sds-page凝胶电泳ppt课件

1、SDS-PAGE凝胶电泳 姓名：杨文骏姓名：杨文骏 学号：学号：S1309008SDS-PAGE凝胶电泳简介及应用凝胶电泳简介及应用SDS-PAGE凝胶电泳的实验步骤凝胶电泳的实验步骤本卷须知本卷须知主要内容 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)(Acr)和交联剂和交联剂N,N-N,N-甲叉双丙烯酰胺甲叉双丙烯酰胺(Bis)(Bis)在加速在加速剂和催化剂作用下聚合交联成三维网状结剂和催化剂作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。以此凝胶为支持物的电泳称为构的凝胶。以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)(PAGE)。聚丙烯酰胺凝

2、胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)(PAGE) 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳时，它的迁移率取决蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。 如果在丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二如果在丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠烷基磺酸钠(SDS)(SDS)，则蛋白质分子的电泳迁移率主要，则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量，而与所带电荷和形状无关。取决于它的分子量，而与所带电荷和形状无关。 因此可以利用因此可以利用SDS-PAGESDS-PAGE测定蛋白质分子量。测定蛋白质分子量。SDS-P

3、AGESDS-PAGE 凝胶由分离胶和浓缩胶组成：凝胶由分离胶和浓缩胶组成： 上层为浓缩胶，凝胶孔径较大，没有分子筛效上层为浓缩胶，凝胶孔径较大，没有分子筛效应，其应，其pHpH为为6.86.8，由于快慢离子所形成的高电压梯度，由于快慢离子所形成的高电压梯度，使得变性蛋白质分子在泳动中被压缩为很薄的一层，使得变性蛋白质分子在泳动中被压缩为很薄的一层，大大提高了分辨率。大大提高了分辨率。 下层为分离胶，凝胶孔径较小，有分子筛效应，下层为分离胶，凝胶孔径较小，有分子筛效应，pHpH为为8.88.8，变性蛋白质分子所带负电荷基本一致，泳，变性蛋白质分子所带负电荷基本一致，泳动速度主要决定于分子量。动

4、速度主要决定于分子量。 1. 安装制胶模具。安装制胶模具。 2. 调制分离胶，立即灌注至模具高度的调制分离胶，立即灌注至模具高度的70% 。 3. 加一层纯水，约加一层纯水，约30min后聚合。后聚合。 4. 倒出水并用滤纸把剩余的水分吸干。倒出水并用滤纸把剩余的水分吸干。 5.调制浓缩胶，立即灌注插入梳子。静置。调制浓缩胶，立即灌注插入梳子。静置。实验步骤 6. 样品及标准品的准备：标准品按说明书进行处理，样品及标准品的准备：标准品按说明书进行处理，样品加入样品加入ddH2O溶解后，再加入溶解后，再加入SDS上样缓冲液。上样缓冲液。 7. 加样电泳每孔加样加样电泳每孔加样15l）。）。 8.

5、 卸下玻板，剥离凝胶放在器皿内，切去一角作为卸下玻板，剥离凝胶放在器皿内，切去一角作为方位标记。方位标记。 9. 染色：用至少五倍体积染色液浸泡凝胶，于平缓染色：用至少五倍体积染色液浸泡凝胶，于平缓摇摆平台上室温摇摆平台上室温1h左右。左右。 10.脱色：用蒸馏水漂洗数次，再用脱色液脱色，至脱色：用蒸馏水漂洗数次，再用脱色液脱色，至蛋白质条带清晰蛋白质条带清晰（1聚丙烯酰胺具有神经毒性，操作时要戴手套。聚丙烯酰胺具有神经毒性，操作时要戴手套。（2安装电泳槽时要注意均匀用力旋紧固定螺丝，防安装电泳槽时要注意均匀用力旋紧固定螺丝，防止夹坏玻璃板，避免缓冲液渗漏。止夹坏玻璃板，避免缓冲液渗漏。（3梳子需一次平稳插入梳子需一次平稳插入,梳口处不得有气泡梳口处不得有气泡,梳底需梳底需水平。水平。本卷须知（4微量注射器加样器上样时微量注射器加样器上样时, 注射器不可过低注射器不可过低,以防刺破胶体；也不可过高以防刺破胶体