模拟运输过程中机械伤对苹果生理及品质的影响

1、模拟运输过程中机械伤对苹果生理及品质的影响（王宇星2009236134，洪海冰2009236131，庄晓曼2009236132，洪纳熙2009236128，林铮2009236130，张少映2009236127）11实验目的果蔬在运输过程中避免不了受到一些机械伤。本实验拟在通过模拟苹果运输过程中的机械伤对果蔬采后生理及品质的影响。1.2实验原理利用坠落损伤模拟果蔬运输过程中对果蔬造成的各种如碰撞、擦伤一类的机械伤所造成的一系列生理及品质上的影响。通过测定果蔬受到机械伤前后及不同程度机械伤之后其可溶性固形物变化、电导率变化、重量变化、褐变程度、硬度变化、过氧化物酶活性不同的变化。1.3实验前处理编

2、号为1、2、3、4号苹果为经过坠落损伤的苹果，参照苹果为不经过任何处理的。取四个大小形状比较相近的苹果，对其进行不同程度的摔伤（编号为1、2、3、4号的苹果分别从高度为1米处做自由落体运动1、2、3、4次，参照组不做任何处理）。并配置一个放置在正常环境下的参照苹果，不对其进行机械伤害操作，并放置一个小时。之后对苹果进行各种理化性质的测量。2可溶性固形物测定及电阻变化的测定2.1仪器的校正 打开手持式折光仪盖板，用擦镜纸或棉花小心擦干棱镜玻璃面。在棱镜玻璃面上滴2滴蒸馏水，盖上盖板。朝向光源明亮处，于水平状态，从接眼部处观察，并旋动刻度调节螺旋，使分界线面刚好落在零线上。2.2操作过程打开盖板，

3、将水擦干，在棱镜玻璃面上滴2滴果蔬汁，朝向光源明亮处观测，读取视野中明暗交界线上的刻度，即为果蔬汁中可溶性固形物含量（%）。重复操作测定苹果的机械伤部位可溶性固形物含量及没受伤部位的可溶性固形物含量。应万用电表调节到欧姆档，将两季扎入苹果对称部位，在机械损伤前测一次，于机械损伤1h后再测一次。2.3记录并整理数据。苹果编号1234参照撞击前可溶性固形物含量（%）1616181614.5撞击部位可溶性固形物含量（%）1312.51411.5撞击前电阻（欧姆，K）120125120130110撞击后电阻（欧姆,K）1351401501203重量变化及褐变程度的测定3.1重量变化的测定：将苹果置于电

4、子天平上测量其未受机械伤之前的质量，1h之后再测量苹果受机械伤厚的质量。3.2褐变程度：将受到机械伤的苹果核参照苹果一同放置在相同环境下12h，肉眼观擦其褐变比例，记录并整理数据。苹果编号1234参照最初重量（g）214.7082211.1192200.4265192.6292187.0495损伤后重量（g）214.4012210.7027199.8622192.0030187.0283最初褐变程度（%）00000最终褐变程度（%）5%11%16%18%1%4硬度变化预先在果实对应两面的最大横径处(果实腰部)薄薄削去一层皮(削皮的厚度、面积以刚露出果肉，略比测头大些即可)，用一手握果实，另一手

5、握住硬度计，将果实硬度计的探头垂直地对准果面测试处，缓慢施加压力，使测头插入果实到测头顶端部分压人果肉时为止（至规定的标线），即可在指示器上读出硬度值。重复操作测定苹果的机械伤部位硬度及没受伤部位的硬度。苹果编号1234参照撞击前硬度9.09.59.08.58.5撞击后硬度2.52.51.51.55过氧化物酶活性变化5.1原理 过氧化物酶（peroxidase,POD）是植物体内普遍存在的、活性较高的一种氧化还原酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等生理过程和生化代谢过程都有密切关系，在果蔬生长发育、成熟衰老、病原菌感染、贮藏加工条件改变时，其活性不断发生变化。在有过氧化氢存在下，过氧化物

6、酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在470 nm处有最大吸收，可用分光光度计测量 470 nm 的吸光度变化测定过氧化物酶活性。 5.2实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 苹果 （二）试剂配制 1、1/15 M、pH 6.0 磷酸缓冲液（提取缓冲液）：A液：1/15 M Na2HPO4溶液，取2.3876 g Na2HPO4 溶于100 mL 蒸馏水中；B液：1/15 M NaH2PO4溶液，取2.0801 g NaH2PO4 溶于100 mL 蒸馏水中；取A液10mL 与B液90mL摇匀混合。2、0.1mol/L、pH 5.5 醋酸-醋酸钠缓冲溶液：A液：0.2M 醋酸溶液：量

7、取11.55mL 冰醋酸，加蒸馏水稀释至1000mL；B液：0.2M 醋酸钠溶液：称取16.4g 无水醋酸钠（或27.2 g 三水合醋酸钠），加蒸馏水溶解后定容至1000mL；取68 mL A液与 432 mL B液混合，调节pH至5.5，加蒸馏水稀释至1000mL。3、0.08 H2O2溶液： 取30过氧化氢2.67ml 稀释到100ml 混匀后即成母液，可放置于冰箱内保存3天，临用时再从母液取10ml稀释到100ml即为工作液；4、0.1 邻甲氧基酚溶液（愈创木酚）：取0.1g邻甲氧基酚溶于100ml蒸馏水中；或配制25mmol/L愈创木酚溶液：取320微升愈创木酚，用pH 5.5 醋酸缓

8、冲溶液稀释至100mL。（三）仪器设备 分光光度计，研钵，恒温水浴锅，100ml、1L容量瓶，吸管，移液管、离心机。 5.3实验步骤 粗酶液提取：取样品1克，加入适量pH 6.0磷酸缓冲液研磨成匀浆，转入100ml容量瓶，用pH 6.0 磷酸缓冲液定容至刻度。于30水浴中保持30min，中间搅动数次。用4层纱布过滤，滤液装入50ml离心管中，于4，10000rpm离心15min，过滤上清即得粗酶液。酶活测量：把1ml pH 5.5 醋酸缓冲溶液、1ml粗酶液（如酶活性过高可稀释）、1ml 0.1邻甲氧基酚溶液加入到10ml具塞刻度试管中，混匀，置于30 水浴中5分钟左右，使温度达到平衡，加入1

9、ml 0.08H2O2溶液（加入时立即开始计时），摇匀并迅速倒入比色皿于470nm比色，在反应1min时记录O.D值。参比液用1ml水代替0.08H2O2。5.4实验结果POD酶活性表示方式：以A值直接表示其相对活性，单位为A470nm/1min gFW 。注意：加入过氧化氢后要迅速比色，如不能在1min时读数，可采用下列方式：在反应混合液中加入过氧化氢后后，立即开启秒表记录时间，于分光光度计上测量波长 470 nm 下的吸光度值，每隔 1min 读数一次，共记录4min。 以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以 A 470nm/min gFW表示之。也可以用每min内A 470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位（u）表示。 过氧化物酶活性 u/g.min= A470 × VT W×Vs×0.01×t 式中： A470反应时间内吸光度的变化。 W 样品重，g。 VT 提取酶液总体积， mL。 Vs 测定时取用酶液体积, mL。 t 反应时间，min。5.5实验数据苹果样品1234A470nm0.1190.1270.1380.1456实验结论苹果撞