叶绿体中色素的提取和分离ppt课件

1、实验三、叶绿体中色素的提实验三、叶绿体中色素的提取和分别取和分别预习 如何引导学生探求叶绿体中有几种色素的方法？ 提出本人的方案。要件检查，找人讲。实验原理实验原理叶绿体中具有多种光合色素，这些色素可以溶解于有机溶叶绿体中具有多种光合色素，这些色素可以溶解于有机溶剂丙酮酒精等中，可采用研磨叶片，用丙酮提取叶绿体中剂丙酮酒精等中，可采用研磨叶片，用丙酮提取叶绿体中的色素。的色素。层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂，各种光合色素在层层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂，各种光合色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上分散得快；析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上分散得快；反之分散

2、得慢，这样就可以用纸层析法将不同色素别分开来。反之分散得慢，这样就可以用纸层析法将不同色素别分开来。石英砂和碳酸钙的作用分别是有助于磨碎叶绿体和去除石英砂和碳酸钙的作用分别是有助于磨碎叶绿体和去除叶子的汁液中的有机酸。防止出现酸性环境而破坏叶绿素，叶子的汁液中的有机酸。防止出现酸性环境而破坏叶绿素，酒精用来溶解出叶绿素；用滤纸使色素分别的原理是纸酒精用来溶解出叶绿素；用滤纸使色素分别的原理是纸上层析的原理，分子量大的物质分散慢上层析的原理，分子量大的物质分散慢,所以在下面；分子量小所以在下面；分子量小的物质分散快，所以在上面。的物质分散快，所以在上面。目的要求目的要求1会预备该实验。会预备该实

3、验。2练习并掌握提取和分别叶绿体中色练习并掌握提取和分别叶绿体中色素的方法。素的方法。3学会引导学生探求叶绿体中有几种学会引导学生探求叶绿体中有几种色素的方法。色素的方法。实验资料实验资料新颖菠菜叶或其他绿色叶片，如新颖菠菜叶或其他绿色叶片，如女贞叶效果相当好女贞叶效果相当好试剂仪器试剂仪器烧杯烧杯100ml、研钵、漏斗、尼、研钵、漏斗、尼龙布、毛细吸管、剪刀、小试管、培育龙布、毛细吸管、剪刀、小试管、培育皿、角匙、量筒皿、角匙、量筒10ml、天平、丙、天平、丙酮、层析液、二氧化硅、碳酸钙。酮、层析液、二氧化硅、碳酸钙。层析液的配置方法为：层析液的配置方法为：2020份石油醚、份石油醚、2 2

4、份丙酮、份丙酮、1 1份苯。份苯。层析液的作用是溶解并分别不同色素。分别的原理与四种色素在层析液中的溶解度有关。层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂，由于四种色素的化学组成和构造不同，因此每一种色素分子在层析液分子的作用下，抑制色素分子之间的引力，向层析液中分散的速度不同，即在层析液中的溶解度不同，因此四种色素随层析液在滤纸条上的分散速度就不同，其中胡萝卜素在层析液中的溶解度最高，分散速度最快，其次是叶黄素、叶绿素a，叶绿素b溶解度最低，分散得最慢。根据此原理使滤纸条上处于同一滤液细线上的四种色素在分散中别分开来。 方法步骤方法步骤1提取绿叶中的色素提取绿叶中的色素1称取、剪碎称取、剪碎5g叶片，

5、放入研钵中。叶片，放入研钵中。2“三加：参与少许二氧化硅、碳酸钙、三加：参与少许二氧化硅、碳酸钙、5ml丙酮。丙酮。3研磨快速、充分研磨。研磨快速、充分研磨。4过滤搜集滤液将研磨液迅速倒人基部放一块单层尼龙布的漏斗中过滤，将滤过滤搜集滤液将研磨液迅速倒人基部放一块单层尼龙布的漏斗中过滤，将滤液搜集到小试管中及时用棉塞将试管塞紧备用。液搜集到小试管中及时用棉塞将试管塞紧备用。2制备滤纸条制备滤纸条将枯燥过的定性滤纸剪成将枯燥过的定性滤纸剪成6cmlcm的条，一端剪去两角，距该端的条，一端剪去两角，距该端1cm处用铅笔画一处用铅笔画一条极细的横线。条极细的横线。3画滤液线画滤液线用毛细吸管汲取少量

6、滤液，沿铅笔线均匀画一条细而直的滤液线，待枯燥后再反复画用毛细吸管汲取少量滤液，沿铅笔线均匀画一条细而直的滤液线，待枯燥后再反复画23次次数越多色素越多。次次数越多色素越多。4色素分别色素分别将于燥后的滤纸条画线一端朝下放入有少许将于燥后的滤纸条画线一端朝下放入有少许23ml层析液的层析瓶烧杯中，层析液的层析瓶烧杯中，盖上盖培育皿。盖上盖培育皿。5察看层析后，取出滤纸条，察看色素分别情况。察看层析后，取出滤纸条，察看色素分别情况。 6整理、洗手整理、洗手实验结果最快：胡萝卜素次之：叶黄素次之：叶绿素A最慢：叶绿素B最宽的是叶绿素A最窄的是胡萝卜素胡萝卜素和叶绿素B最远叶绿素A和叶绿素B最近 作

7、业1、实验中容易出现哪些问题？怎样处理？2、这个实验成果的关键是什么？实验胜利的关键实验胜利的关键1、 叶片要新颖、颜色要深绿，含有较多的色素。2、 研磨要迅速、充分。叶绿素不稳定，易被活细胞内的叶绿素酶水解。充分研磨使叶绿体完全破裂，提取较多的色素。3、 滤液细线不仅要求细、直，而且要求含有较多的色素，所以要求待滤液干后再画一两次。4、 滤液细线不能触及层析液，否那么色素溶解到层析液中，滤纸条上得不到色素带。实验平安问题：实验平安问题：此实验中的提 取液通常含丙酮。分别液中除丙酮外还含有石油醚和苯，它们都是有机溶剂，具有有机溶剂的共性易燃，运用时一定要远离火源，用后应把瓶塞盖严，放到阴凉 的

8、地方。一旦不慎因有机溶剂引起着火时，应立刻用沙土或湿布扑灭，火势较大的，可用灭火器，但不可用水扑救。此外这些溶剂具极强的挥发性，其中苯早已确以为能引起再生妨碍性贫血。配制这些溶剂时应带口罩，操作间要及时通风换气。各种色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上分散的快，反之那么慢。 2、约5克的菠菜緑叶，剪碎，放入研钵中。3、研钵中参与少许二氧化硅和碳酸钙，再参与10mL无水乙醇。4、迅速研磨。5、将研磨液迅速倒入玻璃漏斗中进展过滤，将过滤液搜集到50mL烧杯中。6、用毛细吸管在事先预备好的长6厘米，宽1厘米的滤纸条上划线。7、3 mL的层析液倒入100mL烧杯中，将滤纸条斜靠着烧杯

9、的内壁插入到层析液中，滤液线不要接触到层析液随后用培育皿盖上。8、几分钟后，取出滤纸条，等枯燥后，我们就可以看到滤纸条上的色素带了。下面四种都可做层析液： 120份汽油、2份丙酮、2份石油醚、1份苯。将滤纸条直接用该层析液进展层析，就可以得到比较理想的效果。 29份体积分数为95%的酒精和1份苯混合。 3汽油或四氯化碳加少许无水硫酸钠。 4体积分数为95%的酒精或93号汽油。 1提取液的改良提取液的改良 除丙酮外，也可用酒精替代，结果大致一样。和酒精相比，丙酮有一定毒性，除丙酮外，也可用酒精替代，结果大致一样。和酒精相比，丙酮有一定毒性，因此无妨换一下；另外一种提取液是：在参与丙酮因此无妨换一

10、下；另外一种提取液是：在参与丙酮23ml后，再参与后，再参与2ml石油石油醚，可以提高胡萝卜素提取效果，色素带分别景象更明显。醚，可以提高胡萝卜素提取效果，色素带分别景象更明显。2层析液的改良层析液的改良 层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂，教材上给出了两种层析液配方：一种层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂，教材上给出了两种层析液配方：一种是是93号汽油，另外一种为号汽油，另外一种为20份石油醚，份石油醚，2份丙酮，份丙酮，l份苯混合而成。采用以下配份苯混合而成。采用以下配方实验效果也不错：方实验效果也不错： 1四氯化碳加少许无水硫酸钠；四氯化碳加少许无水硫酸钠； 295的酒精；的酒精； 39份份

11、95酒精加酒精加1份苯；份苯； 420份汽油，份汽油，2份丙酮，份丙酮，2份石油醚，份石油醚，1份苯。份苯。 其中，采用配方其中，采用配方4效果最好，配方效果最好，配方2经济而且简便一些，但效果有一经济而且简便一些，但效果有一定折扣。定折扣。 3设立对照实验设立对照实验设立一个空白对照组，在其他条件完全一样的情况下，一个画滤液细线，而另设立一个空白对照组，在其他条件完全一样的情况下，一个画滤液细线，而另外一个不画，结果进展对照，消除外一个不画，结果进展对照，消除“不同色带是层析液在滤纸上分散后留下的不同色带是层析液在滤纸上分散后留下的颜色的疑心。这样同时也培育严谨的实验作风，表达生物学科研的根

12、本原那颜色的疑心。这样同时也培育严谨的实验作风，表达生物学科研的根本原那么。么。为了强调不要使层析液浸没滤液细线的意义，也可以设立这样一个浸没滤液细为了强调不要使层析液浸没滤液细线的意义，也可以设立这样一个浸没滤液细线的对照组，结果会发现色素被溶解下来，而无法分别。线的对照组，结果会发现色素被溶解下来，而无法分别。4实验方法探求实验方法探求本实验不仅可用条形滤纸进展层析，还可以采用圆形滤纸层析方法：取平面培本实验不仅可用条形滤纸进展层析，还可以采用圆形滤纸层析方法：取平面培育皿育皿1只，铺一层细纱只，铺一层细纱(厚约厚约05cm)，将滤纸剪为圆形放人培育皿中，在圆形，将滤纸剪为圆形放人培育皿中，在圆形滤纸中央点上滴滤纸中央点上滴2滴色素提取液，静置约滴色素提取液，静置约1min，然后依次滴，然后依次滴35滴层析液，每滴滴层析液，每滴中间间隔中间间隔30s，然后盖上培育皿盖，几分钟后，可以察看结果会得到近似同心，然后盖上培育皿盖，几分钟后，可以