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1、实验 蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。 熟悉蛋白质的沉淀反应, 进一步熟悉蛋白质的有关反应。二、实验原理 蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用,产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨 基酸不完全相同,颜色反应亦不完全相同。颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物 质也可产生同样的颜色反应,因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。另 外,颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。蛋白质是亲水性胶体,在溶液中的 稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关,但其稳定性是有条件的,相对的。如果条件发生 了变化,破坏了蛋白质的稳定性,蛋白质就会从溶液中沉淀出

2、来。三、实验仪器1 、吸管 2 、滴管 3 、试管 4 、电炉 5 、ph 试纸 6 、水浴锅 7、移液管四、实验试剂1 、卵清蛋白液:鸡蛋清用蒸馏水稀释 10-20 倍, 3-4 层纱布过滤,滤液放在冰箱里冷藏 备用。2 、 0.5% 苯酚: 1g 苯酚加蒸馏水稀释至 200ml 。3 、 millon s 试剂: 40g 汞溶于 60ml 浓硝酸(水浴加温助溶)溶解后,冷却,加二倍体 积的蒸馏水,混匀,取上清夜备用。此试剂可长期保存。4、尿素晶体5、 1%cuso:1g cuso晶体溶于蒸馏水,稀释至 100ml 446、 10%naoh: 10g naoh 溶于蒸馏水,稀释至 100ml

3、7、浓硝酸8、 0.1%茚三酮溶液:0.1g 茚三酮溶于 95%的乙醇并稀释至100ml.9、 冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液:100ml 蒸馏水中加硫酸铵至饱和。12、硫酸铵晶体:用研钵研成碎末。13、 95%乙醇。14、醋酸铅溶液:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、 10%三氯乙酸溶液:10g二氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液:100ml 蒸馏水中加苦味酸至饱和。18 、 1%醋酸溶液。五、实验步骤 蛋白质的颜色反应(一)米伦(millon s)反应1 、苯酚实验:取 0.5%苯酚溶液 1ml 于试管中,加 millon s 试剂

4、0.5ml ,电炉小心加热 观察颜色变化。2 、蛋白质实验:取 2ml 蛋白液,加 millon s 试剂 0.5ml ,出现白色的蛋白质沉淀,小 心加热,观察现象。(二)双缩脲反应1 、取少量尿素晶体放在干燥的试管中,微火加热熔化,至重新结晶时冷却。然后加 10%naoh溶液1ml,摇匀,再加2-4滴1% cuso4溶液,混匀,观察现象。2 、取蛋白液1ml,加10%naoh溶液1ml,摇匀,再加2-4滴1%cuso4溶液,混匀,观察 现象。(三)黄色反应取一支试管,加入 1ml 蛋白液及浓硝酸 5 滴。加热,冷却后注意颜色变化。然后再加入 10% naoh溶液1ml,观察颜色有什么变化。(

5、四)茚三酮反应 取蛋白液 1ml 于试管中,加 4-8 滴茚三酮溶液,加热至沸,即有蓝紫色出现。 蛋白质的沉淀(一)蛋白质的盐析作用1 、试管中加蒸馏水 3ml,加固体硫酸铵至饱和。另一支试管加蛋白液2ml,再加入饱和硫酸铵溶液2ml,摇匀静置观察现象。2 、将上述混合液过滤。 向滤液中逐渐加入少量固体硫酸铵, 直至饱和为止, 此时析出为 清蛋白。再加入少量蒸馏水,观察沉淀是否溶解。(二)有机溶剂沉淀蛋白质试管中加蛋白液1ml,加晶体氯化钠少许,溶解后加95%乙醇3ml,摇匀,观察现象。(三)重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质1 、取试管2支,各加蛋白液2ml,一支管中滴加1%醋酸铅溶液,另一支管

6、中滴加1%硫酸铜溶液,至有沉淀产生。2 、取一支试管加蛋白液 2ml,再加入10%三氯乙酸1ml,充分混匀,观察结果。(四)生物碱试剂沉淀蛋白质取一支试管,加入蛋白液 2ml及醋酸4-5滴,再加饱和苦味酸数滴,观察现象。六、实验结果蛋白质的颜色反应(一)米伦(millon s)反应1 、苯酚实验: 溶液即出现玫瑰红色。2 、蛋白质实验: 出现白色的蛋白质沉淀,小心加热后凝固的蛋白质出现红色。(二)双缩脲反应1 、有紫色出现。2 、溶液有蓝紫色出现(三)黄色反应先有黄色沉淀生成,加入 10%naoh溶液1ml后颜色变为橘黄色。(四)茚三酮反应 有蓝紫色出现。 蛋白质的沉淀(一)蛋白质的盐析作用1

7、 、有蛋白析出。2 、有蛋白质析出,加水后可复溶。(六)有机溶剂沉淀蛋白质取一试管加蛋白液1ml ,,加入晶体氯化钠少许,待溶解后再加95%乙醇3ml,摇匀,观察现象(七)重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质取试管2支,各加蛋白液2ml,一支管中滴加1%醋酸铅溶液,另一支管中滴加 1%硫酸铜 溶液,至有沉淀产生。(八)生物碱试剂沉淀蛋白质取一支试管,加入蛋白液 2ml 及醋酸 4-5 滴,再加饱和苦味酸和鞣酸数滴,观察现象。七、实验分析 蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用,产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨 基酸不完全相同,颜色反应亦不完全相同。篇二:自由沉淀实验报告六、实验数据记录与整理1

8、、实验数据记录沉降柱直径 水样来源 柱高 静置沉淀时间 /min表面皿表面皿编号 质量 /g表面皿 和悬浮物总质量 /g 水样中悬浮物质量 /g 水样体积 /ml悬浮物沉降柱浓度/工作水(g/ml )深/mm 颗粒沉沉淀效速/ 率 / ( mm/s)残余颗 粒百分比 /0 5 10 20 30 60 1200 1 2 3 4 5 679.0438 80.7412 1.6974 81.7603 83.2075 1.4472 64.1890 65.4972 1.3082 66.116267.3286 1.2124 73.7895 74.9385 1.1490 83.4782 84.6290 1.1

9、508 75.0332 76.1573 1.1241 31.0 30.0 30.0 30.0 30.0 31.0 31.00.0548 0.0482 0.0436 0.0404 0.0383 0.0371 0.0363846.0 808.0 780.0 724.0 664.0 500.0 361.01.860 0.883 0.395 0.230 0.069 0.11.40 20.44 26.28 30.11 32.30 33.76100 87.96 79.56 73.72 69.89 67.70 66.242 、实验数据整理(2)绘制沉淀曲线: e-t 、 e-u 、uipi 曲线如下: 2-

10、1 、绘制去除率与沉淀时间的曲 线如下:图 2.2 :沉淀时间 t 与沉淀效率 e 的关系曲线2-2 、绘制去除率与沉淀速度的曲线如下:图22 :颗粒沉速u与沉淀效率e的关系曲线2-3 、绘制去除率与沉淀速度的曲线如下:(1)选择 t=60min 时刻: (大家注意哦!这部分手写的,不要直接打印! ) 水样中悬浮 物质量 =表面皿和悬浮物总质量 -表面皿质量 , 如表格所示。 原水悬浮物的浓度: c0?水样中悬浮物质量 1.6974 ?0.0548g/ml水样体积 31.0 悬浮物的浓度: c5? 水样中悬浮物质量 1.1508?0.0371g/ml 水样体积 31.0沉淀速率: u?h?10

11、 ( 500-250)?0.069mm/sti?6060?60c0-c50.0548-0.0371?100%?100%?32.30 c00.0548c50.0371?100%?100%?67.70 c00.0548沉淀效率 :e5?残余颗粒百分比p5?篇三:混凝沉淀实验报告实验名称:混凝沉淀实验一、实验目的1 、通过实验观察混凝现象、加深对混凝沉淀理论的理解;2 、掌握确定最佳投药量的方法,选择和确定最佳混凝工艺条件;3 、了解影响混凝条件的相关因数。二、实验原理1. 混凝作用原理 包括三部分: 1)压缩双电层作用; 2)吸附架桥作用; 3)网捕作用。 这三种混凝机理在水处理过程中不是各自孤立

12、的现象,而往往是同时存在的,只不过随不同 的药剂种类、投加量和水质条件而发挥作用程度不同,以某一种作用机理为主。对高分子混 凝剂来说,主要以吸附架桥机理为主。而无机的金属盐混凝剂则三种作用同时存在。胶体表面的电荷值常用电动电位E表示,又称为zeta电位。 一般天然水中的胶体颗粒的 zeta 电位约在 -30mv 以上,投加混凝剂之后,只要该电位降到-15mv 左右即可得到较好的混凝效果。相反,当电位降到零,往往不是最佳混凝状态。因为水中的胶体颗粒主要是带负 电的粘土颗粒。胶体间存在着静电斥力,胶粒的布朗运动,胶粒表面的水化作用,使胶粒具 有分散稳定性,三者中以静电斥力影响最大,若向水中投加混凝

13、剂能提供大量的正离子,能 加速胶体的凝结和沉降。2. 混凝剂 向水中投加的能使水中胶体颗粒脱稳的高价电解质, 称之为“混凝剂”。混 凝剂可分为无机盐混凝剂和高分子混凝剂。水处理中常用的混凝剂有:三氯化铁、硫酸铝、聚合氯化铝(简称pac)、聚丙烯酰胺等。本实验使用pac,它是介于alcl3 和al(oh)3 之间 的一种水溶性无机高分子聚合物,化学通式为 al2(oh)ncl(6-n)m 其中m代表聚合程度,n 表示 pac 产品的中性程度。3. 投药量单位体积水中投加的混凝剂量称为“投药量”,单位为mg/l。混凝剂的投加量除与混凝剂品种有关外,还与原水的水质有关。当投加的混凝剂量过小时,高价电

14、解质对 胶体颗粒的电荷斥力改变不大, 胶体难以脱稳, 混凝效果不明显; 当投加的混凝剂量过大时, 则高价反离子过多,胶体颗粒会吸附过多的反离子而使胶体改变电性,从而使胶体粒子重新 稳定。因此混凝剂的投加量有一个最佳值,其大小需要通过试验确定。4. 影响混凝作用的因素投药量、水中胶体颗粒的浓度、水温、水的ph值等。5. 浊度仪 浊度是表现水中悬浮物对光线透过时所发生的阻碍程度。水中含有泥土、 粉尘、微细有机物、浮游动物和其他微生物等悬浮物和胶体物都可使水中呈现浊度。浊度仪采用 90散射光原理。由光源发出的平行光束通过溶液时,一部分被吸收和散射,另一部分透 过溶液。与入射光成 90方向的散射光强

15、度符合雷莱公式,在入射光恒定条件下,在一定浊度围,散射光强度与溶液的混浊度成 正比。因此,我们可以通过测量水样中微粒的散射光强度来测量水样的浊度。三、实验仪器和试剂1. 仪器(1)浊度仪一台( sgz-2 数显浊度仪,悦丰仪器仪表)(2)混凝试验搅拌仪( my3000-6 普通型混凝试验搅拌仪,潜江梅宁仪器)(3)电子天平(赛多利斯科学仪器, )(4)沉淀桶( 600ml 烧杯) 6 个;(5) 100ml 取样瓶 6 个;(6)乳胶管或塑料软管(直 径 58mm) 1520cm;(7) 100ml 烧杯 1 个;( 8) 100ml 量筒 1 个;(9) 500ml 量 筒 1 个;( 10

16、) 10ml 量筒 1 个;2. 实验试剂 混凝剂:聚合氯化铝 pac ; 原水(制备工作已由实验员完成) ;自来水四、实验步骤1 ) 制备原水:事先用高岭土配制浊度为50 ntu 左右的浑水,静沉 1 天以上,取上清液备用。(已由实验员完成)2 ) 用电子天平称取混凝剂( pac) 3g 溶于 1l 自来水中,浓度为 3g/l 。3 ) 取 600ml 原水倒入与搅拌仪配套的沉淀桶中。共六个沉淀桶。4 ) 根据原水体积,按照投加量 80、120、160、200、 300、400mg/l 计算加药量,并换 算成混凝剂溶液的体积量。换算后,混凝剂溶液的体积分别为:16、 24、32、40、60、

17、80ml。5 ) 设置搅拌仪程序:(1)转速 400转/分,搅拌 1.5 min ;(2)转速 150转/分,继续搅拌 5 min ;(3)转速 60 转/分,继续搅拌 5 min ;( 4)转速 0转/分钟,沉淀 15min6 ) 用量筒量取步骤( 3)计算的混凝剂量,快速加入沉淀桶中。贴好标签,将六个沉淀 桶放置在搅拌仪上。7 ) 开启搅拌仪,按照设定程序运行。 (注意观察各个沉淀桶的絮凝沉淀情况)8 ) 程序结束后, 打开沉淀桶的小阀门, 取每个沉淀桶中上清液 50100ml 于清洗好的试 管中。9 ) 用浊度仪测定上清液浊度并进行记录(速度要快;使用前要调零;待浊度仪示数较 稳定时读数

18、)五、实验结果记录及处理 表. 不同加药量溶液的浊度 加药量mg/lpac 溶液体积 /ml 浊度 /ntu 8.23 3.30 2.20 以投药量为横坐标,上清液浊度为纵坐标绘制不同混凝剂混凝沉淀图,从图中求出最低 浊度时混凝的投加量。2.43 4.70 110.00 16 24 32 40 60 80 80 120 160 200 300 400 图. 不同混凝剂混凝沉淀图 从以上作图结果可以看出,以四次方的多项式拟合效果较好( r=1 ),当溶液的浊度达到 最低点时对应的投药量约为 255mg/l ,即该原水的最佳投药量为 255mg/l 。 2六、结果与讨论1. 实验时,在搅拌过程中发

19、现不同沉淀桶中呈现的颜色深浅不一,形成的絮状颗粒大小 也不同。这说明,不同加药量会对混凝效果产生不同影响。2. 实验中, 600ml 原水未用量筒进行量取,而是直接根据沉淀桶上的刻度进行添加。沉 淀桶上的刻度相对不精确,对实验结果会产生一定的影响。3. 测定上清液的浊度时,发现若是测定速度较慢,不同溶液的沉淀时间就不平行。较晚 测定的溶液沉淀时间较长,这对实验结果的准确度也会造成影响。4. 测定浊度时发现浊度仪的示数不稳定,波动较大。造成该结果的原因可能是由于静置 沉淀的时间不够长,溶液中的颗粒还处于较为剧烈的运动状态,这样测得光源被散射的散射 光强度就会有较大变化,导致浊度仪示数不稳定。5.

20、 对实验数据进行处理时,发现可以使用不同次幂的多项式对实验结果进行拟合。本实 验用四次幂或五次幂的多项式进行拟合时, r 都等于 1。而用三次幂的多项式进行拟合的r则等于 0.9999 。根据观察拟合曲线的情况,选择以四次幂多项式拟合。最佳投药量是根据曲 线进行估计的,并未进行精确地计算。这样得出的结果可能会存在一定的偏差。 22 六、思考题1. 选择混凝剂种类及确定其投加量时应考虑哪些因素? 混凝剂的选择主要取决于胶体和细微悬浮物的性质和浓度。如水中污染物主要呈胶体状 态且电位较高则营先投加无机混凝剂使其脱稳凝聚;如絮体细小,还需投加高分子混凝剂或 配合使用活性硅酸等助凝剂。 同时,用于水处

21、理的混凝剂要求混凝效果好, 对人类健康无害, 价廉易得,使用方便。对于混凝剂投加量的确定,主要考虑水中微粒种类、性质和浓度以及 混凝剂品种、投加方式、介质条件等。对任何废水的混凝处理,都存在最佳混凝剂和最佳投 药量的问题,应通过试验确定。2. 混凝操作过程中应注意哪些问题?1 )取原水时要搅拌均匀,要一次量取以尽量减少所取原水浓度上的差别。2 )混凝包括混合与凝聚, 混合过程 (即混凝剂刚加入水中的混合过程) 要求快速避免因 时间间隔较长各水样加药后反应时间长短相差太大而导致混凝效果悬殊。之后则要不断减慢 速度,使脱稳胶体粒子相互凝聚。混合过程大约要在 12 分钟完成,而凝聚过程则大约需要 2

22、030分钟,沉淀过程则大约需要 1 个小时。试验室烧杯试验可适当缩短试验时间。3 )混凝过程要保持搅拌仪不被人为扰动, 防止对混凝结果产生影响。 篇四: 实验二报告 中医药大学生物化学实验报告实验二蛋白质的呈色反应,沉淀反应姓 名:王家伟同 组:汤殷飞日 期:2011/9/26学 号:0901222班 级:室 温:教 师:09 针外实验室:成 绩:实验室二连起一 实验目的1 了解蛋白质的性质。 2 掌握蛋白质的鉴定方法。二 实验容1 蛋白质的呈色反应。 2 蛋白质的沉淀反应。三 实验原理及操作(一)蛋白质的呈色反应 蛋白质的呈色反应是蛋白质中某些氨基酸特殊基团与一定的化学试剂作用而呈现的各种

23、颜色反应,可作为检查蛋白质是否存在的参考。另外,不同的蛋白质中氨基酸的种类及含量 各不相同,而在某些蛋白质还可能缺乏呈某种颜色反应的氨基酸。因此不但不同蛋白质呈色 反应的强度不同,而且某些呈色反应在某种蛋白质可能不存在。本实验操作两种呈色反应: 双缩脲反应与茚三酮反应,用以比较和鉴别不同的蛋白质。 1 双缩脲反应 【实验原理】在浓碱液中,双缩脲能与硫酸铜结合生成紫色或紫红色的复合物,这一呈色反应为双缩 脲反应,凡含有两个及多个肽键(酰胺键)的化合物都可能发生此反应,故蛋白质及二肽以 上的物质都有此反应,但除肽键外,有些基团如一csnhc (nh2) nh等也有双缩脲反应,因此,一切蛋白质或多肽

24、都有双缩脲反应, 但有双缩脲反应的不一定都是蛋白质或多肽。 【操作】(1)取小试管一支,加1: 10鸡蛋白液2滴,10%naoh溶液5滴及1%硫酸铜溶液1 滴,混匀,可见 溶液呈紫色。( 2) 另取一小试管, 加一小匙尿素 (绿豆大小) ,小火加热至熔, 嗅其气味为 (臭味)。继续加热使之凝固,这固体是(双缩脲),加水10滴,10%naoh溶液5滴,1%硫酸铜溶液 1 滴,可见 溶液变成紫红色。2 茚三酮反应 【实验原理】凡含有自由氨基的化合物例如蛋白质,多肽,各种氨基酸(脯氨酸和羟脯氨酸例外)和 其它伯胺化合物 (包括氨) 与茚三酮共热时, 能生成紫蓝色化合物, 这种反应即茚三酮反应。 【操

25、作】注意:用酒精灯加热时,酒精灯不要随便移动,加热试管口不能对着人,不能用吹气的 方式熄灭酒精灯,以免出现危险情况。当维持蛋白质胶体溶液的稳定因素(水化膜和电荷)遭到破坏时,蛋白质析出。如果是 非变性沉淀,例如加入中性盐或者在低温下加入有机溶剂脱水,则除去沉淀剂后,蛋白质仍 可溶解, 此即可逆的沉淀反应。 如果是变性沉淀, 例如加入重金属盐类, 生物碱试剂或加热, 则沉淀剂不易除去, 沉淀常不能再溶解, 此即不可逆的沉淀反应。 1. 蛋白质的盐析 【实验 原理】水溶液中的蛋白质在高浓度的中性盐 硫酸铵,硫酸镁,氯化钠等 中析出的现象,称为 盐析作用。 盐析作用包括两种过程: 1)大量电解质破坏

26、了蛋白质的水化膜从而出现沉淀。 2) 电解质中和了蛋白质分子所带的电荷而沉淀。中性盐能否沉淀各种蛋白质常决定于中性盐的浓度,蛋白质的种类,溶液的ph值以及蛋白质的胶体颗粒。 颗粒大者比颗粒小者容易沉淀, 如球蛋白多在半饱和的硫酸铵溶液中析出, 而清蛋白常在饱和的硫酸铵溶液中析出。 【操作】(1) 取5ml鸡蛋白溶液于试管中,加入等量饱和硫酸铵溶液,混匀,静置20分钟后, 观察现象是 溶液中有白色沉淀析出。(2)过滤,收集透明滤液,滤液中会有清蛋白,若溶液混浊,须重复过滤至透明为止。(3)取 1ml 滤液加固体硫酸铵( 0.5g )使达到饱和,边加边振摇到溶液出现混浊, 再向混浊液加 1.5-2

27、.0ml 水, 观察现象是 溶液中沉淀逐渐溶解2 重金属盐类沉淀蛋白质 【实验原理】蛋白质在碱性溶液中带有较多负电荷,当它与带正电荷的重金属离子结合时即可生成不溶解的沉淀,重金属盐类沉淀蛋白质能引起蛋白质的变性,而中性盐类即使加入量很多也不 改变蛋白质原来的性质。 【操作】【实验原理】 由于温度升高破坏了蛋白质分子部的化学键,引起蛋白质变性,因此几乎所有蛋白质都 可因加热而凝固。蛋白质在其等电点时不带电荷, 或带等量的正负电荷, 此时若温度升高则容易出现沉淀。 在酸性或碱性溶液中,蛋白质分子带有正或负电荷,较为稳定。如果过酸或过碱则易变性, 此时若温度升高, 虽变性却不沉淀。 在冷却后加酸或加

28、碱调节 ph 值达蛋白质等电点时则有沉 淀析出。 【操作】(1)取 4 支试管,编号,按下表加入试剂(2)取出试管,冷却后于第 3管中慢慢滴入 10%naoh 溶液,观察现象是溶液先变浑浊, 然后浑浊慢慢溶解, 其原因是 加入碱溶液后使得溶液 ph 值达到蛋白质的等电点, 所以有沉 淀析出,加入过量的碱溶液使溶液偏离等电点,沉淀溶解。(3)向第 4 管中慢慢滴入 10%醋酸,观察现象为 溶液先变浑浊,然后浑浊慢慢溶解, 其原因是 加入酸溶液后使得溶液 ph 值达到蛋白质的等电点,所以有沉淀析出,加入过量的 酸溶液使溶液偏离等电点,沉淀溶解。 四实验材料(一)试剂1 1:10 鸡蛋白溶液 2 10%naoh 3 1%硫酸铜 4 尿素 5 01%茚三酮 乙醇液 6 025%丙氨酸溶液 7 饱和硫酸铵溶液 8 固体硫酸铵 9 05%naoh 1005%硫酸锌 11 10%磺基水酸 12 10%hcl 13 1%hac 14 10%hac(二)仪器水浴锅( 100 摄氏度)(

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