亚硝酸根重氮化-偶联反应共振散射光谱测定(一).

1、亚硝酸根重氮化-偶联反应共振散射光谱测定（一）【关键词】重氮化摘要：目的研究重氮化偶联反应的共振散射光谱并应用于亚硝酸根的测定。方法 利用磺胺 N, N 二甲基苯胺亚硝酸根间发生的重氮化偶联反应，通过 共振散射光谱法测定痕量亚硝酸根。结果方法的线性范围为 012X10-3g/L，检出限为 80X10-5g/L。结论该方法简单、灵敏度高、选择性好，用于 蔬菜中亚硝酸根含量的测定，回收率为928%985%。关键词：重氮化偶联反应；共振散射光谱；亚硝酸根；磺胺;基苯胺Applicati on and study on res onance scatteri ng spectra of diazoti

2、zati on-coupling reacti onAbstract : Objective To study resonance light scattering(RLS) spectra ofdiazotizatio n-coupli ng react ion and establish a new method for the determ in ati on oftrace n itrite.Methods RLS spectra was used to determ ine trace nitrite by thediazotizati on-coupli ng react ion

3、betwee n sulfa nilic amideN,Ndimethyl an ili nenitrite.Results The lin ear range of this method was on 12X10-3g/L and the detect ionlimit was 80X10-5g/L.Conclusion The method were simple，with high sensitivity andgood selectivity.It was used to determ ine trace nitrite in vegetable samples.Therecover

4、y was 92.8%98.5 %.Key words : diazotizationcoupling reaction； resonance scatteringspectra ； nitrite;sulfanilic amide;N,Ndimethyl aniline亚硝酸根广泛存在于环境、水体、食品和土壤中，它与脂肪族和芳香族的 胺类化合物反应生成的 N-亚硝胺化合物一直是公认的强致癌物，因此，亚硝酸 根是环境、水质、食品等检测的重要指标之一。检测亚硝酸根的方法有光度法 1、荧光法2、电化学法3、色谱法4等。共振光散射是一种新 分析技术，多用于蛋白质、核酸等大分子的分析测定5。目前，基于

5、重氮化 偶联反应共振散射光谱法测定亚硝酸根的报道较少。实验发现，亚硝酸根磺胺 N, N 二甲基苯胺重氮化-偶联反应体系的反应产物可产生强烈的共振光散射现 象。我们对此现象进行研究，建立了测定痕量亚硝酸根的新方法。1 材料与方法11 仪器和试剂 970CRT 荧光光度计（上海分析仪器总厂）；紫外可见分光光 度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；NanoZS9（纳米粒度与 Zeta 电位分析 仪（英国 Malvern 公司）。亚硝酸根标准溶液：用干燥的 NaNO2 粉末配制含亚硝 酸根为1mg/ml 贮备液，临用时稀释为 10 卩 g/ml ;磺胺溶液：58X10-N, N 二甲3mol/L （用

6、乙醇溶解后再用水定容）;N, N 二甲基苯胺溶液：0.015mol/L （称取 09063gN,N 二甲基苯胺，加 10mol/L 盐酸溶液 250ml，待其溶解后用水稀释至 500ml）;乙酸钠溶液：40mol/L ,水为 16MQ 的高纯水。所用试剂均为分析纯。12 实验方法 在 2 支 25ml 比色管中，依次加入磺胺溶液 30ml，其中 1 支 加入10 卩 g/ml 的亚硝酸根溶液 10ml 或适量样品，另 1 支为试剂空白，稀释到 10ml，摇匀，静置 15min，加入 0015mo/L 的 N,N 二甲基苯胺溶液 30ml，4mol /L 的乙酸钠溶液 14ml，定容至 25ml

7、，摇匀，静置 25min。以试剂空白为参比,在激发波长、发射波长均为 533nm 的条件下，测定溶液的共振散射光强度，其 中含亚硝酸根者为 I，试剂空白为 10,计算 1（ 1=1 -I0）。13 样品分析 取新鲜白菜、土豆样品洗净，晾干。称取 30g 样品在研钵中 研碎，加入 60ml 蒸馏水于 60E水浴锅中浸泡 10min,滤入 100ml 容量瓶中，定 容。取白菜、土豆样各 05ml，按实验方法进行测定，样品中亚硝酸根的含量由 式（1）计算得到。X=CXV1 V2XW（1）式中：X-样品中亚硝酸根的含量（卩 g/g） ; C-由回归方程计算得到比色管中 亚硝酸根的总含量（卩 g）; V

8、1-浸取液的总体积；V2-取样体积；W样品的质量。2 结果21 光谱 以蒸馏水为参比， 测定磺胺 N,N 二甲基苯胺亚硝酸根体系的吸收 光谱 （图1）和共振散射光谱（图 2）。由图 l 可知，磺胺与亚硝酸根反应生成的重 氮盐在可见光区无吸收，在弱碱性介质中重氮盐与N,N 二甲基苯胺反应生成的偶联产物在 370 和 500nm 处有吸收，并且随着亚硝酸根量的增加其吸收逐渐增 强。由图 2 可知，磺胺、N, N 二甲基苯胺及生成的重氮盐的共振散射光强度均 为 0,与基线重合，偶联反应的发生使得共振散射光明显增强，在468 和 533nm处产生 2 个共振散射峰，533nm 处的共振散射光强度大且稳

9、定，其强度与亚硝 酸根浓度呈正比，因此，实验选择 533nm 作为定量测定波长。利用激光纳米粒 度仪测得偶联反应产物的平均粒径为 342nm 说明在反应条件下偶联反应产物 发生聚集，聚集产物具有较大的平均粒径从而使得共振散射光强度明显增强。1:磺胺；2: 1+NO-2 1.0ml;3:1+N,N 二甲基苯胺 + 乙酸钠；4: 3+NO-2 1.0ml ; 5:3+NO-2 2.0ml ; 6: 3+NO-2 3.0ml图 1 吸收光谱（略）1:磺胺；2: 1+NO2-1.0ml;3:1+N,N 二甲基苯胺 + 乙酸钠；4: 3+NO2- 1.0ml ; 5:3+NO2-2.0ml; 6: 3+

10、NO2-3.0ml图 2 共振散射光谱（略）22 酸度的影响按照实验方法改变盐酸的加入量。结果表明，当盐酸的用 量为 Oml时，体系的共振散射光最强，且稳定性、重现性良好。因此，实验过 程中不直接加入盐酸，体系的酸性环境由 N,N 二甲基苯胺溶液中的酸提供。23 乙酸钠用量的影响 按照实验方法改变乙酸钠的加入量。结果表明，乙 酸钠用量为 14ml 时体系的共振散射光强度有最大值，故选用乙酸钠用量为 14ml。24 磺胺用量的影响 按照实验方法改变磺胺的加入量。结果表明，磺胺的 用量为30ml 时体系的共振散射光强度较大且重现性好。 因此， 实验选用磺胺的 加入量为 30ml。25 偶联试剂 N

11、,N 二甲基苯胺用量的影响 按照实验方法改变 N,N 二甲基苯 胺的加入量。结果表明，N, N 二甲基苯胺用量在 30ml 时体系的共振散射光强 度最大且稳定，本实验选用 N, N 二甲基苯胺的用量为 30ml。26 重氮化反应时间的影响 按实验方法改变重氮化反应时间进行测定。结 果表明，重氮化反应时间为 15min 时共振散射光强度最大。本实验选择重氮化 的反应时间为15mi n。27 偶联产物的稳定性 实验发现，偶联产物的共振散射光强度在10min 内达到稳定并在 70min 之内保持不变，在 24h 之内基本不变，即产物的共振散射 光强度稳定。实验选择静置时间为 25mi n。28 工作

12、曲线的绘制按照实验方法改变亚硝酸根的加入量，测其共振散射 光强度。结果表明，10 卩 g/ml 亚硝酸根的加入量在 03.0ml（012X10-3g/L） 时，线性关系良好。用最小二乘法进行回归，求得回归方程为：A=-26007+0707C（卩 g/L）回归系数为：R=09983 按 12 次空白实验的标准偏差的 3 倍除以工作曲线的斜率，得到方法的检出限为 80X10-5g/L029 共存离子的影响 按照实验方法，当亚硝酸根含量为 10 卩 g/25ml，相对 误差w10%时，对 23 种常见离子进行了干扰实验。实验发现，各种离子允许 共存的倍数为 K+，Ca2+，NO3-，Mg2+ Ba2

13、+，Br-,S042-500 倍；Sn2+, F-， PO43-200 倍；Ni2+、Se2+100 倍；Ge4+20（咅；Cu2+ Fe2+，I-，S2O32-10 倍；Zn2+,Ag+, Co2+，A13+，Hg2+, Mn2+5 咅。01mol/L 的酒石酸钠 10ml，可掩蔽 100 倍的 Co2+ 50 倍的Hg2+和 Mn2+ 20 倍的 Cu2+ 01mol/L 的柠檬酸三钠 10ml，可使 Zn2+允许共存的倍数提高到 100 倍。210 样品分析结果对白菜、土豆样品进行测定，测得白菜、土豆样中亚硝 酸根的含量分别为 36.7 和 7.3 卩 g/g，加标回收实验测得回收率为

14、985%和 928%o3 小结该方法简单，灵敏度高，选择性好，可用于蔬菜中亚硝酸根含量的测定， 回收率为 92.8%98.5%。参考文献1Adnan Aydin,Ozgen Ercan,Sulin Tascioglu.A novel method for thespectrophotometric determ in ati on of nitrite in waterJ.Talanta,2005 ，66(5) : 1181-1186.2董存智，秦利鸿.蔬菜中痕量亚硝酸根催化荧光光度法测定J.中 国公共卫生,2005,21(11) : 1400-1401.3Nikolaos Karousos ，Lok Cee Chong，Caroline Ewen,et al.eva luati on ofmultifu nctional in dicator for the electroa nalytical determ in ation of nitrite J.Electrochimica Acta,2005,50(9): 18791884.4施家威，颜金良.离子色谱法快速测定食品中的硝酸盐、亚硝酸盐J.中国卫生检验