DNA快速连接试剂盒RapidDNALigationKit_第1页
DNA快速连接试剂盒RapidDNALigationKit_第2页
DNA快速连接试剂盒RapidDNALigationKit_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、DNA 快速连接试剂盒(Rapid DNA Ligation Kit ) 货号:M050007产品及特点：DNA连接反应通过T4连接酶催化双链 DNA的3-OH和5-P形成磷酸二脂键而将 DNA共 价连接在一起。被连接的 DNA末端可以是粘末端（例如限制性切割EcoR I产生的末端），也可以是平末端（限制性切割Sma I产生的末端）。Pheiffer等人发现PEG可以促进T4 DNA连接酶催化的连接反应NAR, 11,7853-7871,1983,连接反应只需十分钟即可完成。本产品就是根据这一原理设计，其特点如下：1. 超快，整个连接反应只需要室温5分钟左右，反应液可以直接用于转化实验。2.

2、高效，溶液配方经过优化，每 ug插入DNA连接转化得到的重组子可达 10 uL - 3:另一端的 3-OH 与 DNA-AMP 反 应，形成磷酸 二脂键，释放 出 AMP 。 注：插入DNA片段的摩尔数最好是载体的 3-10倍，如果载体长度为 3000bp,则所需插入DNA片 段折合成重量（ng）=（插入DNA片段bp数X50 ng N）-3000 bp。N就是自己选定的插入 DNA片段 与载体的摩尔比。2.最后在每管中加入1 uL溶液B,轻柔吹打混合均匀后用微量离心机将液体全部甩到管底。3.室温放置至少5分钟，最长可以放置过夜。 70c保温10分钟。此步可以灭活有关的酶，否则转化效率有所降低

3、。5.根据使用的转化方法，每管各取适量用于转化实验，余下的放置在-20C保存E. coli感受态细胞的转化1.按标准方法转化E. coli感受态细胞（具体步骤略）左右。3. 既可用于平末端连接，也可用于粘末端连接，包括 PCR产物与T载体的连接。4. 简单，客户只需要提供载体和插入片段即可。规格及成分成份100次包装溶液A500 uL溶液B100 uL使用手册1份运输及保存：低温运输，-20C保存使用方法一：连接反应1 .在无菌的离心管中严格按下表顺序加入列各成分（以10 uL体系为例）成分阴性对照管样品管溶液A插入片段（自备）载体（自备）无菌水5 uL0.2-0.5 ug(注)50 ng补水到9 uL2. 取适量转化液涂在含适当抗菌素的LB培养平板上，37 c下培养半小时以上，直至液体被完全吸收。3. 倒置平板于37c继续培养12-16小时，待出现明显而又未相互重叠的单菌落时拿出平板三：重组质粒的筛选和鉴定1. 快速菌落PCR法（略）。2. 经典酶切质粒鉴定法（略）技术资料DNA连接酶催化DNA连接的分子机制1:Ligase 的 Lysine基团与 ATP 或 NAD反应，形成Ligase - AM

人人文库> 全部分类> 应用文书 > 作业报告

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论