标准菌种管理规程

1、标准菌种管理规程目的：规范药品微生物学检定用菌的管理， 最大限度降低变异率，确保菌 种 的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。职责：Q3管负责菌种的申购、接受、保存、分发，微生物检验员负责菌 种 的确认、传代、使用及销毁。范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使 用及销毁等。内容：1术语标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。菌种的代是指

2、将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第 0代。2.标准：检定菌的申购QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）药检所购买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。检定菌的接收菌种到达实验室后，由 QC主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支 的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在检定菌接收记录（附表1）上， 内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源

3、、接收日期、接收人等，贴好标签并储存于2-8C直到需要使用时。 储存期最长不超过5年。检定菌的保存工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上， 待菌生长充分以后，转移至28c冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短 期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活 处理后销毁。保存时间根据菌种种类而不同，细菌： 1个月；酵母菌：2个 月；霉菌及芽胞：3个月。采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡保存法。用无菌接种环轻轻刮取经冷冻复溶增菌后并接种至平板或琼脂斜面的菌苔， 并通过接种环与试管壁之间的轻轻摩擦而使细菌充分扩散到预先装入试管 中的无菌纯化水中

4、，调整菌液浓度，使其等同于10号比浊管，向已制备好的菌悬液中加入等体积的无菌甘油（浓度 20%,即为10%T油菌悬液，轻轻 振摇，使内容物充分混合，分装于无菌小试管，在 -20 C冷冻条件下保存。 此甘油冷冻管为第2代（G2）,保存期限为5年。使用时，取出一支放至室 温，转种增菌培养或接种至琼脂斜面复苏，挑取纯菌落传代或工作用。此种方法主要适用于需氧细菌和酵母菌的保藏（如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、 乙型副伤寒沙门菌）。C灭菌30分钟，置40 c恒温箱中蒸发水分，经无菌检查后备用。C冷冻冰箱中保存。此法主要适用于 霉菌、厌氧菌、放线菌、芽抱杆菌的保 存（如枯草芽抱杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌等）

5、。.检定菌的传代检定菌菌种的传代因冻干菌（标准菌种）与传代用菌种而不完全相同。C, 45分钟）。C, 45分钟）。C下培养3天（细菌）；2328c下培养5天（真菌和酵母菌）。培养后，首 先观察其是否具有典型的菌落形态，然后挑取生长旺盛的单一的纯菌落，划 线于平皿培养基，每种菌划4个平皿，以便收集较多的生长旺盛的典型单菌 落，进行保存和鉴定。鉴定时作革兰氏染色、镜检，观察其染色特性及形态 特征。最后再做生化实验以进一步鉴定该菌种。若在该平板上发现有其它菌 落生长，则说明操作有污染或菌种不纯，应将此被污染了的培养物灭活处理， 并寻找原因。应根据其原因采取措施重新分离挑选纯菌落。当无标准用菌种时，可

6、从省（市）药检所购买菌种作为传代用菌种，不需经 过复溶增菌，但应划线接种确认。将购回无异常的传代用菌种（一般为第3代），根据日常检验工作的需要量，挑取纯菌落转接斜面菌种数支，作为工 作用菌种（为第4代），同时，结合菌种的代数和最长保存期限，挑取纯菌落 制成浓菌悬液按“”的方法制备甘油冷冻管或液体石蜡管数支，作为传代用 菌种（仍为第3代） 当工作用菌种代数小于5时，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用 菌种。取在冰箱28c保存的工作用菌种用普通琼脂斜面传代，并将新传 代的培养物替代原有的菌种，作为工作用菌种。也可取用“甘油冷冻管保藏 法或液体石蜡覆盖保藏法”保存的菌种，进行复苏，直接作为工作

7、用菌种。细菌每1个月传代一次；酵母菌每2个月传代一次；霉菌及芽胞每3个月传 代一次。当超过5代，须用传代用菌种传代。,检定菌种的编号采用字母加数字表示：英文缩写字母一代次一传代日期一顺序号菌种的英文缩写字母：大肠埃希菌（）、金黄色葡萄球菌（）、枯草芽抱杆菌（）、白 色念珠菌（）、黑曲霉菌（）、乙型副伤寒沙门菌（）代数用一位带有下标数 字的字母表示：传代用菌种用 G表示；工作用菌种用 W表示；如G3表示传 代用菌种第3代；W减示工作用菌种第3代。传代日期用6位数字表示：年 份取最后两位数，月、日分别用两位数。如 2012年1月12日传代的第一支 大肠埃希菌作为传代用菌种的编号为：。.检定菌种的保

8、管.检定菌种的领用与使用.检定菌种（废弃）的销毁C、45分钟湿热灭活处理：新一代菌种制备成功后的上一代菌种； 使用完后 的菌种和带有标准菌种的器具和培养物；超过有效期的菌种；凡被污染、变 异、可疑等异常情况菌种；其他应废弃的菌种。销毁处理记录（附表7）。3 .记录归档本标准涉及的记录由质量管理部保存，保存期 5年。4 .附则：本标准附件二份，附表六份：附件1:传代用菌种保存方法、保存温度、保存期限 附件2:菌种复活、划线用培养基、培养条件附表1:检定菌接收记录附表2:检定菌种传代、分离记录附表3:检定菌种保存、领用登记台账附表4:检定菌种观察记录附表5:检定菌种鉴定记录附表6:检定菌种使用登记

9、台账附表7:废弃菌种(物品)销毁处理记录附件1:传代用菌种保存方法、保存温度、保存期限菌种名称保存方法保存温度保存期限大肠埃希菌CMCC(B) 44 102甘油冷冻管-20 C5年金黄色葡萄球菌CMCC(B) 26 003甘油冷冻管-20 C5年枯草芽抱杆菌CMCC(B) 63 501液体石蜡管-20 C5年白色念珠菌CMCC(F) 98 001液体石蜡管-20 C5年黑曲霉菌CMCC(F) 98 003液体石蜡管-20 C5年乙型副伤寒沙门菌CMC® 50 094甘油冷冻管-20 C5年附件2:菌种复活、划线用培养基、培养条件菌种名称复活培养基划线用培养基温度时间大肠埃希菌TSB或

10、营养肉汤TSA或营养琼脂培养基平皿32C24h金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌乙型副伤寒沙门菌白色念珠菌TSB或改良马丁SDA或玫现红钠培养基平皿24C48h黑曲霉7d附表1:检定菌接收记录记录名称检定菌种接收记录代码页次1共1页名称及编号数量代数来源接收日期接收人检查情况保存条件附表2:检定菌种传代、分离、保存记录记录名称检定菌种传代、分离记录代码页次1共1页名称及编号购进（领取）日期年 月曰来源传代前菌种保存方法传代用培养基传代日期传代用国种编号总数量传代用菌种工作用菌种操作人数量编P后效期保存方法数量编P后效期保存方法分离与纯 化过程纯度检查 结果操作人：复核人：附表3:检定菌种使用登记台账记录名称检定菌种保存、领用登记台账代码页次1共1页收到日期名称及编号数量接收人移交人领用日期用途数量发放人领用人附表4:检定菌种观察记录记录名称检定菌种观察记录代码页次1共1页日期冰箱温度(C)塞子是否松动是否霉父处理措施观察人附表5:检定菌种鉴定记录记录名称检定菌种鉴定记录代码页次1共1页国种名称及编P鉴定原因开始鉴定日期鉴定人复核人年 月 日鉴定 项目菌落形态革兰染色显微镜卜形态典型生化反应特征鉴定结论日期：年