血清尿素测定

1、【目的】学习血清尿素(Urea)测定方法,了解其意义.【原理】血清尿素(Urea )是蛋白质的正常代谢产物.它的测定是常用的衡量肾小球功能的指标之一.肾性血清尿素含量增加, 提示肾小球损伤.是研究药物肾毒性的重要指标之一.【器材】兔固定架、注射器、烧杯、可见分光光度计、试管、水浴【药品】0.5%氯化高汞溶液、生理盐水【动物】家兔2只【方法】取家兔 2只,1只注射氯化高汞 5ml/kg (0.5%氯化高汞溶液1.0ml/kg),另1只注射等量的生理盐水.48小时后,从家兔耳静脉取血1ml ,制取血清,按血清尿素测定方法测定血清尿素含量.【结果】记录2只家兔血清尿素含量,比拟并分析其差异.附血清尿

2、素(Urea)测定方法【原理】尿素与二乙酰在酸性反响环境中加热,缩合生成色素原二嗪化合物.因二乙酰不稳定,不宜直接参加,可由化学反响生成. 通常由反响系统中二乙酰一的与强酸作用,产生乙 二酰.二乙酰和尿素反响,缩合生成红色的二嗪.根据颜色深浅确定尿素含量的多少.【试剂】 酸性试剂：在三角烧瓶中加蒸储水约100ml ,然后参加浓硫酸 44ml及85%磷酸66ml .冷至室温,参加硫氨月尿 50mg 及硫酸镉(CdSO4 8H2O)2g .溶解后用蒸储水稀释至1L ,置棕色瓶中冰箱保存,可稳定 6个月.(2)二乙酰-的溶液：称取二乙酰-曲20g ,加蒸储水约900ml ,溶解后,再用蒸储水稀释 至

3、1L ,置棕色瓶中,贮放冰箱内可保存半年.尿素标准贮存液(100mmol/L):称取枯燥纯尿素(MW=60.06)0.6g,溶解于蒸储水中,并稀释至100ml ,加0.1g叠氮钠防腐,置冰箱内可稳定半年.(4)尿素标准?应用液(5mmol/L):取5.0ml贮存液用无氨蒸储水稀释至100ml.【操作】按表T4-1 进行混匀后,置沸水中加热12分钟,置冷水中冷却5分钟后,用分光光度计在波长 540nm 以空白管调至零点.比色读取标准管及测定管的吸光度.【计算】【正常参考值】2.868.20mmol/L 尿素【考前须知】1 .本法线性范围达 14 mmol/L 尿素,如遇高于此浓度的标本必须用生理

4、盐水作适当的 稀释后重测,然后乘以稀释倍数报告之.2 .试剂中参加硫氨月尿和镉离子,增进显色强度和色泽稳定性,但仍有轻度退色现象(每小时小于5%).加热显色冷却后应及时比色.3 .吸管必须校正,使用时务必注意清洁干净,加量务必准确.4 .世界卫生组织推荐用mmol/L 尿素表示浓度,不再使用尿素氮一词.5 .血清尿素增高的病理因素常见于肾脏原因,肾脏原因又可分为肾性、肾前或肾后：肾 性：急性肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎都可见血液中尿素含量增高.肾前或肾后：引起尿量显著减少或尿闭,如脱水、水肿、腹水、循环功能衰竭、尿路结石或前列腺肿大引起的尿路梗阻等均可引起血清尿素

5、含量升高.此外,生理因素也可导致血清尿素增高.如体内蛋白质分解过多：急性传染病、上消化道出血、大面积烧伤、 大手术后和甲状腺功能抗进等.虽然血清尿素增高,此时其它肾功能试验结果一般均正常.注：本法引自中华人民共和国卫生部医政司编著的?全国临床检验操作规程?尿素的测定方法可分为两大类：一类直接法,尿素直接和某试剂作用, 测定其产物,最常见的为二乙酰一的法；另一类是 尿素酶法,用尿 素酶将尿素变成氨,然后用不同的方法测定 氨.1尿素酶法直接法：尿素酶法利用尿素酶催化尿素水解生成俊盐,俊盐可用纳氏试剂 直接显色、酚-次氯酸盐显色或酶偶联反 应显色.尿素测定目前多采用尿素酶偶联法：用尿素酶分解尿素产生

6、氨,氨在谷氨酸脱氢酶的作用下使 NADH氧化为NAD+时,通过34 0nm吸光度的降低值可计算出尿素含量.此反响是目前自动生化分析仪上常用的测定原理.此外,尿素酶水解尿素产生氨的速率,也可用电导的方法进行测定,其电导的增加 与氨离子浓度有关,反响只需要很短的时间,适用于自动分析仪.2酚-次氯酸盐显色法：尿素酶水解尿素生成氨和酚及次氯酸盐,在碱性环境中作用形成对-醍氯亚胺,亚硝基铁氧化钠催化此反 应：又醍氯亚胺同另一分子的酚作用,形成 口引味酚,它在碱性溶液中产生蓝色的解离型 口引味酚:此反响敏感,血清用量少10 口,无需蛋白沉淀,一般用于手工操作测定中.3纳氏试剂 显色法:尿素经尿素酶作用后生

7、成氨,氨可与纳氏试剂HgI2.2KI的强碱溶液作用,生成棕黄色的碘化双汞俊.尿素酶法的优点是反响专一,特异性强,不受尿素类似物的影响,缺点是操作费时,且受体液中氨的影响.二乙酰一曲法直接法：尿素可与二乙酰作用,在强酸加热的条件下,生成粉红色的二 嗪化合物Fearom反响,在54 0nm比色,其颜色强度与尿素含量成正比.二乙酰不稳 定,用二乙酰一曲代替, 后者遇酸水解成二乙酰.试剂中参加Fe3+或Cd2+及硫氨月尿,可提升灵敏度,增加显色稳定性,其中 Fe3+和Cd2+有氧化作用,还能消除生的干扰作 用.提升酸的浓度可增加灵敏度.二乙酰一的与尿素的反响不是专一的,与瓜氨酸也有显色.本法灵敏、简单,产生的颜色稳定,缺点是加热时有异味释放,一般临床已很少使用此方法.尿素测定用血清或血浆,体液中尿素的浓度常用尿素中含有的氮来表示,称为尿素