鸡精对蟾蜍蝌蚪生长发育的影响

1、鸡精对蟾蜍蝌蚪生长发育的影响冯彩平、王改芳，魏健 （吕梁学院生命科学系，山西吕梁 033000）摘 要：为了研究鸡精的安全性，本实验采用处于变态前幼体阶段的蟾蜍蝌蚪，每组12只，放入质量浓度分别为0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L、0.32 g/L的鸡精培养液中进行饲养。通过7天的体长体重的测量以及对变态发育情况的观察，在培养液浓度为0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L时，鸡精对蝌蚪的生长发育并无明显影响；当培养液浓度为0.32 g/L时，蝌蚪只有尾长出现了明显变化，总核异常率略有增高，此时鸡精对蝌蚪的生长发育出现了一定的影响。结果表明使用小剂量的鸡精变态前幼

2、体阶段的蟾蜍蝌蚪影响不大。大剂量的鸡精对生物体是否安全还有待进一步的研究。关键词：鸡精；蟾蜍蝌蚪；生长发育 鸡精是一种复合调味料，在烹调菜肴时适量使用，能促进食欲。其主要成分是味精，含量在40%左右。以及大量的盐分，还有淀粉（作用是使其形成颗粒状），增味核苷酸、糖及其他香料。由于“协同作用”，自身也能产生鲜味的增味核苷酸在和味精混合之后，会得到更加独特的鲜味。随着人民生活水平的提高，食品安全日益成为人们关注的热点问题。食品问题的频发令人们恐慌，那么食用鸡精是否安全？本文通过在不同浓度的培养液中饲养蟾蜍蝌蚪，研究蟾蜍蝌蚪的体长体重变化和红细胞微核变异情况，从而反映鸡精对蟾蜍蝌蚪生长发育的影响，为

3、鸡精的安全性提供参考。1 材料1.1 实验动物实验的开始时间是2015年4月末，笔者于山西省吕梁学院新校区的湖中进行捕捞。待湖内蟾蜍蝌蚪处于变态前幼体阶段时，挑选体色正常、反应迅速、体质健康、大小一致的健康蝌蚪进行实验。所有蝌蚪均在经过曝气处理的自来水中饲养，定时喂食适量饲料(白面馒头碎屑)，同时观察蝌蚪的适应状况。蝌蚪在实验室内饲养1周之后方可用于实验。1.2 实验器材胶头滴管、烧杯(1000 mL,100 mL,10 mL)、量筒(1000 mL)、移液管(10 mL)、玻璃棒、药匙、称量纸、吸水纸、塑料杯(高约15 cm、半径约3 cm)、蒸馏水、剪刀、一次性手套、镊子、毛细吸管、NaC

4、l、Na2SO4、HgCl2、解剖刀、解剖针、血细胞计数板、盖玻片、电子天平、光学显微镜、擦镜纸等。鸡精(太太乐鸡精调味料100 g装)，成分：味精、食用盐、大米、白砂糖、鸡肉、食品添加剂(5-呈味核苷酸二钠、核黄素)、鸡蛋全蛋液、食用香精、咖喱粉、小葱、大蒜。表1-1 包装袋上注明的营养成分表项目每份营养素参考值%能量值47千焦(kJ)1%蛋白质1.1克(g)2%脂肪0.2克(g)0%碳水化合物1.2克(g)0%钠1000毫克(mg)50%注：每份为5克(g)红细胞稀释液(Hayem稀释液)的配制：取NaCl(维持细胞渗透压)0.5 g，Na2SO4(使溶液的密度增加，使红细胞分布均匀并且不

5、易下沉)2.5 g，HgCl2(固定红细胞，防腐)0.25 g，加入蒸馏水至100 ml，搅拌均匀。2 方法2.1 预实验预先设置鸡精的质量浓度为0.10 g/L、0.20 g/L、0.40 g/L、0.60 g/L的培养液，每组12只进行饲养。7天后0.10 g/L组的实验蝌蚪正常存活，0.20 g/L组的实验蝌蚪存活11只，0.40 g/L组的实验蝌蚪存活6只，0.60 g/L组的实验蝌蚪全部死亡。因此，正式实验的培养液浓度定为0.40 g/L以下。2.2 正式实验根据预实结果，分别设置1个对照组和4个不同浓度梯度的培养组，每组溶液均为500 mL，对照组的培养液为曝气后的自来水，其余4组

6、配制的培养液中的鸡精的质量浓度分别为0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L、0.32 g/L。2.3 观察测定选取体长与体重差异不显著的蝌蚪，在每组培养液放入12只进行饲养。每天记录蝌蚪的体长体重及变态发育状况，共观测7天。2.4 蝌蚪红细胞的检测与计数在实验的第7天，每组记录完体长体重数据之后，进行红细胞微核实验。每组取5只蝌蚪，用纱布将其体表擦干，在头部和尾部连接处用剪刀剪断并置于烧杯中，然后用玻璃棒捣碎，之后向烧杯中加入少量的红细胞稀释液，接着用玻璃棒搅拌均匀，静置15 min，最后使用双层纱布对烧杯里的的混合液体进行过滤，获得的滤液即为实验所需的血细胞溶液。将盖玻片（与计

7、数板同时配套购置）放入计数板中央，用洁净玻璃棒蘸取少量已稀释混匀后的血细胞悬浮液，于盖玻片边缘一次性滴入计数室内，使之灌满，多余的液体用滤纸吸掉，静置23 min后，待细胞下沉后进行计数1。将制作好的装片使用光学显微镜进行观察，先在10倍镜下调整找到要观察的计数室，之后转到40倍镜，调整好视野，观察计数室内的蝌蚪的红细胞，记录红细胞的形态和核异常的情况。观察时需要用到软件DigiLabII-Client进行拍照，之后统计红细胞异常的类型及数目。2.5 数据通信统计与分析将之前观察到的细胞数据进行整理分析，计算出蟾蜍蝌蚪的红细胞数、微核细胞数和核异常细胞数。公式如下：红细胞数 = 5个中方格所数

8、得的红细胞的个数 × 5 × 10 000 × 稀释倍数微核细胞率() = 含有微核的细胞数/实验观察到的红细胞总数 × 1 000核异常细胞率() = 出现核异常(除去微核)的细胞总数/实验观察到的红细胞总数 × 1 000总核异常率 = 微核细胞率 + 核异常细胞率在将实验得到的数据进行统计并计算结果后，采取片方检验的方法对数据进行进一步的处理，最后一步对处理所得的数据和拍摄到的图片中出现的现象进行综合分析。3 结果与分析3.1 体长体重变化实验第一天，对照组和0.08 g/L、0.16 g/L的实验组的蝌蚪正常存活，0.24 g/L的实验

9、组死亡1只，0.32 g/L的实验组死亡2只；第二天对照组和0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L的实验组的蝌蚪正常存活，0.32 g/L的实验组死亡一只；之后的五天不再有死亡情况出现。表3-1 各组蝌蚪的存活情况(单位：只)0 d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 d对照组12121212121212120.08 g/L12121212121212120.16 g/L12121212121212120.24 g/L12111111111111110.32 g/L1210999999 对每天记录的蝌蚪的体长和体重数据进行统计，得到表3-2。表3-2反映了蝌蚪平均体长的变化，表

10、3-3反映了蝌蚪平均尾长的变化，表3-4反映了蝌蚪平均体重的变化。实验各组的蝌蚪均无出现变态发育的状况。从表3-2可以看出，在不同浓度的培养溶液中，蝌蚪的体长并无明显变化。从表3-3可以看出，随着培养液浓度的增高，蝌蚪的尾长出现明显变化，蝌蚪尾长随浓度的增加增长速度变快。从表3-4可以看出，在不同浓度的培养溶液中，蝌蚪的体重并无明显变化。表3-2 各组蝌蚪的平均体长(单位：cm)0 d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 d对照组0.800.800.800.800.800.810.810.810.08 g/L0.790.790.790.790.800.800.800.800.16 g/L0.

11、810.810.810.810.810.810.810.810.24 g/L0.800.810.830.830.830.830.830.830.32 g/L0.820.820.830.830.830.830.830.83表3-3 各组蝌蚪的平均尾长(单位：cm)0 d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 d对照组1.141.151.151.151.151.151.161.160.08 g/L1.151.151.151.151.161.161.161.170.16 g/L1.161.161.171.171.171.191.191.200.24 g/L1.151.161.171.171.191.

12、191.201.210.32 g/L1.161.181.181.191.191.201.221.22表3-4 各组蝌蚪的平均体重(单位：g)0 d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 d对照组0.0990.0990.1010.1020.0970.0980.1030.0980.08 g/L0.1000.1020.1010.1000.1000.1000.1010.1000.16 g/L0.1000.1010.1020.1010.0990.1020.1020.1010.24 g/L0.1100.1110.1090.1100.1110.1080.1100.1110.32 g/L0.1110.1120

13、.1100.1110.1130.1120.1110.1113.2 红细胞异常正常的红细胞形状呈椭圆形，其细胞核为圆形，居于整个细胞中央。微核同样为圆形，而且还观察到双核、三核、核变性、核破裂、核空泡、核质内凹和核质外凸等核异常现象的出现。 图3-1为观测中正常的红细胞和出现的微核及核异常（×40）对数据整理和卡方检验后分别得到表3-5，3-6，3-7。由表3-5可知，当培养液的浓度为0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L时，蝌蚪的红细胞微核细胞率相比于对照组差异不显著(P>0.05)；当培养液的浓度为0.36 g/L时，蝌蚪的红细胞微核细胞率相比于对照组差异显著(

14、P<0.05)。表3-5 对蟾蜍蝌蚪红细胞微核细胞率的影响蝌蚪总个数红细胞总个数微核细胞个数微核细胞率/对照组51262070.550.08 g/L51194050.420.16 g/L51302080.610.24 g/L512370181.460.36 g/L511880332.78 由表3-6可知，当培养液的浓度为0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L时，蝌蚪的红细胞核异常细胞率相比于对照组差异不显著(P>0.05)；当培养液的浓度在0.36 g/L以下时，蝌蚪的红细胞核异常细胞率相比于对照组差异显著(P<0.05)。表3-6 对蟾蜍蝌蚪红细胞核异常细胞率

15、的影响蝌蚪总个数红细胞总个数核异常细胞个数核异常细胞率/对照组512620282.210.08 g/L511940282.350.16 g/L513020332.530.24 g/L512370342.750.36 g/L511880373.11由表3-7可知，当培养液的浓度为0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L时，蝌蚪的红细胞总核异常率相比于对照组差异不显著(P>0.05)；当培养液的浓度为0.36 g/L时，蝌蚪的红细胞总核异常率相比于对照组差异显著(P<0.05)。表3-7 对蟾蜍蝌蚪红细胞总核异常率的影响蝌蚪总个数红细胞总个数总核异常细胞个数总核异常率/对照

16、组512620352.770.08 g/L511940332.760.16 g/L513020413.150.24 g/L512370524.200.36 g/L511880705.89 4、结论当培养液浓度为0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L时，鸡精对蝌蚪的生长发育并无明显影响；当培养液浓度为0.32 g/L时，蝌蚪只有尾长出现了明显变化，总核异常率略有增高，此时鸡精对蝌蚪的生长发育出现了一定影响。微核产生的原因是由于作用因子的错误诱导作用，细胞在进行有丝分裂的后期，染色体断片会丧失着丝粒，不能正常地移动到细胞的两极而游离于细胞质中，没有着丝粒的染色体和染色体断片就会落后而形成微核2。对于核异常产生的原因，可能是溶液中的作用因子诱发并导致蝌蚪红细胞的染色体损伤，致使红细胞染色体断裂、丢失、结构破坏3。通过结果与分析，我们可知相比于实验所用的量，我们每日摄入的鸡精的量并不多。所以在烧菜做饭时正常的鸡精用量对正常人身体健康并不会出现影响。大剂量的鸡精对生物体的安全性还有待进一步的研究。另外，大家都知道吃盐多不利健康，却忽视了摄取谷氨酸钠过量。鸡精中同时含有大量的氯化