实验一还原糖、脂肪、蛋白质、DNARNA鉴定ppt课件

1、实验一 生物组中可溶性复原糖、脂肪、蛋白质、DNA、RNA的鉴定教学目的：教学目的： 知识目的：阐明实验原理知识目的：阐明实验原理颜色反响，颜色反响，识记和区分用于可溶性复原糖、脂肪、蛋白质鉴识记和区分用于可溶性复原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色，初步掌握鉴定上述定的试剂及产生的特定颜色，初步掌握鉴定上述化合物的根本方法，学会描画实验景象，掌握化合物的根本方法，学会描画实验景象，掌握NaOHNaOH溶液和溶液和CuSO4CuSO4溶液的运用方法。溶液的运用方法。 才干目的：培育学生自动获取知识，运才干目的：培育学生自动获取知识，运用知识分析景象，归纳总结的才干，培育学生实用知识分析

2、景象，归纳总结的才干，培育学生实践操作的才干及从景象出发探求事物本质的才干。践操作的才干及从景象出发探求事物本质的才干。 情感与价值目的：经过亲手实验体验科情感与价值目的：经过亲手实验体验科学家严谨治学的科学态度，培育实事求是的世界学家严谨治学的科学态度，培育实事求是的世界观。观。一、实验原理一、实验原理1.1.可溶性复原糖可溶性复原糖 生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具复原性的半缩醛羟基，因此叫内都含有游离的具复原性的半缩醛羟基，因此叫做复原糖；蔗糖分

3、子内没有，为非复原糖。实验做复原糖；蔗糖分子内没有，为非复原糖。实验中所用的本尼迪特试剂，只能鉴定生物组织中可中所用的本尼迪特试剂，只能鉴定生物组织中可溶性复原糖，而不能鉴定可溶性非复原糖及不能溶性复原糖，而不能鉴定可溶性非复原糖及不能溶解的糖。葡萄糖溶液在参与本尼迪特试剂，在溶解的糖。葡萄糖溶液在参与本尼迪特试剂，在加热条件下被复原为红黄色的加热条件下被复原为红黄色的Cu2OCu2O沉淀，而葡萄沉淀，而葡萄糖氧化成葡萄糖酸。其反响式为糖氧化成葡萄糖酸。其反响式为: :-CHO+Cu(OH)2-CHO+Cu(OH)2-COOH+Cu2O-COOH+Cu2O红黄色红黄色2.2.脂肪的鉴定脂肪的鉴

4、定 苏丹苏丹(苏丹苏丹)为一种脂肪染色为一种脂肪染色剂剂( (易溶解于酒精，不溶解于水易溶解于酒精，不溶解于水) )。苏丹。苏丹染液遇脂肪的颜色反响为橘黄色，苏染液遇脂肪的颜色反响为橘黄色，苏丹丹染液遇脂肪的颜色反响为红色。其染液遇脂肪的颜色反响为红色。其反响式为反响式为: : 脂肪脂肪苏丹苏丹 苏丹苏丹 橙黄色红色橙黄色红色3.3.蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定 将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。反响式为: 双缩脲在碱性环境中能和硫酸铜结合成红紫色的络化双缩脲在碱性环境中能和硫酸铜结合成红紫色的络化物。蛋白质分子中含有的肽键构造与双缩脲构造类似，物。蛋白质分子中含有的肽键构造与双缩

5、脲构造类似，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反响：因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反响：-CO NH -CO NH -类似双缩尿类似双缩尿H2NOC - NH - CONH2H2NOC - NH - CONH2构造构造碱性条件下与碱性条件下与Cu2+Cu2+作用构成紫色络合物作用构成紫色络合物双缩尿反响双缩尿反响选材：含糖量较高的白色或近于白色，苹果、梨最好选材：含糖量较高的白色或近于白色，苹果、梨最好 。 二、实验步骤与景象二、实验步骤与景象1.1.可溶性复原糖可溶性复原糖 制备组织样液：制备组织样液：制浆：去皮、切块、研磨制浆：去皮、切块、研磨过滤：用单层纱布过滤：用单层纱布取液：取液

6、：mLmL显色反响显色反响 景象：景象： 2.2.脂肪的鉴定脂肪的鉴定 取材：花生种子浸泡取材：花生种子浸泡 h h，去皮，将子叶削成薄片，去皮，将子叶削成薄片 制片：制片：选取最薄的薄片移至载玻片中央选取最薄的薄片移至载玻片中央在薄片上滴加苏丹在薄片上滴加苏丹 染液染液2323滴，染色滴，染色 minmin滴加体积分数为滴加体积分数为50%50%的酒精溶液的酒精溶液1212滴，洗去浮色滴，洗去浮色吸去余液，滴吸去余液，滴1-21-2滴蒸馏水，盖上盖玻片滴蒸馏水，盖上盖玻片察看：察看：先在低倍镜下找到已着色的薄片，后用高倍镜察看先在低倍镜下找到已着色的薄片，后用高倍镜察看结果：结果：有被染成橙

7、黄色的脂肪微粒有被染成橙黄色的脂肪微粒3.3.蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定 选材与制备选材与制备组织样液：组织样液：黄豆组织样液或鸡蛋白稀释液黄豆组织样液或鸡蛋白稀释液黄豆浸泡黄豆浸泡 去皮去皮切片切片研磨研磨过滤过滤滤液滤液 显色反响显色反响景象：景象：无色无色紫色或紫红紫色或紫红色色4.4.察看察看DNADNA和和RNARNA在细胞中的分布在细胞中的分布 实验原理实验原理 DNADNA主要分布在细胞核内，主要分布在细胞核内，RNARNA大部大部分存在于细胞质中。核酸均为酸性，对碱性染料分存在于细胞质中。核酸均为酸性，对碱性染料甲基绿和吡罗红具有亲和力，这两种染料对甲基绿和吡罗红具有亲和力，这两

8、种染料对DNADNA和和RNARNA的亲和力不同。用这两种染料混合液处置细胞的亲和力不同。用这两种染料混合液处置细胞时，由于时，由于DNADNA和和RNARNA聚合程度不同，甲基绿分子有聚合程度不同，甲基绿分子有两个相对的正电荷，与聚合程度较高的两个相对的正电荷，与聚合程度较高的DNADNA分子有分子有较强的亲和力，可使较强的亲和力，可使DNADNA分子染成绿色，而吡罗红分子染成绿色，而吡罗红分子中仅一个正电荷，可与聚合程度较低分子中仅一个正电荷，可与聚合程度较低RNARNA结合结合使其染成红色。即使其染成红色。即RNARNA对吡罗红亲和力大，被染成对吡罗红亲和力大，被染成红色，而红色，而DN

9、ADNA对甲基绿亲和力大，被染成蓝绿色。对甲基绿亲和力大，被染成蓝绿色。吡罗红甲基绿染液可显示细胞中吡罗红甲基绿染液可显示细胞中DNADNA、RNARNA的分布。的分布。三、实验胜利的关键与本卷须知：三、实验胜利的关键与本卷须知：1.1.实验胜利的关键在于实验资料的选择：实验胜利的关键在于实验资料的选择： 在做可溶性复原糖的鉴定实验中，最理想的实验在做可溶性复原糖的鉴定实验中，最理想的实验资料是含糖量较高的生物组织资料是含糖量较高的生物组织( (或器官或器官) )，而且组织的颜色，而且组织的颜色较浅，最好是白色或近于白色的植物组织，这样可以防止较浅，最好是白色或近于白色的植物组织，这样可以防止

10、资料本身颜色对实验变化颜色的掩盖。经实验比较，颜色资料本身颜色对实验变化颜色的掩盖。经实验比较，颜色反响的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。反响的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。 在做脂肪的鉴定实验中，实验资料最好选用富含在做脂肪的鉴定实验中，实验资料最好选用富含脂肪的种子，且徒手切片要胜利，要务虚验技艺较高，无脂肪的种子，且徒手切片要胜利，要务虚验技艺较高，无妨改成刮取花生子叶泥制造暂时装片，易做，效果又好。妨改成刮取花生子叶泥制造暂时装片，易做，效果又好。 在做蛋白质的实验时，最好选用富含蛋白质的生在做蛋白质的实验时，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物资料常用的是大豆

11、，动物资料常用的是鸡蛋，物组织，植物资料常用的是大豆，动物资料常用的是鸡蛋，鉴定之前需求留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜鉴定之前需求留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色做比较，这样可加强压服力。色做比较，这样可加强压服力。 (1) (1)斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液(0.1g/mL(0.1g/mL的的NaOHNaOH溶液溶液) )和乙液和乙液(0.05g/mL(0.05g/mL的的CuSOCuSO溶液溶液) )分别配制、储存，运用时，再暂时配制，将分别配制、储存，运用时，再暂时配制，将4 45 5滴乙液滴滴乙液滴入入2mL2mL

12、甲液中，配完后立刻便用。切勿将甲液和乙液分别甲液中，配完后立刻便用。切勿将甲液和乙液分别参与组织样液中。参与组织样液中。 (2) (2) 鉴定可溶性复原糖，加热试管时，应该用试管夹鉴定可溶性复原糖，加热试管时，应该用试管夹夹住试管上部，放入怒放水的大烧杯加热；留意试管底部夹住试管上部，放入怒放水的大烧杯加热；留意试管底部不接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管不接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，呵斥烫伤。假设试管内溶液过于内溶液沸腾时冲出试管，呵斥烫伤。假设试管内溶液过于沸腾，可以提起试管夹，使试管与沸水接触面减少，以免沸腾，可以提起试管夹，使试管

13、与沸水接触面减少，以免溶液溢出。溶液溢出。 A.A.可溶性复原糖可溶性复原糖 2.2.本卷须知：本卷须知： (3) (3) 在鉴定脂肪的实验中，假设用花生在鉴定脂肪的实验中，假设用花生种子作实验资料，必需提早浸泡种子作实验资料，必需提早浸泡3 34 4小时，小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，那么组织太软，切下的薄片不易成形，切片那么组织太软，切下的薄片不易成形，切片要尽能够的薄。要尽能够的薄。 (4) (4) 染色后一定要用染色后一定要用50%50%的酒精溶液洗的酒精溶液洗去浮色，染色和洗浮色时间不宜过长否那去浮色，染色和洗浮色时间不宜过长否

14、那么酒精将脂肪溶解影响实验效果，察看时么酒精将脂肪溶解影响实验效果，察看时找最薄处最好只需找最薄处最好只需1212层细胞。层细胞。B.B.脂肪的鉴定脂肪的鉴定 (5) (5)在蛋白质的鉴定实验中，假设用在蛋白质的鉴定实验中，假设用蛋白质作实验资料，必需稀释，假设稀释蛋白质作实验资料，必需稀释，假设稀释不够，与双缩脲试剂发生反响后会粘固在不够，与双缩脲试剂发生反响后会粘固在试管内壁上，使反响不彻底，且试管不易试管内壁上，使反响不彻底，且试管不易洗刷干净。洗刷干净。 (6) (6)双缩脲试剂的运用，应先双缩脲双缩脲试剂的运用，应先双缩脲加试剂加试剂A(0.1g/mLA(0.1g/mL的的NaOHN

15、aOH溶液溶液) )，呵斥碱性，呵斥碱性的反响环境，再加试剂的反响环境，再加试剂B(0.01g/mLB(0.01g/mL的的CuSOCuSO溶液溶液) )。C.C.蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定 1 1结论：上述实验证明苹果果肉中、花生种子结论：上述实验证明苹果果肉中、花生种子中、黄豆组织中各存在什么样物质中、黄豆组织中各存在什么样物质? ? 答：答： 。 2 2讨论：为什么根据某些化学反响可以使生物讨论：为什么根据某些化学反响可以使生物组织中的有关有机物产生固定的颜色反响可以鉴定生组织中的有关有机物产生固定的颜色反响可以鉴定生物组织有糖、脂肪、蛋白质的存在物组织有糖、脂肪、蛋白质的存在? ? 四、

16、讨论与练习：四、讨论与练习：可溶性复原糖、脂肪、蛋白质可溶性复原糖、脂肪、蛋白质 由于某些化学试剂与生物组织中的化合物发生由于某些化学试剂与生物组织中的化合物发生一定的化学反响后，可产生新的化合物，而这种化合一定的化学反响后，可产生新的化合物，而这种化合物是有固定的颜色的。因此，根据待检测物与某些化物是有固定的颜色的。因此，根据待检测物与某些化学试剂反响的固有颜色，如红黄色、橙黄色、紫色等。学试剂反响的固有颜色，如红黄色、橙黄色、紫色等。可以鉴定生物组织中存在有糖、脂肪、蛋白质。可以鉴定生物组织中存在有糖、脂肪、蛋白质。 各种可供实验的材料各种可供实验的材料梨梨 黄桃黄桃 胡萝卜胡萝卜 黄豆黄

17、豆 花生种子花生种子 小麦种子小麦种子 其中适宜于鉴定糖的是其中适宜于鉴定糖的是 ，理由是梨的组织，理由是梨的组织细胞细胞 ，他计划，他计划用什么试剂鉴定用什么试剂鉴定? 。 小麦种子不如花生种子更适宜用来鉴定脂肪，这小麦种子不如花生种子更适宜用来鉴定脂肪，这是由于是由于 ，他计划用什么试剂鉴定他计划用什么试剂鉴定? . 适宜于鉴定蛋白质的是适宜于鉴定蛋白质的是 ，理由，理由是是 ，鉴定所用的试剂是，鉴定所用的试剂是 。 3. 3. 讨论讨论: : 做生物组织中可溶性复原糖、脂肪、蛋做生物组织中可溶性复原糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验时，需求根据实验需求选择不同的白质的鉴定实验时，需求根据实验需求

18、选择不同的实验资料。清根据下表所列各种资料回答以下问题实验资料。清根据下表所列各种资料回答以下问题：梨梨 颜色为白色，并且糖含量较高颜色为白色，并且糖含量较高 本尼迪特、斐林试剂或班氏试剂本尼迪特、斐林试剂或班氏试剂脂肪含量不如花生高，也不容易做切片脂肪含量不如花生高，也不容易做切片 用苏丹用苏丹或苏丹或苏丹试剂试剂黄豆和花生黄豆和花生 蛋白质含量高蛋白质含量高 双缩脲试剂双缩脲试剂1 1、某些单子叶植物，如韭菜、鸢尾的叶子内含有大、某些单子叶植物，如韭菜、鸢尾的叶子内含有大量的可溶性复原糖，但这些单子叶植物的叶子不宜作实量的可溶性复原糖，但这些单子叶植物的叶子不宜作实验资料，缘由是：验资料，

19、缘由是：这些叶子的颜色较深，对复原性这些叶子的颜色较深，对复原性糖与斐林试剂的颜色反响起遮盖作用糖与斐林试剂的颜色反响起遮盖作用 、以下哪组试剂在运用过程中，必需加热：、以下哪组试剂在运用过程中，必需加热：A.A.本尼迪特试剂鉴定可溶性复原糖的过程中本尼迪特试剂鉴定可溶性复原糖的过程中B.B.苏丹苏丹染液在鉴定动物组织中的脂肪时染液在鉴定动物组织中的脂肪时C.C.双缩脲试剂鉴定蛋白质时双缩脲试剂鉴定蛋白质时D.D.碘化钾溶液鉴定淀粉时碘化钾溶液鉴定淀粉时 课堂练习课堂练习: :、某学生在鉴定脂肪的实验中，在显微镜下、某学生在鉴定脂肪的实验中，在显微镜下察看花生子叶切片，当转动细调理器时，有一察看花生子叶切片，当转动细调理器时，有一部分细胞看的清楚，另一部分较模糊，这是由部分细胞看的清楚，另一部分较模糊，这是由于于 A.A.反光镜未调理好反光镜未调理好 B. B.标本切的厚薄不均标本切的厚薄不均 C.C.细调理器未调理好细调理器未调理好D.D.显微镜物镜损坏显微镜物镜损坏 、苏丹、苏丹溶液的配制的方法是：溶液的配制的方法是：