6净区人员微生物监测管理程序（全）

1、标准操作规程 Standard Operating Procedure编号No.H3-SOP-73047版本号Version00车间洁净区人员微生物监测程序Clean Area Personnel Microbial Monitoring Procedure for Workshop页码Page5 of 5车间洁净区人员微生物监测管理程序Clean Area Personnel Microbial Monitoring Procedure for Workshop部门：Department签字/日期：Signature/Date起草人：Prepared byAPI QA 审核人：Reviewe

2、d by API QA 审核人：Reviewed by API QC 审核人：Reviewed by 技术部 批准人：Approved by 质量负责人 颁发部门Issued by质量法规部执行日期Effective Date替换文件Replaced ForSOP-QA-1123 C版复审日期Review Date分发部门Distributed to质量法规部、API QA、API QC、技术部、生产原料药的车间（101车间、102车间、103车间、105车间、106车间、108车间、109车间、203车间、205车间、206车间、207车间、208车间、209车间、210车间、306车间）1

3、 目的 建立洁净区人员微生物监测程序，规范洁净区人员的微生物监测。2 适用范围 适用于原料药车间洁净区人员的微生物监测。3 定义和术语 N/A4 责任4.1 车间或质检中心负责接触碟的制备、采样及培养测定。4.2 API QA负责组织监测结果超标的偏差调查。5 EHS要求N/A6 程序6.1 概述6.1.1 对于万级背景下的局部百级工序人员，每班都应进行微生物监测。6.1.2 万级洁净区人员的微生物监测频率应根据该工序的具体情况而定，如果系非终端灭菌生产线的药品（或药液）暴露的工序也应每班监测，其它工序则每周监测一次。6.1.3 十万级洁净区对人员的微生物监测一般不作要求。6.1.4 由车间或

4、质检中心有资格的人员负责接触碟制备、采样及培养测定，并做好H3-SOP-73047-R01车间洁净区人员微生物监测记录。6.1.5 发现监测结果达到警戒指标以上时，应向API QA报告，通知有关部门采取措施，必要时按照H3-SOP-71002“偏差管理程序”处理。6.2 方法6.2.1 营养琼脂培养基的配制:a 制法1：每1000ml培养基的成分配比如下（实际配制量，按各岗位的实际需要而定）： 牛肉浸出粉3g胨10g氯化钠5g琼脂14g水1000mlpH7.2±0.2将牛肉浸出粉、胨、氯化钠加入纯化水中，摇匀、微温溶解后，加入琼脂，加热使琼脂溶化后滤过，调节pH值使灭菌后为7.2&#

5、177;0.2。分装到合适数量的500ml或1000ml三角烧瓶中，然后往其中一个三角三角烧瓶中倒入约100ml新配好的培养基（用于灭菌后制备阴阳性试验碟）。加塞，包扎，在经验证后条件下灭菌（比如121灭菌20min），取出备用。b 制法2（若采用由中国生物制品检定所监制的营养琼脂脱水培养基，按制法2配制）：按说明书的配比要求，称取脱水培养基加入纯化水中（配制量，根据各岗位实际需要而定），加热、搅拌、溶解，直至煮沸。分装到合适数量的500ml或1000ml三角烧瓶中，然后往其中一个三角烧瓶中倒入约100ml新配好的培养基（用于灭菌后制备阴阳性试验碟）。加塞，包扎，在经验证后条件下灭菌（比如12

6、1灭菌20min），取出备用。c 考虑采样环境或采样表面可能含有残留消毒剂或抗生素粉尘微粒等抑菌物质，可在所用培养基中加入中和剂，以中和或消除抑菌物质的抗菌作用。通常在培养基中加0.1%聚山梨酯80、0.1%的卵磷脂；适量EDTA、对氨基苯酸、-内酰胺酶等。d 灭好菌后，制备阴阳性试验碟，3035培养48小时，做阴阳性试验，其余各瓶培养基应密封保存在225的条件下。e 如果阴阳性试验合格，这批配好的培养基最长可以在灭好菌后的三周内使用；但如果使用前检查发现有异、或者检测时发现阴性对照已染菌，这时应终止使用该批培养基，必要时进行调查并采取相应措施。6.2.2 接触碟的制备a 取上述灭菌好的营养琼

7、脂培养基一瓶，加热溶化，然后待其冷却至约45时注入各准备好的无菌培养皿(55)中，面积25cm2，为其罗纹盖，待其凝固后表面高出碟沿2mm的培养皿，3035预培养48小时，其中至少一碟用来作为阴性对照。b 预培养后的接触碟如果不是马上使用，应置入密封的容器中（比如不锈钢筒）存放在225的条件下，如果需要运送则应放在专门的不锈钢筒中，且最长应在一周内使用。如果在使用前检查发现有异，或者发现接触碟已染菌，应终止使用该接触碟。c 接触碟也可采用市售的（已制备好现成的接触碟）。6.2.3 采样a 采样时，旋开碟盖，将培养基表面轻轻按在需采样的表面上均匀接触10秒钟左右，使被测表面的微生物黏附在营养琼脂

8、培养基上，旋上碟盖。b 采样点分别是：手套、口罩（这两个部位必检），以及胸口、前臂、前额、眼镜、靴子-裤子接合处(简称：靴-裤)这些部位中随机选两个部位。采样后，用75%乙醇溶液或70%异丙醇溶液湿纱布擦拭被采样表面，以除去营养残迹。在碟盖上做好唯一性标记。c 手套的采样也可采用在自行制备的相应的琼脂培养基平板上将5指（戴手套）在培养基上按一下的采样法采样。6.2.4 培养监测：于3035培养48小时，点计菌落并记录，结果应符合下表标准，且不得发现怀疑为致病菌的菌株斑。6.2.5 测试宜在生产、检验活动开始前或生产、检验活动结束时取样，以不干扰正常工作。6.2.6 所有表面取样结果均应在相应的标准规定限度内；如有某处采样超过限度，则应及时消毒，寻找原因，重新采样2次，结果均应符合规定。6.3 洁净区人员微生物监测合格标准及警戒指标采样点合格标准（CFU/皿）警戒指标（CFU/皿）手 套<1a32胸 口54前 臂54口 罩108前 额54眼 镜108靴子-