五放线菌霉菌形态观察

1、微生物学实验微生物学实验Lab work on Microbiology 三峡大学化学与生命科学学院三峡大学化学与生命科学学院微生物学教学组微生物学教学组实验指导老师：实验指导老师：涂涂 璇璇一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理三、实验器材三、实验器材四、实验步骤四、实验步骤五、实验报告五、实验报告n学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的基本学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的基本方法。方法。n初步了解放线菌和四类常见霉菌的基本形初步了解放线菌和四类常见霉菌的基本形态特征。态特征。n放线菌（原核微生物）：放线菌（原核微生物）： 由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌由不同长短的纤细的菌丝所形

2、成的单细胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营丝体。菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基以上的养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基以上的气生菌丝。有些气生菌丝分化成孢子丝，呈螺旋气生菌丝。有些气生菌丝分化成孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆形形、波浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆形或杆状。气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分或杆状。气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类的重要依据。类的重要依据。放线菌放线菌培养和观察方法培养和观察方法n扦片法：扦片法：在放线菌平板上扦上盖玻片后培养，使在放线菌平板上扦上盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着

3、培养基表面与盖玻片的交接处生放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时直接取出盖玻片置长而附着在盖玻片上。观察时直接取出盖玻片置于载玻片上镜检。于载玻片上镜检。镜检：用镊子拔出盖玻片，擦去背面培养物，将镜检：用镊子拔出盖玻片，擦去背面培养物，将有菌的一面朝上置于载玻片上，直接镜检。有菌的一面朝上置于载玻片上，直接镜检。宜用略暗光线观察，低倍镜宜用略暗光线观察，低倍镜高倍镜；染色后观高倍镜；染色后观察效果更好。察效果更好。 玻璃纸法玻璃纸法：将玻璃纸覆盖在平板表面，接种放：将玻璃纸覆盖在平板表面，接种放线菌、培养，放线菌在玻璃纸上形成菌苔。观线菌、培养，放线菌在玻璃纸上

4、形成菌苔。观察时取下玻璃纸固定在载玻片上镜检。察时取下玻璃纸固定在载玻片上镜检。 镜检：先在载玻片上滴一小滴水，取下玻璃纸，镜检：先在载玻片上滴一小滴水，取下玻璃纸，使菌面朝上，使玻璃纸平贴于载玻片上。使菌面朝上，使玻璃纸平贴于载玻片上。 优点：可观察到放线菌自然生长状态优点：可观察到放线菌自然生长状态下的特征，和不同生长期的形态。下的特征，和不同生长期的形态。注意注意: :整过程勿触动菌面培养物。整过程勿触动菌面培养物。n印片法：印片法：将要观察的放线菌的菌落或菌苔直接印将要观察的放线菌的菌落或菌苔直接印在载玻片上，经染色后观察。在载玻片上，经染色后观察。n用接种铲或解剖刀将平板上的菌苔连同

5、培养基一用接种铲或解剖刀将平板上的菌苔连同培养基一起切下，菌面朝上。另取一载玻片，微热后，轻起切下，菌面朝上。另取一载玻片，微热后，轻轻按压菌苔，固定，染色后镜检。轻按压菌苔，固定，染色后镜检。n主要用于观察孢子丝的形态，孢子的排列及其形主要用于观察孢子丝的形态，孢子的排列及其形状等，但形态特征可能有所改变。状等，但形态特征可能有所改变。 霉菌（真核微生物）：霉菌（真核微生物）： 霉菌是一类可产生复杂分枝菌丝的真霉菌是一类可产生复杂分枝菌丝的真核微生物的统称。分枝菌丝分为基内菌丝核微生物的统称。分枝菌丝分为基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁

6、殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比放线菌大得霉菌菌丝和孢子的宽度通常比放线菌大得多。多。霉菌霉菌培养和观察方法培养和观察方法n载玻片法：将培养基薄层置于载玻片上，接种后载玻片法：将培养基薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在其间的有限空间内沿盖上盖玻片培养，霉菌即在其间的有限空间内沿盖玻片横向生长。观察时直接将载玻片镜检。盖玻片横向生长。观察时直接将载玻片镜检。n玻璃纸法：玻璃纸法：与放线菌相似。与放线菌相似。n直接制片观察法：用解剖针挑取少量培养物置于直接制片观察法：用解剖针挑取少量培养物置于预先滴加乳酸石炭酸棉蓝染色液中，制

7、成霉菌制预先滴加乳酸石炭酸棉蓝染色液中，制成霉菌制片镜检。片镜检。n5050乙醇用于洗去孢子；尽可能保持霉菌生长状乙醇用于洗去孢子；尽可能保持霉菌生长状态；避免产生气泡。态；避免产生气泡。n特点：细胞不变形；不易干燥，易保存；防止孢特点：细胞不变形；不易干燥，易保存；防止孢子飞散；增强反差。子飞散；增强反差。n霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且孢子很霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且孢子很容易飞散，制真菌标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染容易飞散，制真菌标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。色液。n用乳酸石炭酸棉蓝染色液制成的霉菌标本的特点用乳酸石炭酸棉蓝染色液制成的霉菌标本的特点是：是：(a)细胞不变

8、形；细胞不变形；(b)具有杀菌防腐作用，不易具有杀菌防腐作用，不易干燥，能保持较长时间；干燥，能保持较长时间；(c)溶液本身呈蓝色，有溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。一定染色效果。1 1、菌种、菌种 放线菌划线平板放线菌划线平板287287天后培养物，曲霉、天后培养物，曲霉、根霉、青霉和毛霉划线平板根霉、青霉和毛霉划线平板284284天后培养物。天后培养物。2 2、仪器、仪器 显微镜；显微镜；3 3、其他材料、其他材料 平皿，载玻片，解剖针，香柏油，二平皿，载玻片，解剖针，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。三、实验器材三、实验器材四、操作步骤四、操作步骤

9、观察放线菌气生菌观察放线菌气生菌丝和基内菌丝的区丝和基内菌丝的区别别取插片一片，直接取插片一片，直接在显微镜下进行观在显微镜下进行观察，注意分界面两察，注意分界面两侧菌丝形态的差异侧菌丝形态的差异链霉菌的基内菌丝与气生菌丝链霉菌的基内菌丝与气生菌丝孢子丝分隔成孢子孢子丝分隔成孢子放线菌和细菌的异同放线菌和细菌的异同 观察黑根霉观察黑根霉菌丝情况和菌丝情况和子囊孢子情子囊孢子情况（着重辨况（着重辨认孢子囊、认孢子囊、包囊梗、假包囊梗、假根）：根）： 观察毛霉菌丝和分生孢子着生情况：观察毛霉菌丝和分生孢子着生情况：逐逐级级分分枝枝 观察黑曲霉菌丝观察黑曲霉菌丝分隔情况和分生分隔情况和分生孢子着生情况孢子着生情况（着重辨认分生（着重辨认分生孢子梗、足细胞孢子梗、足细胞和分生孢子）：和分生孢子）：分生孢子梗顶端膨大成分生孢子梗顶端膨大成圆形或椭圆形的顶囊，圆形或椭圆形的顶囊，由顶囊向外辐射长出一由顶囊向外辐射长出一层或两层小梗，最上层层或两层小梗，最上层小梗呈瓶状，在其顶端小梗呈瓶状，在其顶端生成成串的分生孢子。生成成串的分生孢子。 观察青霉菌丝观察青霉菌丝和分生孢子着和分生孢子着生情况：生情况： 五、实验报告五、实验报告 记录所观察到的放线菌基内菌丝和气生记录所观察到的放线菌基内菌丝和气生菌丝的差别菌丝的