1型原胶原氨基末端前肽

1、文件已阅声明表Procedure circulati on form文件名称：总1型胶原氨基端延长肽检测作业指导书表号：KM-MP03 ?02?02已阅声明：本人承诺已了解此文件中的相关内容，今后的工作中将严格按照此文件执行，不随意对外传阅此文件，如有因与文件不相符的操作，责任由本人承担。（I have understood the relevant content of the document.I will keep the document secret andbe responsible to properly perform procedure）阅读人签名表姓名（NAME）职务（PO

2、SITION）签名（SIGNATURE）签名日期（DATE）文件修改记录页Procedure ame ndme nt form表号:序号NO.页码(Page)内容更改说明(Description ofModified conten ts)审批人(Approv ed by)批准生效日期(Approveddate)1换版文件信息表(Procedure in formatio n form)表号：KM-MP03 ?02?04文件名称(Title ofdocume nt)(Doc.Code)总1型胶原氨基端延长肽检测作业指导书(KM-SOP-0300 ?363)版本号(Edition No.)Edit

3、i on 3.0生效日期(Operative date)2008-03-13文控部门(Doc. Con trol Dept.)实验室文控室回顾日期/签名(Reviewdate/sig nature )回顾日期(Reviewdate)回顾人员签名(Sig nature )替代文件（Replaces）总1型胶原氨基端延长肽检测作业指导书（Editio n2.0 ）存放地点（Location）/No.Location (Holder )No.Location(Holder )持有人（Holder ）1实验室文控室（陈彬）2化学发光室（段学成）作者签名/日期付正乾(Authorsig nature/d

4、ate)审批人签名/日期陈建波(Authorized by :Sig nature/Date)接收人签名/日期(Receiptor/Date )副本数(Copy No.)本文件是第个文件拷贝/共发放 2 个文件拷贝。总1型胶原氨基端延长肽检测检测作业指导书（Total procollagentype 1 amino-terminalpropeptide(t-p1np )by Roche cobas e601)1 原理(Test principle )“三明治”法，总检测时间：18分钟。第一次孵育：20 pl标本和一份生物素 抗P1NP特异性单克隆抗体一起孵育。第二次孵育：在加入链亲和素包被的微

5、粒和一 份钉复合体标记的P1NP特异性单克隆抗体后，反应形成一“三明治”样抗原 -抗体复合体，复合体在链亲和素和生物素相互作用下形成固相。将反应液吸入检池 中，检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。未结合的物质通过ProCell除去。在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用光电倍增器检测发光的强度。2 样本收集和储存(Specimen Collection and Storage ):样本类型(sample type):血清(serum)必须用标准试管或内有分离胶的试管收集。使 用肝素锂和EDTA-K3血浆(plasma)。拒收标本(Specimen rejection ):严重溶血、

6、脂血、或用叠氮钠防腐标本。标本用量(volume) : 200uL血清/血浆储存条件(sample storage conditions): 在 15 -25 °C可保存 24 小时；在 2-8 ° 可保存5天，C在-20 °C可保存6个月。样品最多可以冻融5次。3 试剂(Reage nt ):3.1 Roche cobas e601原装试剂。3.1.1 试剂内组份(components):I链霉亲和素包被的微粒n R1生物素化的抗total P1NP 抗体川R2三联吡啶钉标记的抗total P1NP抗体IV使用说明书，分英语、法语、德语、葡萄牙语、西班牙语各一份

7、。未随试剂盒提供的组分 Elecsystotal P1NP 定标液(P1NP CalSet ) Elecsys骨标志物质控品(PreciControl Bone )-Elecsys 系统缓冲液(ProCell M )-Elecsys 测量池清洗液(CleanCell M )-Elecsys系统缓冲液/测量池清洗液预热杯(PC/CC-Cup ) Elecsys反应杯 / 吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M) Elecsys 废物盒(wasteli ner) Elecsys 系统清洗液支架(SysClean Adapter M) Elecsys 系统清

8、洗液(SysClean )3.2试剂准备：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试 剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。Put reage nt from refregeratory to room temperature for proper time;Newreage nt lots must be tested in parallel with old lots before or con curre ntly with beingplaced in service to en sure that the calibrati

9、on of the new lot of reage nt has maintainedcon siste nt results for patie nt specime ns. Recod the results.4 仪器(Instrument): Roche cobas e601。4.1 仪器准备(prepare apparatus ):使用前确保仪器水通道、液体垃圾通道畅通，保证系统清洗液(SysClean )、测量池清洗液(Clea nCell M )、反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M)、废物盒(wasteliner)、系统缓冲液

10、(ProCell M )的足够。然 后开机，在仪器的试剂盘中加入所需的试剂。5 安全防范(Safety Precautions):操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗 材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露 太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品 应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。6 校准(Calibration if Applicable ):6.1 校准品储存和使用(calibration material storage and usage) : Roche cobas e601原装校

11、准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8 C可 稳定至U 有效 期。Stop using overdue calibration material.use it within expirati on date,storage in 2-8°C配制(calibration material redissolve ):用复溶专用加样枪准确吸取 1mL去离 子水于瓶中，溶解静置3小时，混匀并用有盖小子弹头分装200此/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，于一20 C冻存备用。Label confectingdate ,calibrati on lot,p

12、ers on who con fected, expirati on date.the n复溶后校准品成分的稳定性：保存于(-20 )C，可稳定2个月。6.2每批试剂必须用新鲜试剂(试剂经仪器注册24小时以内)标定一次，如再次标定 即根据下列要求：试剂批号改变(Reagent lot changes)同一批号的试剂盒在分析仪上使用超过1个月(28天)同一试剂盒在分析仪上使用超过7天根据需要：如质控数据超过额定的限度。Recalibration based on quality control problem6.3步骤：当使用新批号试剂之前，都需要对试剂盒进行校准。在校准( clibration

13、 ) 菜单中编辑校准液的资料，在两个样本管中分别加入至少 200ul的1，2校准品并放 到已指定位置的校准架中，放入样本通道中。然后在计算机屏幕上选择START项，再次点击START界面中的绿色START健。6.4结果判断：仪器会自动提示是否通过校准。如果未通过会有相应的原因解释以及解决方法的指导。校准后必须及时做质控且须获得通过6.5校准周期：质控在控的情况下一个月内对同批号试剂有效。如果质控值提示有需 要校准时，应重新校准。7 操作过程(Procedural Steps ):7.1样本准备：先检查标本是否合格(标本与作业指导书上标本要求是否一致)，核对验单上的条码和标本上的条码是否一致，按

14、样本每天唯一号原则进行编号。将带有 编号的标本离心取血清/血浆，将待测物加入相应的样本管。7.2取出空样本架，将含有血清/血浆样本管按先后顺序加入样品架中，将样品架推入 样品槽中。因需要一定量样本做底，每个样品管至少加入样品200ul(样本用量75ul )。7.3在WORKLIST界面中输入实验号，指定total P1NP项目。结果出来后，在WORKLIST菜单中选择需要打印的结果，打印后作为原始记录加以保留，并且操作 者要签上名字及操作日期。7.4数据联机入系统(send data to LIS):计算机：设备管理一接口管理一点击罗氏全自动化学发光仪一点击开始，出现预处理 窗口一仪器：选择需

15、要传送结果一 SEND传送一回到计算机预处理窗口一传送。7.5数据审核(data checkup):在确保仪器与电脑数据处理系统正常联机的情况下 (即 数据传送和接收无中断)，仔细核对每一个数据有无错误(如：误传、漏传)，是否与 临床诊断相吻合，如发现异常情况，应仔细核对实验号与样本架号，原始导出结果与 系统结果是否对应等，如有必要，复查该结果。8 质量控制（Quality control ）:室内质控：使用罗氏骨代谢通用质控品（PC BONE ）做质控，每天至少做两个浓度的值。两个浓度要求符合本项目要求。当质控达不到要求时，分析原因，或重新定标；仍不 能满足要求时，则做期间核查，检查仪器是否

16、正常。室内质控操作过程。提前在仪器 内设定好质控的靶值，SD值，在CONTROL菜单中指定质控架号、申请质控项目， 质控品每管至少200ul质控品。拒绝标准：P1NP最大允许误差 ALE为25%，室内质控CV为2.09% （低值），2.13% （高值）， 偏移为（低值）SD=1.52卩g/（高值）SD=18.42卩g/L根据公式计算 SEc= （ALE-Bias ） /CV-1.65，选择的质控规则为1-3s,2-2s,R4s,10x，当质控失控时，应按照室内质 量控制程序处理。9线性范围9.1 分析测试范围（AMR ）: 5- 1200 卩 g/L-5200 卩 g/L）9.2病人结果报告范

17、围（CRR）: 5- 6000 卩g/L-60 00卩g/L）当结果超过AMR时，需要稀释，稀释材料（dilution material）:采用罗氏通用稀释液最大稀释倍数（dilution times ） :1:5超出检测限度需要稀释的样品，要重新申请该项目在Dilution中指定并指定稀释倍数（最大1:5）,.仪器会自动稀释检测按项目打出结果，作为原始记录加以保留。10 计算(Calculations if Applicable ):无需人工计算。11 参考范围(Expect Values ):绝经前：15.1358.59pg/ml绝经后：所有女性：16.2773.87卩g/L接受 HRT

18、治疗：14.2858.92 卩 g/L未接受 HRT 治疗：20.2576.31 卩 g/L12 结果解释(Interpretation of Results ):可以直接报告所检测结果，无须进行结果解释。13 方法的局限性(Method Limitations):接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人会出现假阳性反应。检测结果可能与一些影响骨吸收的临床状况相混淆，如甲状旁腺功能亢进或甲状腺功能亢进。在预测骨质疏松进程、骨折危险度、甲状旁腺功能亢进或甲状腺功能亢进等方面，本试验的应用尚待证实。13.1 精密度(Precision )：批内精密度 CV% <2.67、批间精密度 CV% <

19、;2.13。(批内精密度 CV% <2.9、批间精密度CV% <3.7)13.2 灵敏度(Sensitivity ) : <5.00 ng/ml( <5.00 ng/ml)13.3特异性(Specificity ):所使用的单克隆抗体与如下项目交叉反应均<1% : B-CrossLaps,N- MID? Osteocalcin,parathyroid hormone (PTH), and 25-OHvitamin D 。13.4 分析测试范围(AMR ): 5-1200 卩 g/(5-1200 卩 g/L)13.5病人结果报告范围（CRR）: 5-6000 卩g/

20、L-56000 卩g/L）13.6 干扰物质（Interfering Substances）:胆红素影响（bilirubin ）:样本中胆红素的浓度小于650 mg/L，在实验允许的精密度 范围内对结果没有影响。溶血影响（hemolysis ）:样本中血红蛋白的浓度小于1.8g/dl，在检测允许的精密度 范围内对结果没有影响。脂血影响（Lipemia ）:样本中内脂的浓度小于2000 mg/dL ，在检测允许的精密度范 围内对结果没有影响生物素影响（biotin）:样本中生物素的浓度小于 50ng/ml ，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响13.7 注意事项（Notices ）:仅供体外诊断使用（use only for in vitro diag no s