血清谷丙转氨酶测定设计实验ppt课件

1、实验标题实验标题实验目的实验目的n掌握谷丙转氨酶活性测定的掌握谷丙转氨酶活性测定的n 原理和方法原理和方法l血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a a一酮戊一酮戊二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸l血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即反响出谷丙转氨酶活性的大小。反响出谷丙转氨酶活性的大小。l丙酮酸与丙酮酸与2 2，4-4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色，在碱二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色，在碱性溶液中成醌型显棕红色。性溶液中成醌型显棕红色。实验原理实验原

2、理 本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反响丙酮酸的量，即反响了谷丙转氨酶的活性。响丙酮酸的量，即反响了谷丙转氨酶的活性。 本法以本法以lml血清与基质液在血清与基质液在37，保温，保温30分钟生分钟生成成2.5g丙酮酸为谷丙转氨酶活性丙酮酸为谷丙转氨酶活性1单位单位 求酶活性单位的方法：求酶活性单位的方法： 1、规范品对照法：检品与规范丙酮酸液同样处、规范品对照法：检品与规范丙酮酸液同样处置呈色，进展比色，计算出酶活性单位。置呈色，进展比色，计算出酶活性单位。 2、规范曲线法：取含待测物的一系列规范溶、规范曲线法：取含待测物的一系列规范溶液，作规

3、范曲线，由规范曲线查得活性单位。液，作规范曲线，由规范曲线查得活性单位。一、规范品对照法一、规范品对照法 取试管取试管4支，标号，按下表加试剂：支，标号，按下表加试剂：实验操作实验操作56放置放置5分钟。分钟。 加加0.4N NaOH液液5.0ml渐渐参与约渐渐参与约1分钟，边加边混匀。分钟，边加边混匀。室温放置室温放置 30分钟，分钟，测测OD值，波长值，波长 520nm，用蒸馏水调零点。，用蒸馏水调零点。 计 算ODA-ODBODs-ODs= =X 待测样品丙酮酸含量待测样品丙酮酸含量50ug/ml 0.1 ml X= =ODA-ODBODs-ODs5 5SGPT单位单位=ODA-ODBO

4、Ds-ODs5 50.10.12.52.5=ODA-ODBODs-ODs2020二、规范曲线法二、规范曲线法 配制一系列不同浓度的规范丙酮酸液，并且各加配制一系列不同浓度的规范丙酮酸液，并且各加以适量的基质液，以适量的基质液，作成规范曲线。详细做法如下表。作成规范曲线。详细做法如下表。各管混匀，放各管混匀，放37水浴水浴5分钟分钟 加加0.4N NaOH液液5.0ml 渐渐参与约渐渐参与约1分钟，边加边混匀分钟，边加边混匀然后各加呈色试剂然后各加呈色试剂0.5ml，混匀，混匀56放置放置5分钟。分钟。室温放置室温放置 30分钟分钟测定测定OD值值, 波长波长 520nm，用蒸馏水调零点。，用蒸

5、馏水调零点。一规范对照法一规范对照法.原始数据记录2、公式计算酶活性单位要求带入数据，写出结果、公式计算酶活性单位要求带入数据，写出结果二、规范曲线法二、规范曲线法.原始数据记录原始数据记录2、绘制规范曲线，要求规范作图、绘制规范曲线，要求规范作图3、经过方法一的、经过方法一的ODA-ODB，在规范曲线中，查得酶活性单位，在规范曲线中，查得酶活性单位实验结果实验结果本卷须知本卷须知n操作中加操作中加 0.4N NaOH0.4N NaOH液时，需以较慢速度液时，需以较慢速度参与，并且边加边摇匀加快时那么参与，并且边加边摇匀加快时那么a a一戊酮一戊酮二酸引起的发色加强。二酸引起的发色加强。n本实验中各试剂加量都需求准确，并且要本实验中各试剂加量都需求准确，并且要留意控制条件，保温时间要严厉留意控制条件，保温时间要严厉n本法测定本法测定S