白血病分子诊疗

1、分子生物学在白血病中的应用融合基因融合基因基因突变基因突变基因表达异常基因表达异常1. 融合基因：融合基因： 所谓融合基因，是指将两个或多个基因的编码区首所谓融合基因，是指将两个或多个基因的编码区首尾相连置于同一套调控序列（包括启动子、增尾相连置于同一套调控序列（包括启动子、增 强子、强子、核糖体结合序列、终止子等）控制之下，构成的嵌合基核糖体结合序列、终止子等）控制之下，构成的嵌合基因。因。 Chr 9Chr 22ABLBCRBCR-ABL融合基因融合基因2. 基因突变：基因突变： 错义突变（点突变）错义突变（点突变） 插入突变插入突变 缺失突变缺失突变 移码突变移码突变错义突变（点突变）：

2、错义突变（点突变）： DNA分子中一个碱基对被另一个不同的碱基对取代所分子中一个碱基对被另一个不同的碱基对取代所引起的突变。引起的突变。 如：如： JAK2V617F JAK2基因基因 mRNA水平（水平（cDNA水平）：第水平）：第1849位点位点G突变为突变为T 蛋白水平：第蛋白水平：第617位氨基酸位点由缬氨酸（位氨基酸位点由缬氨酸（V）突）突变变 为笨丙氨酸（为笨丙氨酸（F）插入突变：插入突变： 较长片段的较长片段的DNA的插入而发生突变，但不的插入而发生突变，但不改变阅读框改变阅读框 如：如： NOTCH1 H1590-L1592insFGP NOTCH1基基因因 mRNA水平（水平

3、（cDNA水平）：水平）：c.47754776ins(TGGGCC) 蛋白水平：蛋白水平： H1590-L1592insFGP缺失突变：缺失突变： 较长片段的较长片段的DNA的缺失而发生突变的缺失而发生突变 ，但不，但不改变阅读框改变阅读框 如：如： JAK2 N542-E543del JAK2基因 mRNA水平（水平（cDNA水平）：水平）： c.1624-1629 del 6bp 蛋白水平：蛋白水平：N542-E543 缺失N、E氨基酸 移码突变：移码突变：DNA片段中某一位点插入或丢失一个或几个（非片段中某一位点插入或丢失一个或几个（非3或或3的倍的倍数数碱基对时，造成插入或丢失位点以后

4、的一系列编码顺序发碱基对时，造成插入或丢失位点以后的一系列编码顺序发生生错位的一种突变。错位的一种突变。 如：如：CALR L367fs(46) 突变突变 CALR基因基因 mRNA水平（水平（cDNA水平）：水平）： c.1179_1230del 52bp 蛋白水平：第蛋白水平：第367位氨基酸（亮氨酸）位点发生移码，位氨基酸（亮氨酸）位点发生移码，在在 367位点起后的位点起后的46位氨基酸终止。位氨基酸终止。 癌基因或抑癌基因表达异常 如： WT1定量3、基因表达异常、基因表达异常二、白血病基因检测的临床意义1、 辅助诊断2、 指导治疗3、 评估预后4、 微小病变残留检测三、白血病相关基

5、因分类BCR-ABLFLT3-ITDJAK2V617FC-KITPML-RARaNPM1RUNX1AML1-ETODNMT3ATET2ASXL1/ASXL2IDH1/IDH2SF3B1SRSF2U2AF1 Class 1 增增 殖殖Class 2 分 化Class 3 表观遗传表观遗传Class 4 剪切因子剪切因子四、白血病相关常见基因AML CMLMPNALLCLLMDSAML 相 关 基 因 异 常融合基因：融合基因：1、 PML-RARa: 95% AML-M3 分为三型分为三型 L型、型、S型、型、V 型型 PLZF-RARa NPM1 -RARa2、 AML1-ETO: 40% A

6、ML-M2 (主要为主要为M2b)3、 CBF-MYH11：90% AML-M4Eo4、 MLL-AF17 MLL-AF6 AML-M4 /M5 MLL-AF9AML 相 关 基 因 异 常基因突变：基因突变：FLT3-ITDNPM1（A/B/D型）型）c-KitIDH1IDH2 ASXL2NRAS KRAS P53DNMT3A基因定量分析：基因定量分析：WT1 定量FLT3-ITD：AML-M3中发生频率较高c-Kit： 50%AML1-ETO阳性AML CBF-MYH11阳性AMLASXL2：AML1-ETO阳性AMLCML 相 关 基 因 异 常BCR-ABL : 95%CML CML特

7、异 marker 亚型： cDNA Protein b3a2、b2a2型 P210 e19a2型 P230 e1a2型 P190MPN 相 关 基 因 异 常PV、ET、PMF的诊断的诊断BCR-ABL 排除早期慢粒排除早期慢粒PV: JAK2V617F JKA2exon12ET：JAK2V617F MPL CALRPMF: JAK2V617F MPL CALRBCR-ABL JAK2V617F MPL CALR JAK2exon12MDS 相 关 基 因 异 常WT1 定量定量DNMT3ATET2ASXL1SF3B1SRSF2 RUNX1SF3B1：主要见于50-70% 环形铁粒幼增多性贫血

8、SRSF2 ：主要见于CMMLALL 相 关 基 因 异 常BCR-ABL: 35%成人成人ALLTEL-AML1: 儿童儿童ALL 预后好预后好E2A-PBX1：预后不好：预后不好MLL-AF4 ： 婴幼儿多见婴幼儿多见NOTCH1 ： 预后好预后好FBXW7： 预后不好预后不好PTEN NRAS KRAS B-ALLT-ALLCLL 相 关 基 因 异 常P53NOTCH1NOTCH1：见于B系或T系CLL在CLL中为预后不好指标五、检测方法介绍：1、 RT-PCR2、 PCR3、 PCR-测序测序4、 RQ-PCR六、结果报告单分析：Thank you !1. 融合基因：融合基因： 所谓

9、融合基因，是指将两个或多个基因的编码区首所谓融合基因，是指将两个或多个基因的编码区首尾相连置于同一套调控序列（包括启动子、增尾相连置于同一套调控序列（包括启动子、增 强子、强子、核糖体结合序列、终止子等）控制之下，构成的嵌合基核糖体结合序列、终止子等）控制之下，构成的嵌合基因。因。 Chr 9Chr 22ABLBCRBCR-ABL融合基因融合基因缺失突变：缺失突变： 较长片段的较长片段的DNA的缺失而发生突变的缺失而发生突变 ，但不，但不改变阅读框改变阅读框 如：如： JAK2 N542-E543del JAK2基因 mRNA水平（水平（cDNA水平）：水平）： c.1624-1629 del 6bp 蛋白水平：蛋白水平：N542-E543 缺失N、E氨基酸 二、白血病基因检测的临床意义1、 辅助诊断2、 指导治疗3、 评估预后4、 微小病变残留检测CML 相 关 基 因 异 常BCR-ABL : 95%CML CML特异 marker 亚型： cDNA Pro