大肠杆菌生长曲线试验报告

1、、实验方案设计实验序号实验工程大肠杆菌生长曲线的测定实验时间实验室生化楼327小组成员一.实验目的1.通过对大肠杆菌生长曲线的测定,了解细菌生长的特点,综合练习微生物实验的根本实验技能.2,稳固培养基的配制、火菌、仪器的包扎、倒平板.3.掌握用比浊法测定细菌的生长曲线.二.实验原理、实验流程或装置示意图将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中,在适宜的条件下进行培养,一定时间测定培养液中 的菌量,以菌量的数量作纵坐标,生长时间作横坐标,绘制的曲线叫生长曲线.它反映了单细胞微生物在一定 环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律.依据其生长速率的不问,一般可把生长曲线分为延缓期、 生长期

2、、稳定期和衰亡期.将每一种一定量的细菌转入新鲜液体培养基中,在适宜的条件下培养细胞要经历延 迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段.延迟期：又叫调整期.细菌接种至培养基后,对新环境个短暂适应过程不适应者可因转种而死亡.此期曲线平坦稳定,由于细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以与营养物质等不同而异,一般为14小时.此期中细菌体积增大,代谢活泼,为细菌的分裂增殖合成、储藏充足的酶、能量与中间代谢产物.对数生长期：又称指数期.此期生长曲线上活菌数直线上升.细菌以稳定的几何级数极快增长,可持续几 小时至几天不等视培养条件与细菌代时而异.此期细菌形态、染色、生物活性都很典型,对外界环境因素

3、的作用敏感,因此研究细菌性状以此期细菌最好.抗生素作用,对该时期的细菌效果最正确.稳定期：该期的生长菌群总数处于平坦阶段,但细菌群体活力变化较大细菌浓度到达最大即环境最大容纳量.由于培养基中营养物质消耗、毒性产物有机酸、过氧化物等积累PH下降等不利因素的影响,细菌繁殖速度渐趋下降,相对细菌死亡数开始逐渐增加,此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡.细菌形态、染色、生物活 性可出现改变,并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以与芽胞等.衰亡期：随着稳定期开展,细菌繁殖越来越慢,死亡菌数明显增多.活菌数与培养时间呈反比关系,此期 细菌变长肿胀或畸形衰变,甚至菌体自溶,难以辩认其形.生理代谢活动趋于

4、停滞.故陈旧培养物上难以鉴别 细菌.体内与自然界细菌的生长繁殖受机体免疫因素和环境因素的多方面影响,不会出现象培养基中那样典型的 生长曲线.掌握细菌生长规律,可有目的地研究限制病原菌的生长,发现和培养对人类有用的细菌.这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不问.因此通过测定微生物的生长曲 线,可了解个菌的生长规律,对于科研和生产都具有重要的指导意义.测定微生物的数量有多种不向的方法,可根据要求和实验室条件选用.本实验用比浊法测定,由于细菌悬 液的浓度与光密度OD值成正比,因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度,并将所测 的OD直与其对应的培养时间作图,即可

5、绘出该菌在一定条件下的生长曲线,此法快捷、简单.三.实验设备与材料大肠杆菌斜面菌种、营养肉汤培养基、生理盐水0.85%NaCl 50mL 721型分光光度计、比色皿、恒温摇床、培养箱、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、酒精灯、电炉、接种环、试管架、锥形瓶15个250mL、无菌吸管、烧杯1000mD、乳胶头、报纸、胶塞、玻璃棒等四.实验方法步骤与考前须知实验步骤：配制营养肉汤培养基 营养肉汤培养基灭菌配制大肠杆菌菌液 标记一接种培养 测定 一绘制生长曲线1 .配制营养肉汤培养基：用电子天平称取14.4g营养肉汤粉末置于 1000mL烧杯中,加水至800mL用电炉加热加 热过程中要用玻璃棒不断搅拌至沸腾后

6、,冷却少许后分别倒进15个锥形瓶中,每个锥形瓶倒50mL塞上胶塞,用报纸包好,棉绳系好.2 .营养肉汤培养基灭菌：将步骤一包好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅121c灭菌30min.3 .配制大肠杆菌菌液：取大肠杆菌斜面菌种一支,在酒精灯火焰上方操作,用接种环刮取少量菌苔于约50mL生理盐水中,充分震荡均匀.4 .标记：将15个锥形瓶进行标记,分别标号1、2、314、15.5 .接种：用1mL无菌移液管分别移取 1mL大肠杆菌菌液到已编号的15个锥形瓶中,并充分震荡均匀.6 .培养：将锥形瓶置于37c下在恒温摇床上培养150r/min .然后分别按对应时间将锥形瓶取出,待培养结束 时测定OD值.7

7、.测定：将培养的大肠菌群菌液用无菌移液管移取到比色皿中,选用600nm分光光度计上调节零点,用蒸储水作为空白对照,并对不同时间培养液从0起依次进行测定,对浓度大的菌悬液用自来水适当稀释后测定,使其OD值在0.1-0.65之间,经稀释后测得的 OD直要乘于稀释倍数,才是培养液实际的OD直.8 .绘制生长曲线：对所得数据进行生长曲线的绘制,分析实验结果.五.实验数据处理方法与原始记录实验数据处理方法：以时间为横坐标,OD00为纵坐标,用excel绘制大肠杆菌的生长曲线,分析实验结果.实验数据原始记录：123456783 倍94 倍12:0013:0015:4518:0019:0020:0020:3

8、021:0022:00.展010.0720.0730.0790.2820.4561.1051.1690.5540.572OD00 20.0730.0730.0790.2820.4561.1031.1700.5540.571P OD00 30.0740.0730.0790.2820.4561.1061.1660.5540.570平均0.0730.0730.0790.2820.4561.1051.1680.5540.571104 倍114 倍124 倍135 倍145 倍155 倍56 倍66 倍23:0000:001:002:006:208:3011:0012:00ODOo 10.6420.50

9、30.7510.5180.6610.5810.5030.5530展0 20.6410.5010.7560.5230.6640.5640.5040.555ODOo30.6410.5090.7580.5230.6630.5720.5040.555平均0.6410.5040.7550.5210.6630.5720.5040.554随时间的变化大肠杆菌液吸光度的数据括号内数字表示稀释倍数时间/h013.756788.5910O展00.0730.0730.0790.2820.4561.1051.1681.6622.284时间/h1112131418.3320.52324O展02.5642.0163.02

10、02.6053.3152.8603.0243.324修正前的大肠杆菌的吸光度数据时间/h013.756788.5910111318.3320.50%0.0730.0730.0790.2820.4561.1051.1681.6622.2842.5643.0203.3152.86修正后的大肠杆菌的吸光度数据时间/h013.756788.5910110展00.0730.0730.0790.2820.4561.1051.1681.6622.2842.564前12小时的大肠杆菌的吸光度数据32.521.510.5*f/LJ .00:00 4:489:36 14:24 19:12 0:00 4:48前12

11、小时的大肠杆菌的生长曲线图修正前的大肠杆菌的生长曲线图修正后的大肠杆菌的生长曲线图六.参考文献1,牛天贵.食品微生物学实验技术.第1版.：科学,2021.2.杨革,微生物学实验教程,第2版,：科学,2021.3,何国庆,贾英民,丁立孝等,食品微生物学.第2版.:中国农业大学,2021.4,周德庆,胡宝龙,微生物学实验教程,第2版,：高等教育,2006.七.教师对实验方案设计的意见签名：年 月 日二、实验报告1 .蠢赢僦窠实验现象：随着培养时间的增加,培养基里的液体变得越来越混浊,所散发出来的味道也越来越浓,味道很难闻.实验结果：大肠杆菌在培养基里生长繁殖,数量越来越多,到达一定数量后,增长速度

12、变慢,后大肠杆菌进行营养和空间的竞争,有些大肠杆菌死亡,最后数量不断减少,直至变为 0.2 .对实验现象、实验结果的分析与其结论分析：随着培养时间的增加,培养基里的液体变得越来越混浊,所散发出来的味道也越来越浓,味道 很难闻,是由于大肠杆菌增长迅速,后来数量到达顶峰,此时培养基内的营养物质已被消耗殆尽,大肠杆菌进行营养和空间的竞争,有些大肠杆菌死亡,最后数量不断减少,直至变为0.通过对大肠杆菌生长曲线的测定,了解了细菌生长的特点,是：刚开始时细菌缓慢增长,后来增长迅速,呈“ J型,最后细菌生长缓慢,数量到达顶峰,在一段时间内保持不变.因实验测量的时间不够合理等各种因素,因此用原始数据绘制出来的

13、大肠杆菌的生长曲线图不够有规律,经修正后生长曲线比拟好.结仑:细菌的生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期.体内与自然界细菌的生长繁殖受机体免疫因素和环境因素的多方面影响,不会出现象培养基中那样典型的生长曲线.掌握细菌生长 规律,可有目的地研究限制病原菌的生长,发现和培养对人类有用的细菌.这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同.因此通过测定微生物的生长曲线,可了解细菌的生长规律,对于科研和生产都具有重要的指导意义.三.实验总结1 .本次实验成败与其原因分析总的来说,本实验算是成功的.在一定程度生探讨出了大肠杆菌生长曲线的测定.通过此次试实验, 了解了细菌生长的特点

14、,综合练习了微生物实验的根本实验技能.稳固培养基的配制、灭菌、仪器的包 扎、倒平板.在一定程度上掌握了用比浊法测定细菌的生长曲线的方法.但有两点缺乏：一是一开始忽略了 OD值必须在0.10-0.65 之间才有效；二是时间的间隔不太合理,开 始的阶段应该时间安排紧密一点,还有晚上的一段数据没有测,实验时间不够长,延迟期和衰亡期曲线 不明显.实验中假设能考虑全面,这样测出来的数据才更有代表性,更加准确.2 .本实验的关键环节与改良举措本试验的关键环节有以下四点：整个过程最好是在无菌操作台上操作,这样培养基受空气中微生物的影响就较小,同时也可以减少污染,保证培养基里大肠杆菌纯度较高,否那么会在一定程度上影响结果的准确性. 每隔半小时或一个小时测量时间要安排合理, 时间要限制好：在实验初期30min对菌悬液进行一次测 定.实验中期每小时测一次,后期12小时测定一次,依次持续到20小时后.从恒温摇床取出锥形瓶,用无菌移液管移取少量,操作要快,先进行预测,OD值应在0.10-0.65 之间,如果超过这个范围那么需要进行稀释后再测量. 测量时要等数字变化