合的调理序列。结合的调理序列。该研讨证明了该研讨证明了5050个被个被GCGC诱导，诱导，2121个被个被GCGC抑制抑制的靶基因，根据这些靶基因的功能可以将它的靶基因，根据这些靶基因的功能可以将它们分为抑制增殖、抗凋亡、抗炎和参与肺泡们分为抑制增殖、抗凋亡、抗炎和参与肺泡外表活性物质合成四个部分。外