氯霉素ELISA检测试剂盒说明书模板

1、资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。氯霉素(Chloramphenicol) ELISA检测试剂盒说明书一、概要氯霉素(chloramphenicol, CAP) 是应用广泛的抗菌素，曾对畜禽疾 病控制和治疗起到了重要作用。但 由于氯霉素存在严重的副作用，能 引起人的再生障碍性贫血，粒细胞 缺乏症等疾病，欧美等发达国家已 相继禁止或严格禁止使用。本试剂盒是应用 ELISA技术研 发的新一代药物残留检测产品，能最大限度地减少操作误差和工作强 度。操作时间仅需1.5小时。二、试验原理本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法，在酶标板微孔条上预包被偶 联抗原，样本中残留的氯霉

2、素和微 孔条上预包被的偶联抗原竞争抗氯 霉素抗体，加入酶标二抗后，用 TMB底物显色，样本吸光值与其残 留物氯霉素的含量成负相关，与标 准曲线比较再乘以其对应的稀释倍 数，即可得出样品中氯霉素的含量。三、适用范围可定性、定量检测动物组织(肌肉、肝脏等)、尿液、血清、 肠衣、牛奶、奶粉等样本中氯霉 素的残留量。四、交叉反应率氯霉素100%;琥 珀 氯 霉素92%;氯霉素-葡萄糖甘酸57%。五、使用单位需自备的设备及试剂设备：微孔板酶标仪450nm/630nm-旋转蒸发仪/氮气吹干装置均质器振荡器涡旋仪离心机天平：感量0.01g-刻度移液管：10ml-洗耳球容量瓶：100ml、500ml玻璃试管：

3、10ml聚苯乙烯离心管：10ml、15ml、50ml-微量移液器：单道20ml200ml、100ml 1000ml多道250ml试齐：-乙酸乙酯（分析纯）-乙睛（分析纯）-正己烷（分析纯）-二水合亚硝基铁富化钠（分析纯）（供奶样用）b水合硫酸锌（分析纯）（供奶样用）- 葡萄糖甘酸酶（Merck,Art.No.4114）（供尿样本用）醋酸钠（分析纯）（供尿样本用）肝素钠（分析纯）（供血样本用）-醋酸（分析纯）（供尿样本用）-去离子水六、提供的材料与试剂1、96孔酶标板X1块（包被有偶联 抗原）2、标准液><6并瓦:（2ml/瓶）0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225

4、ppb,0.675ppb,2.025ppb3 、 局浓度标准品：（2ml/瓶）100ppb4 酶 标 二抗7ml5 抗 体 工 作液7 ml6 、底物液A液7ml7 、底物液B液 7ml8 终止液7ml9 、20X浓缩洗涤液40ml10 、2 X浓缩复溶液 50ml七、溶液的配制配液1: C液（供奶样专用） 0.36M二水合亚硝基铁富化钠（Na2Fe（CN）5 NONH2O）溶液称取10.7g二水合亚硝基 铁富化钠加去离子水溶解定容 至 100ml。配液2: 口液（供奶样专用）1M 七水合硫酸锌（ZnSO4 7H2O）溶液称取28.8g七水合硫酸锌加 去离子水溶解定容至100ml。配液3: p

5、H4.8 100mM醋酸钠溶液（供尿样本用）称取2.4g醋酸钠，加入1.2ml醋酸，再加去离子水溶解定容至500ml配液4:乙睛-水溶液量取84ml无水乙睛加入配液5:复溶工作液用去离子水将2 X浓缩复溶液按1:1体积比进行稀释（1份2X 浓缩复溶液+1份去离子水）用 于提取样本的复溶，复溶工作 液在4 C环境可保存一个月。配液6:洗涤工作液用去离子水将20X浓缩洗涤液按1: 19体积比进行稀释（1份20祢缩洗涤液+19份去 离子水）用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在 4C环境可保存 一个月。八、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时,都必须注意：（a）实验中必须使用一次性吸头， 在吸取不同的

6、试剂时要更换 吸头。到16ml去离子水中混匀实验结果（b）实验之前须检查各种实验器 具是否洁净，必须使用洁净 实验器具，以避免污染干扰(c)处理样本的同时，做空白试 剂对照，样本的测定结果减 去空白试剂的测定结果为样 本中氯霉素的实际残留量。组织样本空白对照试剂的制备4ml乙酸乙酯在 氮气流下完全干燥；用1ml正己烷充分溶解；-加入1ml复溶液工作液(见配液 5),强烈振荡 1min,静置分层后去除上 层正己烷相；取100ml水相用于 分析。(d)未处理的样本冷冻保存。(e)处理后的样本可在 2-8 C避 光保存24h。未加正己烷之 前，吹干的样本保存效果 更好。(f)处理后的样本，如出现乳化

7、 现象，可在去除部分上层有机相，60 c水浴5 10min消除乳化后，再重复 离心步骤。(一)组织(鸡肉/肝、 猪肉/肝、 虾、鱼等)前处理方法-用均质器均质组织样本；称取3.0 =0.05g均质物至 50ml聚苯乙烯离心管中，加入6ml 乙酸乙酯，用振荡器振荡 10min, 3000g 以上，室温 (20-25 C )离心 10min;-移取4ml上层有机相(约相当 于2g的样本)至10ml干净的 玻璃试管中，于5060c水浴 氮气流下吹干；加入1ml正己烷，用涡旋仪涡 动30s,再加1ml复溶工作液 (见配液5),用涡旋仪涡动1min, 3000g 以上，室温 (20-25 C )离心 1

8、5min;-除去上层有机相，取下层 100ull用于分析。注：在检测动物肝脏样品时，加入1ml正己烷溶解干燥的残留物 ， 再加1ml复溶工作液后，只需振 荡10s,离心后取下层即可分析； 在检测高脂肪样本时正己烷用量可加大2ml 3ml。（二）鸡血前处理方法用加有肝素钠（20-30单位/ml 血）的离心管采集鸡血样本 （建议采血注射器也用肝素钠 润洗），血样本室温静置1h,待析出血浆后，3000g以上, 15 c 离心 10min;取1ml血浆至10ml聚苯乙烯离 心管中，加2ml乙酸乙酯振荡 1min;-室温（20-25 C ）下静置待水相 与有机相完全分层或 3000g以 上，室温（20-25 C）离心5min;移取上层的有机相至15ml干 净的玻璃试管中，于5060c 氮气流下吹干；干燥的残留物加入 1ml复溶工 作液（见配液5）,用涡旋仪涡动2min溶解干燥的残留物；取100ml用于分析。（三）尿液前处理方法将尿液于3000g以上，室温（20-25 C ）离心 5min,直至尿 液样本清亮；移取2ml清亮尿液样本至 50ml 聚苯乙烯离心管中，力口 0.5ml pH4.8 100mM 醋酸钠缓冲液 （见配液3）混合；-加40ml葡萄糖甘酸酶 （Merck,Art.No.4114）至稀释 的 尿液样本中，置37c水解至少 2h（或过夜