新型芳唑巯乙酰胺类HIV

1、新型芳唑(嗪)巯乙酰胺类 HIV-1 NNRTI的设计、合成与活性研 究艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)的主要病原体是人免 疫缺陷病毒 1 型(Human Immu nodeficie ncy Virus type 1, HIV-1) 。自从 1981 年被发现以来 , 艾滋病已经成为危害人类生命健康的重大传染性疾病。虽然高效抗逆转录疗法 (Highly Active Antiretroviral Therapy, HAART)的实施是抗艾滋病治疗的一项重大突破 , 但是病毒耐药性的出现及长期服药的毒 性问题极大地限制了该疗法的应用。

2、因此研发新型的抗艾滋病药物依然是当前一 项重大的科研任务。HIV-1 非核苷类逆转录酶抑制剂 (Non-nucleoside Rreverse TranscriptaseInhibitors, NNRTI)是HAAR疗法的重要组成部分。NNRTI具有结构多样性，但都作用于HIV-1逆转录酶(Reverse Transcriptase, RT)的疏水性口袋。该类药物具有高效、低毒的优点 , 但是耐药毒株的蔓延使该类药物迅速丧失临床效价。因此新型、高效、低毒、广谱抗耐药的NNRTI的研发是目前抗HIV药物研究的重要方向之一。在目前的非核苷类抗艾滋病药物研究领域，由于NNRTI结合口袋(NNRTIB

3、inding Pocket, NNIBP)本身不存在(需要NNRTI诱导产生)、结构柔韧性较强及 组成的氨基酸极易突变等限制性因素，使精确预测NNRTI的结合模式、完全基于 HIV-1 RT的三维结构进行全新抑制剂设计还存在较大困难。因此，选择研发前景较大的化合物为先导 , 在对其构效关系及结合模式分析的基础上 , 综合运用结构 生物学信息、计算化学技术及传统药物化学策略进行先导化合物的优化 , 是当前 发现新一代NNRTI药物的有效途径。三唑四唑巯乙酰胺类化合物是通过高通量筛选 （High-throughputScreening,HTS）得到的一类结构新颖的NNRTI在细胞水平的活性测试中,

4、大多 数衍生物在亚微摩尔浓度就产生较强的抗 HIV 活性。体外实验发现，该类化合物不但对野生型 RT具有较强的抑制活性，而且对 K103N-Y181C双突变的HIV-1 RT也具有很高的活性,因此三唑/四唑巯乙酰胺类 化合物是非常具有研发前景的一类 NNRT。本论文即是以此类NNRTI为先导化合 物,在前期初步构效关系及结合模式分析的基础上 ,根据“生物电子等排”、“骨架 跃迁”及“多靶点配体设计”等药物设计基本原理 , 对先导化合物中的“杂环支 架及氢键作用区”进行广泛的结构变换 , 构建全新的结构骨架。并以新设计的“等排”、“跃迁”及多靶点“杂合”骨架为母核 , 优选先导化 合物中的活性基

5、团 ,对先导化合物中的“疏水作用区”及“开口区”进行系统的 结构修饰 , 构建起结构多样的虚拟化合物库。 通过基于分子对接的虚拟筛选 , 对预 测活性较高的化合物实施定向合成 ,并经体外抗 HIV-1 活性实验,由此发现高效 低毒、抗耐药性且具有自主知识产权的的新型NNRTI,为该类抗艾滋病药物的研发奠定基础。目标化合物的合理设计1）基于HIV-1 RT与NNRT复合物的三维结构以及 NNRTI药效团的构成要素（支架/氢键作用区、疏水作用区及“开口区”），在对 三唑/四唑巯乙酰胺类先导化合物构效关系和分子模拟的基础上 , 按照“生物电 子等排”原理 , 对五元芳杂环进行结构多样性的变换 , 构

6、建了 1,2,3- 噻二唑、 1,2,3- 硒二唑、咪唑及新三唑等 4类新型的唑类巯乙酰胺骨架 ,并在“开口区” 引入多种含N、S原子的杂环基团，以增强该亲水区域的作用力。此外，尽管嗪类 杂环作为唑类杂环的非经典的电子等排体 , 但是它们具有非常类似的电子排布及生物学功能为了进一步考察杂环的种类对活性的影响 , 本论文还设计了全新的芳嗪类 ( 如哒嗪、三嗪等 )巯乙酰胺骨架。2) 根据先导化合物的药效团特征及 “骨架跃迁” (Scaffold Hopping)概念,对芳唑巯乙酰胺类NNRT的“杂环支架及氢键作用区” 作进一步改造，设计了杂环剖开或取代、且结合模式类似的“跃迁骨架”：用磺 酰胺基

7、团代替唑类杂环,羰基氧原子模拟唑类杂环上的N、S等杂原子,作为氢键 的受体。并在连接链引入新的构象限制性基团 , 保持与先导化合物具有类似的分子自 由度及活性构象。据此 , 设计了氨基磺酰胺及磺酰胺吡咯烷“跃迁”骨架。通过对先导化合物分子模拟 , 并结合具有类似结合模式的二芳基嘧啶类 NNRTI的结构特征,在唑环上引入氨基、卤素等取代基,以增强该区域与结合位点 氨基酸主链形成氢键或卤键的能力。 设计了杂环上连有氨基或卤素的取代噻唑巯 乙酰胺类结构骨架。3)多靶点抑制剂研究已成为当前新药研发的新策略 ,也是抗艾滋病药物研究 的新热点。根据靶点的结构生物学信息及先导化合物的构效关系 , 利用“药效

8、团 整合”的方法 , 并借助计算机手段进行合理设计是发现新型双靶点 HIV 抑制剂的 最有效途径。在对芳基二酮类HIV整合酶抑制剂及芳唑巯乙酰胺类 NNRT构效关系及结合 模式分析的基础上 ,结合两类抑制剂结构的相似性 ,充分利用每类抑制剂中的可 修饰位点 , 通过药效团整合的策略 , 构建新型的芳唑巯乙酰胺二酮结构骨架。 4) 以上述新设计的“等排” 、“跃迁”及多靶点“杂合”骨架为母核 ,优选先导化合 物中的活性基团 ,构建起结构多样的虚拟化合物库。借鉴基于分子对接的虚拟筛选结果来确定拟合成目标化合物的结构。 目标化合物的合成通过对目标分子的结构进行逆合成分析 , 确定化学合成路线。 目前

9、已合成 1,2,3- 噻二唑、 1,2,3- 硒二唑、咪唑、三唑、哒嗪、三嗪、取 代噻唑巯乙酰胺、氨基磺酰胺乙酰胺及含有二酮酸基团的芳唑巯乙酰胺等 9 大系 列 200 余个结构全新的目标化合物 , 其制备方法未见文献报道 , 具有较高的创新 性,已申请多项国家专利。已完成三嗪巯乙酰胺类NNRTI母核结构硫代三嗪酮的合成。目标化合物的活性筛选将设计合成的部分芳唑巯乙酰胺类衍生物进行了初 步的抗HIV-1（川B）及抗HIV-2 （ROD舌性筛选。结果表明,在1,2,3-噻二唑及咪 唑巯乙酰胺衍生物中 , 大多数目标化合物都具有较高的抗 HIV-1 活性。共有13个化合物的EC50值低于（或接近）

10、上市药物奈韦拉平与地拉韦定（阳 性对照药）；多数 1,2,3- 硒二唑巯乙酰胺衍生物活性较低 ,且细胞毒性较高；在 新型三唑巯乙酰胺系列中，有多个化合物对野生型 HIV及E138K K103N及 L100I 耐药株具有显著的抑制活性,EC50处在微摩尔水平；在氯代噻唑球乙酰系列化合 物中共有4个化合物（IX-B8a、IX-B8e、IX-B8f、IX-B8g）的EC50值达到微摩尔 水平。而且化合物 IX-B8e、IX-B8f 、 IX-B8g 能有效地抑制耐药株 （E138K、K103N、 L100I）;芳唑巯乙酰胺-二酮酸类化合物X-3A及X-3B对野生型HIV （川B）毒株及 多种耐药毒株

11、 （E138K、 K103N、 L100I、 L100I） 具有较好的抑制活性 ,单比先导化 合物的活性有所降低； 氨基噻唑巯乙酰胺系列及氨基磺酰胺系列化合物丧失抗病 毒活性。所筛选的目标化合物对HIV-2（ROD）均无明显抑制活性。此外,一些具有较高 活性的目标化合物对多种耐药毒株的活性筛选试验正在进行中 , 期待有新的发现本论文还初步探讨了各类目标化合物抑制HIV-1（川B）的构效关系。利用计算机辅助药物设计软件对发现的活性化合物进行了分子模拟（Dock）及3D-QSAR研究, 佐证了构效关系结论 , 为进一步结构修饰提供了合理的指导。本论文对部分目标化合物中进行了抗流感病毒活性的随机筛选

12、 ,结果发现, 化合物IX-A8g和IX-A8h呈现出显著的抗流感病毒活性,而且对甲型H1N1流感病 毒毒株有较高的选择性及较强的抑制作用。EC50值比几种对照药物低1-2个数量级, 但是这两个化合物的细胞毒性较大 , 值得进一步结构修饰。总之,本论文以高效抗耐药的先导化合物四唑/三唑巯乙酰胺类 NNRTI为模 板, 在作者前期初步结构修饰的基础上 , 结合构效关系结论及药效团特征 , 分别根 据药物设计中的“生物电子等排” 、“骨架跃迁”及“多靶点配体设计”等原理 , 对先导化合物进行结构多样的骨架变换 ,并应用药物设计软件进行虚拟筛选 ,避 免了合成的盲口性。 本课题总共设计合成了 9个系列共 200余个结构全新