乌鸡家鸡血清测定-结题报告

1、血清成分分析 陈佳丽 潘茜茜 林艳青 指导老师：张旭老师 2012-12-29目录 1血清胆固醇的测定 2血清清蛋白-球蛋白的分离与鉴定 3谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定 http:/ http:/ 邻苯二甲醛试剂，邻苯二甲醛试剂，90%醋酸，混合酸，标准胆固醇贮液醋酸，混合酸，标准胆固醇贮液（1mg/mL），标准胆固醇应用液（），标准胆固醇应用液（0.1mg/mL）实验步骤1 取清洁干燥试管5支，编号，按表格加入试剂。2 加毕，混匀，静置10min，以550nm波长比色测定，以吸光度值为纵坐标，胆固醇含量为横坐标，做标准曲线。本 1 取3支清洁干燥试管，编号后，按表格加入试剂。2 加毕

2、，混匀，静置10min，于550nm波长比色，以对照管校零点，对照标准曲线即知100mL样品中总胆固醇含量（mg）。本绘制表格记录标准曲线及样品各试剂吸光值。绘制标准曲线，在曲线上描出与样品吸光值对应的胆固醇含量。实验结果对照标准曲线可得：家鸡血清对照标准曲线可得：家鸡血清550nm处的光波吸收值为处的光波吸收值为 0.130 。100ml家鸡血清中胆固醇的含量为家鸡血清中胆固醇的含量为75mg。根据参考资料鸡的血清胆固醇的含量在根据参考资料鸡的血清胆固醇的含量在51-196mg/100ml之间是在之间是在可信范围内可信范围内1。所以本实验测得家鸡血清胆固醇含量。所以本实验测得家鸡血清胆固醇含

3、量75mg/100ml是在可信范围内。是在可信范围内。实验分析 返回返回目录 1血清清蛋白与血清清蛋白与-球蛋白的盐析球蛋白的盐析 2蛋白质透析与浓缩蛋白质透析与浓缩 3凝胶层析的实验凝胶层析的实验 4醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳实验原理血清清蛋白与血清清蛋白与-球蛋白的盐析球蛋白的盐析 血清中含有清蛋白和各种球蛋白（血清中含有清蛋白和各种球蛋白（-球蛋白等），由球蛋白等），由于它们所带电荷不同、相对分子质量不同，在高浓度盐溶于它们所带电荷不同、相对分子质量不同，在高浓度盐溶液中的溶解度不同，因此可利用它们在中性盐溶液中溶解液中的溶解度不同，因此可利用它们在中性盐溶液中溶解度的差异而进

4、行沉淀分离，此法称为盐析法。度的差异而进行沉淀分离，此法称为盐析法。实验材料血清：一管为家鸡血清，一管为乌骨鸡血清血清：一管为家鸡血清，一管为乌骨鸡血清 PBS （NH4）2SO4溶液溶液 双缩脲试剂双缩脲试剂 酪蛋白酪蛋白 蔗糖蔗糖 BaCl2溶液溶液 实验步骤血清清蛋白与血清清蛋白与-球蛋白的盐析球蛋白的盐析 返回返回实验原理蛋白质透析与浓缩蛋白质透析与浓缩 1.透析是利用蛋白质等生物大分子不能通过半透膜的性质透析是利用蛋白质等生物大分子不能通过半透膜的性质的一类纯化方法的一类纯化方法,可利用该方法分离大分子和小分子混合物可利用该方法分离大分子和小分子混合物.2.由于由于NH4+和和SO4

5、 2+可以通过半透膜，二血清清蛋白不能，因可以通过半透膜，二血清清蛋白不能，因此，可以利用透析的方法是清蛋白溶液脱盐。此，可以利用透析的方法是清蛋白溶液脱盐。3.将盛有待浓缩饿将盛有待浓缩饿 大分子溶液的透析袋放入高浓度的吸水性强的大分子溶液的透析袋放入高浓度的吸水性强的蔗糖固体颗粒中，袋内溶液中的水杯蔗糖固体颗粒中，袋内溶液中的水杯 袋外的袋外的 多聚物所吸收而有多聚物所吸收而有效地浓缩。效地浓缩。实验材料透析袋、蔗糖固体颗粒透析袋、蔗糖固体颗粒实验步骤蛋白质透析与浓缩的实验步骤 1. 取玻璃纸（15cm15cm）两张，折成袋状。将前面第一次盐析得到的含有清蛋白的上清液和-球蛋白分别倒入两个

6、透析袋中，用线绳系紧上口。 2. 用玻璃棒悬挂在盛有半杯蒸馏水的100mL烧杯中，使透析袋下半部浸入水中，流水透析1h。3. 将两透析袋取出，埋入蔗糖中浓缩 返回返回实验步骤凝胶层析的实验步骤实验结果凝胶层析凝胶层析重铬酸钾蓝葡聚糖实验结果洗脱曲线实验分析 返回返回实验原理醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳 醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳 是以醋酸纤维素薄膜作为支持物的电是以醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法泳方法实验材料醋酸纤维素薄膜、电泳槽醋酸纤维素薄膜、电泳槽实验步骤醋酸纤维素薄膜电泳的实验步骤实验结果实验分析 返回返回实验原理纸层析法底物谷氨酸的减少和产物丙氨酸的生成。丙酮酸与

7、2，4-二硝基苯肼作用生成2，4-二硝基苯腙。此物质在碱性条件下呈棕红色，其颜色的深浅与丙酮酸的含量成正比。实验材料血清：一管为家鸡血清，一管为乌骨鸡血清 1% 谷氨酸溶液，1% 丙酮酸钠溶液，0.1% KHCO3溶液 0.025% 溴乙酸溶液，2% 乙酸溶液 ，0.1% 水合茚三酮的正丁醇溶液 ，0.1% 标准谷氨酸溶液，0.1% 标准丙氨酸溶液 ，1/15 mol/L pH=7.4的磷酸缓冲液，GPT基质液 ，1mmol/L 2，4-二硝基苯0.4mol/LNaOH溶液实验步骤1 取清洁干燥试管5支，编号，按要求试剂。2 加毕，混匀，置于37水浴静置10min，再加入2，4-二硝基苯肼0.

8、5ml加毕，混匀，置于37水浴静置20min，再加5mlNaOH加毕，混匀，静置10min.以520nm波长比色测定，以吸光度值为纵坐标，酶活力单位为横坐标，做标准曲线。 1 取清洁干燥试管3支，编号，按要求试剂。2 加毕，混匀，置于37水浴静置10min，再加入2，4-二硝基苯肼0.5ml加毕，混匀，置于37水浴静置20min，再按要求加试剂，加毕，混匀，静置10min.以520nm波长比色测定，以吸光度值为纵坐标，酶活力单位为横坐标，做标准曲线。绘制表格记录标准曲线及样品各试剂吸光值。绘制标准曲线，在曲线上描出与样品吸光值对应的酶活力单位。实验结果家鸡血清家鸡血清550nm处的光波吸收值为处的光波吸收值为 0.026。乌鸡血清乌鸡血清550nm处的光波吸收值为处的光波吸收值为 0.150.对照标准曲线可得对照标准