高效液相色谱仪验证方案

1、验 证 文 件文件名称：高效液相色谱仪验证方案设备名称：高效液相色谱仪设备型号：LC-20AT文件编号：青岛双鲸药业有限公司验证方案审批表确认方案名称高效液相色谱仪验证方案确认方案编号方案起草人起草日期方案审核部门审核人审核日期审核意见兹证明我已审核同意高效液相色谱仪验证按此方案实施。批准意见批 准 人批准日期执行日期目 录1 概述2 验证目的3 验证依据及判断标准4 验证工作小组5. 相关文件6人员培训7安装确认8运行确认9性能确认10偏差记录11结论12. 再验证1. 概述 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱法。注入供试品，由流动

2、相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。 岛津LC-20AT型高效液相色谱仪是根据质量控制的目的和要求，结合目前仪器使用的情况，在调研的基础上，公司于2015年2月购置的精密仪器，其生产厂为岛津（中国）有限公司，由输液泵、检测器、自动进样器、柱温箱组成。应用软件为Labsolutions工作站。2. 验证目的 通过对岛津LC-20AT高效液相色谱仪的安装、运行、性能确认，确认新购进岛津LC-20AT高效液相色谱仪是否符合设计规范要求，是否能达到

3、该仪器所设置的性能指标，是否符合产品检验需求。3. 验证依据及判断标准 3.1 验证依据 3.1.1 药品GMP指南2010年版3.1.2 国家标准GB/T 26792-20113.1.3 岛津LC-20AT型高效液相色谱仪安装使用说明3.1.4 中国药典2010年版二部附录3.2 验证评判标准3.2.1 安装环境确认判断标准确认安装符合岛津LC-20AT型高效液相色谱仪安装使用说明要求和公司用户需求。3.2.2 运行确认判断标准安装确认认可后，在不使用试样的条件下，确认该仪器运行正常。3.2.3 性能确认判断标准 使用样品检测符合中国药典2010年版二部附录要求、国家标准和岛津LC-20AT

4、型高效液相色谱仪性能指标。4. 验证工作小组姓 名职务部门职责与分工王秋菊组长质量保证部全面组织确认工作，负责小组的协调工作。牛兆杰成员质量保证部起草确认方案，实施确认，确认资料的归档管理，会签确认报告。孙妹成员质量保证部起草确认方案，会签确认报告。徐智成员工程设备部协助确认，会签确认报告。5. 相关文件文件名称文件编号备注高效液相色谱法检验操作规程岛津高效液相色谱仪操作、维护规程6. 人员培训确认 方案实施人员应接受相关培训，确保正确实施本方案。培训内容被培训人培训人日期7. 安装确认7.1 基本资料检查项目结果存放地备注齐备缺失使用说明书设备的合格证书装箱单保修卡 检查人： 复核人： 日期

5、：部件设备型号设备编号结论应为实为输液泵自动进样器柱温箱检测器 检查人： 复核人： 日期：7.2 公用设施确认项目设计要求实际情况结论电压220V±22V频率50Hz±0.5Hz电源适配三孔插座、接地良好 检查人： 复核人： 日期：7.3 硬件环境与安装确认项 目实际情况结 论仪器安装于精密仪器室室内应避免易燃易爆和强腐蚀性气体及强烈的震动、电磁干扰和空气对流等安放的工作台应水平环境温度：1535环境湿度：35%75%外表光洁平整、字迹清晰、色泽均匀，不应有划伤、露底、裂纹、起泡等现象。各调节旋钮、按键、开关等工作正常，无松动；指示、显示清晰完整检测器、输液泵、自动进样器、

6、柱温箱、计算机、打印机和电源之间线路连接正确检测器、输液泵、自动进样器、柱温箱等管路连接正确 检查人： 复核人： 日期：7.4 软件配置确认项 目实际情况结 论打开电源开关，启动Windows XP，电脑开机正常打开高效液相色谱仪各部件电源开关，各部件面板显示正常在桌面上双击LC solution Lite图标，进入软件操作系统，启动正常打开检测器，有信号出现单击 LC 所对应的分析图标，听见LC 发出“哔”的声音，表示工作站与LC 联机正常 检查人： 复核人： 日期：8. 运行确认8.1 软件运行确认的内容项 目实际情况结 论双击LC solution Lite图标，单击 LC 所对应的分析

7、图标，进入软件操作系统，设定仪器流速为 ml/min，柱温为 ，波长 nm，分析时间 min，点击“下载”，检查是否按设定运行。重新设定仪器流速为 ml/min，柱温为 ，波长 nm，分析时间 min，及批处理等，点击“下载”，检查是否按设定运行。在再分析下处理色谱图，手动积分、参数调整等设置变化后的图谱显示是否正常。 检查人： 复核人： 日期：8.2 硬件运行确认内容8.2.1 工具名称型号/编号校验期/有效期秒表电子天平数字探针温度计 检查人： 复核人： 日期：8.2.2 流量确认先将准备好的5ml容量瓶在电子天平上精密称定（W1），以水为流动相，设定泵A流量为0.5ml/min，泵B流量

8、为0ml/min，待流速稳定后，用秒表计时10min，将流出的流动相用容量瓶接收，计时结束后将容量瓶进行第二次称重（W2），（W2-W1）即为接收到的水重量，折算出体积即为（W2-W1）/ ，流量即为流出体积/时间。同法测定泵B，设置流量5.0ml/min，计时为1min，每个流量测定6次，计算6次流量及流量的SD%与RSD%值，并计算流量输出误差及稳定性。SS流量输出误差=流量平均值-设定值×100%流量设定值SR流量稳定性=流量最大值-最小值×100%流量平均值流速(ml/min)重量（g）0.5W1W25.0W1W2设定流速(ml/min)测定流量（ml/min）SD

9、%(5%)RSD%(0.5%)SS(±3%)SR(±1.5%)1234560.55.0检查人： 复核人： 日期：8.2.3 柱温的准确性与稳定性确认将数字探针温度计固定在色谱柱恒温箱放置色谱柱处，选择室温加10和最高可控温度的90%两点进行测量。按温度从低到高顺序升温，当温度显示值稳定后，每隔5min记录一次温度计显示温度，共七次。平均值与设定值之差为该温度下的设定值误差（T），七次中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。设定温度()测定温度（）RSD%(1.0%)T（±2）TC（1.0）1234567检查人： 复核人： 日期：8.2.4 检测器波长的确认 紫外波长

10、标准空白溶液：0.05mol/L硫酸溶液 紫外波长标准溶液：将重铬酸钾放在110烘箱内烘约2小时至恒重，取出后于干燥器内冷却半小时，准确称取0.0600g，放入1000ml容量瓶中，用0.05mol/L硫酸溶液溶解并定容，即得。 打开检测器和工作站，开机预热稳定后，选取合适带宽，用1ml注射器向检测池内注入空白溶液（充满检测池），待检测器示数稳定后，在（235±5）nm、（257±5）nm、（313±5）nm、（350±5）nm的各波长下均将检测器示数归零。之后再用1ml注射器向检测池内注入标准溶液（充满检测池）至示数稳定，例如检定257nm时，从252

11、nm开始到262nm。每0.5min改变1nm，得到最高（或最低）值对应的波长与标准溶液特征波长示值之差，即为波长示值误差。特征吸收波长测定波长波长示值误差（±2nm）235nm257nm313nm350nm 检查人： 复核人： 日期：8.2.5 基线噪音和漂移的确认选用阻尼管（2000×0.12nm）代替柱子，以正己烷-正戊醇（997:3）为流动相，流速为2.0ml/min，波长254nm，开机预热，待稳定后记录基线65min，测得3min至23min内基线波动幅度作为基线噪音，用检测器自身的物理量（mAU）作单位表示，基线漂移用1小时内基线偏离原点的值（mAU /h）作

12、单位表示。 项目测定结果结论可接受标准基线噪音0.1mAU基线漂移 0.5mAU/h检查人： 复核人： 日期：8.2.6 前后进样残留量的确认标准溶液：0.0025mg/ml维生素D3溶液空白溶液：流动相选用阻尼管（2000×0.12nm）代替柱子，以正己烷-正戊醇（997:3）为流动相，流速为2.0ml/min，检测波长为254mn，进样量100µl，按下列样品进样。项目测定结果空白/标准溶液标准溶液空白溶液计算结果可接受标准峰面积0.2%峰高0.4%检查人： 复核人： 日期：9. 性能确认9.1 重现性确认使用一根阻尼管（2000×0.12nm）代替柱子，以正

13、己烷-正戊醇（997:3）为流动相，流速为2.0ml/min，检测波长254nm，进样量100µl，待柱子充分平衡且检测器基线稳定，噪音和基线符合规定要求后，取0.0025mg/ml维生素D3溶液，连续进样6次，计算6针峰高与峰面积的重现性，即RSD%值。项目123456RSD%(1.5%)峰面积 峰高检查人： 复核人： 日期：9.2 线性确认使用一根阻尼管（2000×0.12nm）代替柱子，以正己烷-正戊醇（997:3）为流动相，流速为2.0ml/min，检测波长254nm，进样量100µl，待柱子充分平衡且检测器基线稳定，噪音和基线符合规定要求后，进维生素D3溶液0.0015mg/ml、0.0020mg/ml、0.0025mg/ml、0.0030mg/ml、0.0035mg/ml，每个样品进样1次，求各浓度样品的响