注射用水质量检查

1、药品生产中注射用水的质量检测摘要：目的 考察注射用水作为药品生产特别是生物制品生产中的主要溶剂的质量。方法 按 2005年版中国药典(二部) 収载的注射用水检测项目及企业内控标准进行相关检查。结果 对某企业注射用水系统 1#用水点的注射用水的质量进行检测，注射用水的质量符合要求。结论 某企业生产的 1#用水点的注射用水是合格的，可以用于药品生产。关键词： 注射用水，药品生产，质量控制，内毒素，微生物 英文题目Abstract: Objective To investigate the production of water for injection drugs, especially as

2、the production of biological products, the quality of the main solvent. Methods according to the 2005 version of "Chinese Pharmacopoeia (2)" collection of water for injection containing the test items and corporate internal control standards and relevant examination. The results the water

3、injection system of an enterprise # 1 water point for testing the quality of water for injection, injection of water quality to meet the requirements.Conclusion The production of a water point # 1 is qualified water for injection, can be used for pharmaceutical production.Key Word: water for injecti

4、on, pharmaceutical manufacture, quality contro，l endotoxin ,microbe1概述 药品生产工艺中使用的水主要包括饮用水、纯化水、注射用水、无菌注射用水。其中注射用水(Water For Injecti on,WFI)指用于溶解或稀释注射用的药物或制剂，或者用于制备无菌的注射用水的水。在 2005版药典中规定为纯化水经蒸馏所得的水， 欧洲和美国药典则要求至少由饮用水制备。 而药典规定，纯化水为经蒸馏法、 离子交换法、反渗透法或其他适宜方法制得的供药用水， 不含任 何附加剂， 故注射用水又被称为重蒸馏水。 注射用水必须在防止内毒素产生的设

5、计条件下生产、 贮 藏及分装。其质量应符合药典二部注射用水项下的规定。注射用水是制药行业中一种被广泛使用的物料，一般可作为配制注射剂的溶剂或稀释剂及注 射用容器的精洗， 也可作为滴眼剂配制的溶剂。 因此，注射用水的质量是决定最终药物成品的重要 因素。要保证各用水点的注射用水质量符合规定，就必须保证整个注射用水系统符合质量要求。中 国药典 2000年版规定只能用蒸馏法制备注射用水， 且一般要求至少采用三效以上的蒸馏水机， 2005 版药典中也规定采用蒸馏法为注射用水制备的法定方法。某企业采用的多效蒸馏水机制备注射用 水，整个注射用水系统符合我国 GMP 验证要求。该系统会定期或根据灭菌周期及具体

6、情况进行严 格的消毒灭菌工作，以保证系统随时处于质量标准控制范围内。随着国内众多制药企业对药品生产验证的认识不断加深，注射用水系统的验证也逐渐受到重 视，药品生产质量管理规范实施指南 （2001）也对注射用水质量控制的相关问题做出了明确的验 证指导。本文通过对某制药厂注射用水系统的一个用水点取样进行相关质量检查， 并对注射用水的 质量控制的几个重要因素进行讨论。2试验部分2.1 样品来源 本制药厂多效蒸馏水机制备的注射用水 1#用水点2.2 检验依据 中国药典 2005 年版及企业内控标准2.3 试验材料仪器与器材 PH计（PE20）,电子天平（AB204-S）,电热干燥箱（DL-101-1）

7、 , STV6开放式无 菌检查薄膜滤器（KDCB330），漩涡混合器（XW-90A），恒温仪（TAL-40D），小烧杯，50ml纳氏比色 管，蒸发皿，试管，电炉， 1ml 移液管， 10ml 移液管，具塞量筒，紫外灯2.3.2 试剂 苯二甲酸盐标准缓冲液，磷酸盐标准缓冲液，硝酸，硝酸银试液，氯化钡试液，草 酸铵试液， 10%氯化钾溶液， 0.1%二苯胺硫酸溶液，固体硝酸钾，固体亚硝酸钠，碱性碘化汞钾试 液，稀硫酸，高锰酸钾滴定液（0.02mol/L）标准铅溶液，鲎试剂（批号：0804260,规格：0.25EU/ml, 湛江博康海洋生物有限公司），细菌内毒素工作标准品（批号：080102,规格：

8、15EU/支，湛江博 康海洋生物有限公司），BET水（批号：0903180,规格：50ml/瓶，湛江安度斯生物有限公司），无 菌氯化钠 -蛋白胨缓冲液，胆盐乳糖培养基，2.4 一般试验记录及结果2.4.1 性状检查 取样品 20ml 于小烧杯中， 置于白色背景下观察。 本品为无色澄清液体； 无臭， 无味。结论：符合规定。2.4.2 PH值测定 仪器：PH计（编号JY-039）;检测温度：25C ；定位缓冲液：苯二甲酸盐便准缓冲液PH=4.01;核对缓冲液：磷酸盐标准缓冲液 PH=6.86测定份数12平均酸度（PH）6.286.266.3结论：符合规定氨 取样品50ml，加碱性碘化汞钾试液2ml

9、，放置15分钟，观察无色。【如显色，与氯化 铵溶液（取氯化铵31.5mg，加无氨水适量使溶解并稀释成 1000ml）1.0ml，加无氨水48ml与碱性 碘化汞钾试液2ml制成的对照液比较，不得更深（0.000 02%）。】结论：符合规定氯化物取样品50ml,加硝酸5滴与硝酸银试液1ml,观察，溶液未见浑浊。结论：符合规定硫酸盐 取样品50ml,加氯化钡试液2ml,观察，溶液未见浑浊。结论：符合规定钙盐 取样品50ml,加草酸铵试液2ml,观察，溶液未见浑浊。结论：符合规定硝酸盐 取样品5ml置于试管中，于冰浴中冷却，加 10%氯化钾溶液0.4ml与0.1%二苯胺 硫酸溶液0.1ml，摇匀，缓缓

10、滴加硫酸5ml，摇匀，将试管置于50E水浴中放置15分钟，溶液产 生的蓝色与标准硝酸盐溶液（取硝酸钾0.163g，加水溶解并稀释至100ml,摇匀，精密量取1ml,加 水稀释成100ml,在精密量取10ml,加水稀释成100ml,摇匀，即得（每1ml相当于1卩g NO3 0.3ml, 加无硝酸盐的水4.7ml，用同一方法处理后的颜色比较，观察样品管的颜色，浅于标准管颜色。结论：符合规定亚硝酸盐 取样品10ml，置纳氏比色管中，加对氨基本磺酰胺的稀盐酸溶液（1 100） 1ml 与盐酸萘乙二胺溶液（0.1 100 ml,产生的粉红色，与标准亚硝酸盐溶液取亚硝酸钠0.750g （按 干燥品计算）加

11、水溶解，稀释至100ml,摇匀，精密量取1ml,加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取 1ml,加水稀释成50ml,摇匀，即得（每1ml相当于1卩g） 0.2ml，加无亚硝酸盐的水9.8mI,用同 一方法处理后的颜色比较，观察样品管颜色，浅于标准管颜色。结论：符合规定二氧化碳 取样品25ml,置50ml具塞量筒中，加氢氧化钙试液25ml,密塞振摇，放置，1小 时内未见浑浊。易氧化物 取样品100ml,加稀硫酸10ml,煮沸后，加高锰酸钾滴定液（0.02mol/L） 0.10ml， 再煮沸10min，观察，粉红色未完全消失。结论：符合规定2. 4.11不挥发物 取样品100ml，置105C恒重的

12、蒸发皿中，在水浴上蒸干，并在105C干燥至恒重。记录：恒重蒸发皿重（ml） :97.6327g 蒸发后恒重（m2） :97.6329g计算：遗留残渣=m2-m1=0.2mg结论：符合规定重金属 取样品50ml于纳氏比色管中，加水18.5ml,蒸发至20ml,放冷，加醋酸盐缓冲液（PH3,5） 2ml与水适量使成25ml,加硫代乙酰胺试液2ml,摇匀，放置2min，与标准铅溶液1.5ml 加水18.5ml用同一方法处理后的颜色比较，样品管颜色浅于标准管颜色。结论：符合规定2.5微生物限度检查细菌、霉菌及酵母菌计数2.5.1- 1实验方法：薄膜过滤法；使用仪器：STV6开放式无菌检查薄膜滤器。2.

13、5.1- 2供试液的制备：取样品200ml，作为供试溶液。2.5.1- 3培养条件：细菌在30-35E培养，霉菌、酵母菌在23-28E培养，分别在24h、48h、72h 计数，细菌依48h为准，霉菌、酵母菌依72h为准。培养时间与计数24h48h72h细菌霉菌酵母菌细菌霉菌酵母菌细菌霉菌酵母菌000000000阴性对照细菌一一霉菌一一酵母菌一一结果：细菌、霉菌、酵母菌总数为 0。大肠埃希菌检测2.5.2- 1供试液的制备 取样品10ml,加90mlPH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，摇匀，作为供 试溶液。2.5.2- 2增菌实验 取胆盐乳糖培养基3份，每份100ml,2份分别加入10ml供试

14、品溶液，其中一份加入50-100个对照菌作阳性对照，第3份加入稀释剂作阴性对照，36±C培养18-24小时，必 要时可延长至48小时。2.5.2- 3 MUG试验 取上述3份培养物各0.2ml,分别接种至5mlMUG培养基中，36±C培养， 在5h和24h时取出未接种的MUG作本底对照，在366nm紫外光下观察。结果记录如下：时间样品阴性对照阳性对照本底对照5h-+-24h-+-在上述培养基中加入数滴靛基质试液观察样品-阴性对照-阳性对照+本底对照-女口 MUG阳性、靛基质阳性，判断出检出大肠杆菌；女口MUG阳性、靛基质阴性，或者MUG阴性、靛基质阳性，则应取胆盐乳糖培养物

15、划线接种于曙红亚 甲监琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上，培养18-24h菌落形态是否符合标准规定'若平板上生长的菌落符合标准规定，应进行分离、纯化、染色镜检和生化实验， 确定是否为大肠埃希菌。结果：未检出大肠埃希菌。结论：本品按中国药典2005年版二部检验，结果符合规定2.6细菌内毒素检查试剂名称批号规格来源鲎试剂08042600.25EU/ml湛江博康海洋生物有限公司细菌内毒素工作标准品08010215EU/支湛江博康海洋生物有限公司检杳用水（BET水）090318050ml/瓶湛江安度斯生物有限公司细菌内毒素标准品的制备 取细菌内毒素工作标准品一支，加 BET水1.5ml,于漩

16、涡混合 器上混合15min,再加BET水稀释如下：10EU/ml 1EU/ml 0.5EU/ml每稀释一步均在漩涡混合器上混合 30s，取0.5EU/ml作细菌内毒素标准品阳性对照溶液。供试品溶液的制备 取样品直接试验。每稀释一步均在漩涡混合器上混合30s。264供试品阳性对照溶液的制备取细菌内毒素标准原液10EU/ml,再加供试品溶液稀释如下：10EU/ml 1EU/ml 0.5EU/ml每稀释一步均在漩涡混合器上混合 30s，取0.5 （EU/ml）作供试品阳性对照溶液。检查方法 取装有0.1ml的鲎试剂8支，其中2支分别加入供试品溶液0.1ml作为供试品管；2支加入细菌内毒素检查用水作为

17、阴性对照；2支加入细菌内毒素工作标准品作为阳性对照；2支加入供试品阳性对照液作为供试品阳性对照管，摇匀，37±C的水浴中，（或者其它适宜的恒温仪器中）保温602分钟，依法观察，记录如下：实验条件：保温：37r ；保温时间：1小时阳性对照阴性对照供试品阳性对照供试品结论+ +- -+ +- -符合规定如果供试品中一管为（+）, 管为（-）,则按上述方法另取4支供试品管加倍复 试。结论：本品按企业内控标准检验，结果符合规定2.7试验结果记录品名注射用水取样点1#检验依据中国药典2005年版及企业内控标准检杳项目检验标准检验结果性状应为无色澄清液体，无 臭，无味无色澄清液体，无臭，无 味P

18、H值PH 应为 5.0-7.06.3氨< 0.00002%符合规定氯化物不得浑浊符合规定硫酸盐不得浑浊符合规定钙盐不得浑浊符合规定硝酸盐< 0.000006%符合规定亚硝酸盐< 0.000002%符合规定二氧化碳不得出现浑浊符合规定易氧化物粉红色不得完全消失符合规定不挥发物遗留残渣不得过1mg0.2mg重金属< 0.00003%符合规定微生物限度细菌、霉菌、酵母菌总数不得过10/100ml符合规定大肠埃布困不得检出未检出细菌内毒素每1ml注射用水中内毒素的量应小于0.25EU符合规定3 .结论 某企业的注射用水按中国药典2005年版及企业内控标准检验，结果符合规定4.

19、讨论4.1在实际生产中微生物的检测必不可少， 其标准并不能说明注射用水允许微生物的存在，只是考 虑取样过程可能存在的污染，实际上注射用水应是完全无菌的。4.2注射用水在实际使用中通常是冷却后使用，对冷却后的注射用水的保留时间要做验证。验证 重点在于微生物和内毒素。注射用水系统改建或纯化水系统改建后， 应重新对注射用水进行质量检 测。4.3对注射用水进行热力灭菌时，要求注射用水系统的各个角落均要达到蒸汽的设定温度并保持一 段时间，若疏水器选用不当，冷凝水不能排出，管网中出现多处冷点，该处不能有效灭菌，系统运 转后，可能污染整个系统或使灭菌周期缩短，从而使注射用水的质量检测不合格，。4.4多效蒸馏

20、水机制备注射用水时，可能出现内毒素污染，其原因主要有以下几点：原水水质太 差。多效蒸馏水机去除细菌内毒素的效果是建立在去离子水中的细菌内毒素控制在一定含量的基础 上的，因而如果原水过度受到细菌内毒素的污染， 超出了离子交换树脂吸附细菌的能力， 将有较多 的细菌由料水带入多效蒸馏水机，以致生产出的水尽管电导率合格，却仍会出现细菌内毒素不合格 的情况。解决方法是在多效蒸馏水机之前安装一个超滤器（0.220.45 ym孔径），将料水进行除菌超滤，以减少细菌由料水带入多效蒸馏水机，提高注射用水质量。蒸汽压力过大。 蒸汽压力过大则热量过高，产生过大的二次蒸汽压力，将料水液滴挤过气液分离装置而进入蒸馏水收

21、集管内，影响注射用水质量。在实际中，可通过观察各级效柱上的温度表示值，及时调节多效蒸馏水机蒸汽进 汽压力，以保证质量。料水潴留。此因不仅影响注射用水的产率更影响其质量。控制好合适的料水流量和蒸汽压力可防止料水潴留的发生。 多效蒸馏水机内部蒸馏水管道出现渗漏。 水机内部为 不锈钢管结构， 长期使用后， 由于焊接工艺或金属老化等原因可能出现渗漏。 一旦出现这种情况必 须马上修复或者更换。工作人员操作不当。这种情况也是屡见不鲜。比如开机时，各效柱排污不彻底；关机时，本应该先停止进料水然后再停止进蒸汽， 反之则会出现料水无法正常汽化而混入蒸 馏水的情况。因此应当严格对操作人员的培训，并严格依照操作规程操作设备。4.5 不挥发物是水检测中最不易控制的因素，它主要受检测环境的影响。多次试验结果表明，该项 检测最好在十万级的环境中进行， 这样既能排除环境因素的干扰， 又能保证结果的可靠性及真实性。4.6 在检测硝酸盐时出现过对照不显色或所有检测样品及对照都显色的情况， 主要原因是试验中加 入了硫酸溶液。4.7 在采样时，用于细菌内毒素及微生物限度的检测样品必须用相应的除热原容器及灭菌容器采 集，以保证实验的真实性。5. 参考文献1 . 中华人民共和国药典第二部 .2005,附录， 85-88， 93-101， 134， 303,363.