树舌灵芝多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

1、 安徽大学江淮学院本科毕业论文 题目：树舌灵芝多糖的分离纯化及抗氧化活性研究 学生姓名：张珊 学号： 01124022 系 别： 理工部 专业：生物科学 入学时间： 2012 年09 月 导师姓名：吴庆喜 职称/学位： 讲师 /博士 导师所在单位： 安徽大学生命科学院 完成时间： 2016年04 月 树舌灵芝多糖的分离纯化及抗氧化研究 摘 要目的：研究树舌灵芝多糖的分离纯化及抗氧化作用。方法：利用传统的水提醇沉的方法得到粗多糖，采用超滤的方法进行分离纯化，得到单一组分多糖,并从分子量大小,红外光谱,单糖组成等进行简单的表征分析,进一步研究了单一组份多糖对羟自由基，DPPH自由基清除能力。 结果

2、：分离纯化得到单一组分的糖GT-2分子量为5.04×103，红外光谱分析表明树舌灵芝多糖GT-2具有典型的多糖吸收峰是-葡萄吡喃糖，单糖组成得到五种单糖的摩尔比为1：3.3: 6.2：14.35：17。结论：用超滤得到的单一组分的多糖GT-2分子量较小，蛋白质含量较少，具有典型的多糖吸收峰，由甘露糖，葡萄糖醛酸，葡萄糖，半乳糖，阿拉伯糖组成，抗氧化研究表明具有很强的抗氧化能力。关键词：树舌灵芝多糖；超滤；抗氧化作用；表征分析 Purification and Antioxidant Activity of Ganoderma lucidum Polysaccharides Isola

3、ted Tree TongueSummaryObjective: To study the water-soluble polysaccharide Purification and antioxidant effects. Methods:The traditional water extraction and alcohol precipitation method obtained crude polysaccharide, were isolated and purified by ultrafiltration method, single component polysacchar

4、ide, and carries on the simple characterization analysis from the size of the molecular weight, infrared spectroscopy, monosaccharide composition, the further study of the single component polysaccharide on hydroxyl radical, DPPH free radical scavenging ability.Result: Separation and purification of

5、 get single group of sugar GT-2 molecular weight is 5.04 x 103 and infrared spectrum analysis showed that Ganoderma applanatum polysaccharide GT-2 is typical of the polysaccharide absorption peak is beta - Grape pyranose and monosaccharide compositions were the molar ratio of five kinds of monosacch

6、aride 1:3.3: 6.2:14.35:17. Conclusion: Obtained by ultrafiltration single group of polysaccharide GT-2 molecular weight smaller, less protein content, with the typical absorption peak of the polysaccharide, composed of mannose, glucuronic acid, glucose, galactose, arabinose, antioxidant research sho

7、w has very strong antioxidant ability.Keywords:Ganodermalucidum;Ultrafiltration;Antioxidant;Characterization and Analysis目录1 引言1 1.1 树舌灵芝的研究1 1.2 树舌灵芝多糖功能活性研究1 1.3 树舌灵芝多糖的分离纯化研究进展1 1.4 本课题研究的意义及目的22 材料、试剂和仪器3 2.1 材料3 2.2 试剂3 2.3 仪器设备33 方法3 3.1 原材料的处理3 3.2 树舌灵芝多糖的提取3 3.3 树舌灵芝多糖的分离纯化3 3.4 树舌灵芝多糖单一组分的简

8、要表征分析3 3.4.1 树舌灵芝多糖紫外扫描3 3.4.2 单一组分灵芝多糖总糖含量测定4 3.4.3 分子量测定HPLC法4 3.4.4 单糖组成4 3.4.5 红外光谱4 3.5 树舌灵芝多糖单一组分的抗氧化研究4 3.5.1 对DPPH清除作用4 3.5.2 对羟基自由基清除作用5 3.6 数据处理54 结果与分析5 4.1 树舌灵芝多糖含量的测定5 4.1.1 葡萄糖标准曲线5 4.2 树舌灵芝多糖紫外扫描分析6 4.3 分子量测定分析6 4.4 单糖组成分析8 4.5 红外光谱分析9 4.6 抗氧化作用的研究9 4.6.1 对DPPH清除作用分析10 4.6.2 对羟基自由基清除作

9、用分析115 结论与展望12主要参考文献14致 谢151引言1.1树舌灵芝的研究 灵芝又称灵芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。根据我国第一部药物专著神农本草经记载：灵芝有紫、赤、青、黄、白、黑六种，性味甘平。灵芝原产于亚洲东部，中国古代认为灵芝具有长生不老、起死回生的功效，视为仙草。树舌灵芝为灵芝科（Ganodermataceae）灵芝属（Ganoderma Karst)高等真菌，世界广布种。近年来，随着树舌灵芝化学成分及药理活性不断研究树舌灵芝已引起国内外学者的广泛关注。现代医学和药理研究证明，树舌灵芝的主要有效成分多糖，三萜类化合物和甾醇类化合物都具有重要的生理

10、活性，树舌灵芝有效成分作为新药在临床应用上将占一定的位置1。树舌灵芝药用可见于中国药用真菌图鉴和长白山植物药志，其性平，微苦，能抗癌，止痛，清热，化积，止血，化痰，消炎解毒，临床多用于治疗乙型肝炎，食道癌，肺结核，神经衰弱等，在我国和日本民间作为抗癌药物应用已久2。1.2树舌灵芝多糖功能活性研究 树舌灵芝多糖中含有多种化学成分，国内外工作者通过对树舌灵芝菌丝体和子实体的深入研究，迄今为止从中分离出了多糖，甾体化合物，三萜类化合物，脂类，有机酸等1，本课题主要以多糖研究为主。 Nakashima S.等3研究认为树舌灵芝多糖制剂能增强小鼠对蛋白抗原的迟发过敏性反应的诱导作用，同时能扩大T细胞对I

11、gQ抗体反应的记忆范围。（提高免疫力） 于英君等4研究表明树舌灵芝多糖GF对脾细胞增殖作用有一定的量效关系，一定浓度下GF对产生IgM的抗体生成的细胞数有抑制作用，但较环磷酰胺弱。GF对脾脏的重量有增加作用说明GF有刺激脾脏细胞增殖作用，从一定意义上来说树舌灵芝多糖GF有改善免疫系统内环境的作用。 高斌等5研究表明，树舌灵芝多糖（经鉴定总糖含量为97.8%，属于葡聚糖）在体外可协同ConA激活T淋巴细胞增殖效应协同ConA诱导Th细胞产生IL-,-IFN。在体内可增强ConA诱导T淋巴细胞增殖效应。增强Th细胞产生-IFN的能力。说明树舌灵芝多糖在体内外均促进Th细胞的功能。（抗肿瘤） 在本实

12、验室前期的研究中发现粗多糖的抗氧化活性较高，且多糖组分较复杂，肯定存在一种有效活性组分多糖。对于寻找这种单一组分的多糖对于树舌灵芝多糖的研究意义巨大。1.3树舌灵芝多糖的分离纯化研究进展 多糖为灵芝属真菌经提取所得到的有效成分之一，受到医学工作者的重视，研究报道也最多，灵芝多糖一般采用热水或稀碱提取，提取时间不宜过长，以防止多糖水解6。 Sasaki T等7采用乙醇和十六烷基三甲基氢氧化铵分布沉淀法，从树舌灵芝水提取物中分离出一种多糖类物质G-Z。将完全酸水解后，能检测D-葡萄糖以及微量的木质糖，该糖经鉴定为葡萄糖。我国学者梁忠岩等8对树舌多糖结构也进行了深入研究。由CF1脱色得多糖CF1a，

13、并测得其分子量为14万，研究表明，CF1a有多末端或多16连接，核心结构不被氧化的。 Mizuno .T等9对水提树舌灵芝总多糖的组成进行了深入的研究，结果表明树舌灵芝多糖主要有半纤维素，纤维素，果胶以及溶于低浓度醇的多糖和水溶性多糖组成；将多糖完全酸水解后可得到D-葡萄糖，D-半乳糖，D-甘露糖，L-岩藻糖，L-阿拉伯糖，D-木糖和D-半乳糖醛酸。 许多报道表明树舌灵芝多糖采用了不同的分离纯化方法，对使用超滤法分离纯化的研究较少，本文使用超滤法对树舌灵芝粗多糖进行分离纯化。超滤的优点有：使用寿命长，产水品质高，适用范围广，运行费用低。超滤的机理是指由膜表面机械筛分、膜孔阻滞和膜表面及膜孔吸附

14、的综合效应，以筛滤为主。超滤膜筛分过程，以膜两侧的压力差为驱动力，以超滤膜为过滤介质，在一定的压力下，当原液流过膜表面时，超滤膜表面密布的许多细小的微孔只允许水及小分子物质通过而成为透过液，而原液中体积大于膜表面微孔径的物质则被截留在膜的进液侧，成为浓缩液，因而实现对原液的净化、分离和浓缩的目的。1.4本课题研究的目的及意义 本文所用材料是野生树舌灵芝，从安徽霍山深山采集，长28cm左右宽35cm 左右，前期实验发现粗多糖的活性较高，本文对粗多糖采用超滤法进行分离纯化得到某一低分子量的单一组分的糖。并研究此低分子量单一组分的糖的抗氧化活性。并且对单一组分的简单结构表征与活性进行研究为后期构效关

15、系深一步研究奠定基础。 图一：野生树舌灵芝Figure 1: Wild Ganoderma lucidum Ganoderma lucidum2材料、试剂和仪器2.1材料野生灵芝于2016年2月在安徽霍山获得，经安徽大学沈业寿教授鉴定为树舌灵芝。2.2试剂1. 无水乙醇：上海振业化工有限公司2. 三氯甲烷：国药集团化学试剂有限公司3. 正丁醇：上海申博化工有限公司4. DPPH：梯希爱（上海）化成工业发展有限公司5. 甲醇：国药集团化学试剂有限公司6. Vc：天津市光复精细化工研究所7. 硫酸亚铁：无锡市展望化工试剂有限公司8. 水杨酸：国药集团化学试剂有限公司9. 双氧水：国药集团化学试剂有

16、限公司2.3仪器设备（1）电子天平：上海越平科学仪器有限公司（3）DK-S24型电热恒温水浴锅：上海精宏实验设备有限公司（4）台式离心机：德国Heraeus公司（5）旋转蒸发仪：巩义市予华仪器有限责任公司（6）TD5A-WS台式低速离心机：长沙湘仪离心机仪器有限公司（7）冷冻干燥机：德国CHRIST生产（9）冰箱：荣事达（10）烘箱：上海精宏实验设备有限公司 (11) 紫外可见分光光度计 瑞典Pharmacia Biotech（12） TU-1901双光束紫外可见光光度计 普析公司3方法3.1 原材料的处理 取一小块树舌灵芝，用打碎机将其打碎呈粉末状，用保鲜袋分装存放于4冰箱中。3.2树舌灵芝

17、粗多糖的提取取灵芝粉末热水法浸提多糖过滤去除滤渣收集上清液上清液浓缩浓缩液中加乙醇沉淀离心收集沉淀加水复溶除蛋白（三氯甲烷：正丁醇）透析冷冻干燥得粗多糖3.3树舌灵芝粗多糖的分离纯化采用超滤的方法，使用分子量为5000的超滤膜收集超出来的溶液进行旋转浓缩冷冻干燥，得到单一组分的多糖将其命名为GT-2,放在干燥皿中保存备用。3.4树舌灵芝多糖的单一组分简要表征分析3.4.1树舌灵芝多糖紫外扫描配置1mg/mL的树舌灵芝粗多糖溶液,用TU-1901双光束紫外可见光光度计在200-700nm范围内进行扫描。3.4.2单一组分灵芝多糖总糖含量测定苯酚硫酸法测总糖含量，用葡萄糖为标准单糖制作标准曲线，样

18、品得到的吸光值根据标准曲线计算出多糖含量。1）制作标准曲线（1）标准曲线的制作使用标准葡萄糖配制1 mg/mL的葡萄糖溶液100 mL；（2）分别取出0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL标准的葡萄糖溶液放于各个试管中,随后用纯水补至1mL；（3）依次吸取1 mL 6%的苯酚溶液和5.0 mL的浓硫酸,将其震荡混匀,室温放置15 min；（4）利用紫外分光光度计测吸光度(0D),测定波长为490 nm,纯水为空白组调零,记录各个浓度的标准葡萄糖的吸光值；（5）设定三组平行实验,取其平均值。标准曲线制作方法:横坐标为多糖含量,0D值为纵坐

19、标。2）样品糖含量测定（1）吸取适当浓度分离纯化后的树舌灵芝多糖样品溶液1.0mL, J加入去离子水1.0mL，使其在490nm的吸光值在0.5-1.0之间适宜。（2）按上述步骤操作，紫外分光光度计490nm测OD值，根据标准曲线回归方程得到相应的样品糖含量。总糖（%）= （样品糖含量/所取样品总重量）×100%3.4.3分子量测定（HPLC法） 用高效液相色谱法分析提取的树舌灵芝多糖中有多少种不同的组分以及各不同组分的分子量的大小。利用高效液相色谱法测定树舌灵芝多糖的分子量和纯度，精确称取树舌灵芝多糖样品，配制成一定的浓度。准确配制2 mg/mL标准葡聚糖2000、DextranT

20、-10、DextranT-40、DextranT-70、DextranT-100标准溶液，高效液相色谱（HPLC）结合蒸发光散射检测器（ELSD）测定标准品的保留时间。以横坐标为保留时间t，纵坐标为标准葡聚糖分子量的自然对数logMW9，绘制相对分子质量标准曲线。微孔过滤膜过滤，上样量为10 L，使用UItrahydrogelTM 1000 色谱柱（300×7.8 mm）,柱温设定为30 oC，流动相使用超纯水，流速设定为1.0 mL/min，漂移管温度110，物化温度30，氮气流速1.6 L/min。3.4.4单糖组成 采用高效液相色谱法对树舌灵芝多糖GT-2中单糖组成进行分析。精

21、确称取树舌灵芝多糖GT-2（10 mg）溶于5 mL的2 mol/L的三氟乙酸（TFA）中，充氮气封管，在110 下水解8 h。用旋转蒸发器于50 将所得溶液浓缩以及除去过量酸，直到所得水解产物是中性的。之后，所获得的中性水解产物中加入1mL蒸馏水，并准备用于以下的实验。单糖的PMP柱前衍生化进行根据文献8适当修改。标准单糖和经水解的样品与混合50 L甲醇的PMP（0.5 mol/L）和50 L的氢氧化钠（0.3 mol/L）在70 oC水浴锅中水域30 min。将反应混合物用50 L的0.3 mol/L的HCl中和到中性。所得产物用HPLC结合紫外检测器进行分析。HPLC的操作条件如下：流动

22、相A为磷酸盐缓冲液的混合物（50 mmol/L） - 乙腈（85：15，V/V）,流动相B为磷酸盐缓冲液的混合物（50 mmol/ L）-乙腈（60：40，V/V），使用梯度洗脱，流动相B的梯度为15%-23%-15%，与此同时，时间梯度为0-20-35 min。柱温为25 ，色谱柱为Zorbox Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 m），检测器波长为245 nm，进样量为10 L。3.4.5红外光谱 采用KBr压片法对分离纯化得到的树舌灵芝多糖GT-2的红外光谱分子结构分析。称取预先干燥好的光谱纯KBr，压成薄片作为空白对照调整基线。称取1-2 mg树

23、舌灵芝多糖GT-2和100-200 mg KBr在研钵里研磨均匀，用压片机压成薄片，在4000-400 cm-1的频率范围内进行测定。3.5 树舌灵芝多糖的抗氧化研究以下实验均同时设立VC为阳性对照。本实验将树舌灵芝粗多糖和单一组分的多糖GT-2的母液浓度配置成400g/ml，设定的多种浓度梯度为：25 g/ml，50 g/ml，100 g/ml，200g/ml，300 g/ml，400 g/ml，然后分别取相同体积的不同浓度梯度的多糖，可以达到设定浓度梯度的目的。3.5.1对DPPH清除作用 （ 1）原理： 1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)，是一种暗紫色的大棱柱形晶体,能稳定存在

24、于有机溶剂中，在517nm下具有吸光值。在DPPH自由基与抗氧化剂的反应过程中，自由基的颜色会由深变浅，吸光值大小也会逐渐的减少，按照清除率公式的计算方法，吸收值减少的越多清除率就越高，代表其抗氧化能力越强，因此对DPPH的清除作用可以作为鉴定其抗氧化能力的指标。（2）方法：用95%的乙醇配制2 mmol/L的DPPH溶液,取11支具塞试管(10 mL)，在l0 mL试管中加入2 mLDPPH和2 mL一定浓度(0.1 mg/mL-5.0 mg/mL)的多糖溶液,混合均匀后，黑暗中室温反应30 min, 517 nm比色测吸光值，Vc做阳性对照实验结果重复3次。利用下列公式计算其清除率：清除率

25、(%) =A0-（A1-A2）/A0 ×100A1 =2 mLDPPH+2 mL多糖溶液；A2=2 mL多糖溶液+2mL去离子水；A0 =2mLDPPH+2mL去离子水。其中A0是对照组吸光值，A1是实验组吸光值，A2是样品本底吸光值。按照上式计算出多糖对DPPH的清除率，清除率越大抗氧化能力越大。3.5.2 对羟基自由基的清除作用（ 1）原理：Fenton 反应产生OH ，反应式如下H2O2+Fe2+OH-+OH-+Fe3+ 羟自由基氧化水杨酸得到2,3二羟基苯甲酸，用其在510nm 处的吸光值表示OH 的多少。吸光值与OH的量成正比。反应体系中加入具有清除OH 作用的物质即可降低

26、该吸光值。羟基自由基是生物体内最活'泼,最具有攻击性、毒性最大的自由基,对人体的危害很大,是细胞坏死或者发生突变的原因之一。因此,以对羟基自由基清除率为评价多糖的抗氧化能力也具有重要的意义。（2）方法：取10 mL具塞试管，各加入9 mmol/L FeS04 1 mL, 9 mmol/L水杨酸-乙醇溶液2 mL，加入一定浓度(0.l mg/mL-5.0 mg/mL)的多糖溶液2 mL，最后加入8.8 mmol/LH2O2 2 mL启动反应，水浴3730 min，在510 nm波长比色测吸光值，Vc做阳性对照，记录数据,实验重复3次，并以下列公式计算多糖对羟基自由基的清除率：清除率(%)

27、 =A0-（A1-A2）/A0 ×100A0为空白对照以去离子水代替多糖溶液，A1是实验组吸光值，A2用去离子水代替H2O2作样品的本底比色吸光值。3.6数据处理每组实验均设定三个平行实验，结果求平均值。利用Origin 7.5绘图。4结果与分析4.1树舌灵芝多糖含量测定4.1.1葡萄糖标准曲线制作根据数据得到下图图2：苯酚-硫酸法测定总糖含量标准曲线Figure 2: phenol - sulfuric acid method for determination of total sugar content of standard curve以标准葡萄糖为参照制作标准曲线图2，葡萄

28、糖含量为横坐标，吸光值为纵坐标，得到公式：y=0.0133x+0.0015，当y=1.308时，x=98.23，总糖（%）= （样品糖含量/所取样品总重量）×100%所以多糖含量为：98.23。4.2树舌灵芝多糖紫外扫描 图3： 树舌灵芝多糖GT-2紫外扫描图谱 Figure.3：Ultraviolet scanning of Ganoderma lucidum polysaccharides GT-2 将树舌灵芝多糖在200-700 nm范围内进行扫描，由图2可知，树舌灵芝多糖在260 nm处吸收峰不明显，因此可以得出树舌灵芝多糖中几乎无核酸存在；多糖在400 nm处无吸收峰，因此

29、可以得出树舌灵芝多糖中蛋白质含量也是微乎其微的。4.3分子量测定分析 我们根据已知分子量的葡聚糖绘制的标准曲线如下：图中R²=0.99194，y=-0.76054x+11.426。图 4：树舌灵芝多糖GT-2的分子量标准曲线 Figure 4：Molecular weight standard curve of Ganoderma lucidum polysaccharides GT-2 图 5：树舌灵芝多糖GT-2高效液相色谱图 Figure. 5：High performance liquid chromatogram of Ganoderma lucidum polysacch

30、arides GT-2树舌灵芝多糖经HPLC检测，如图5所示，峰形为单一对称峰，可见树舌灵芝多糖是纯度较好的多糖样品，为下一步实验提供了保证。将保留时间带入标准曲线，求得树舌灵芝多糖的分子量为5.04×103Da4.4单糖组成分析图6：树舌灵芝多糖GT-2的单糖组成图谱Figure. 6：Composition of GT-2 from Ganoderma lucidum and Ganoderma lucidum polysaccharides注：从图中可以定性和定量分析出GT-2的单糖组成和单糖的比例。A代表的是溶剂峰，B代表的是甘露糖，C代表的是葡萄糖醛酸，D代表的是葡萄糖，E

31、代表的是半乳糖，F代表的是阿拉伯糖。可以看到GT-2中总共有5种单糖，阿拉伯糖较少。阿拉伯糖：半乳糖：葡萄糖：葡萄糖醛酸：甘露糖的摩尔比为 1：3.3: 6.2：14.35：17。4.5红外光谱分析用红外光谱仪绘图如下：图7：树舌灵芝多糖GT-2傅里叶红外光谱分析图谱 Figure. 7：Ganoderma lucidum polysaccharides GT-2 Fourier transform infrared spectroscopy analysis由图7可知，树舌灵芝多糖GT-2具有典型的多糖吸收峰。在3400-3300cm-1带出现O-H键的伸缩振动，吸收带宽而圆滑，这是由于分子

32、间缔合成氢键的原因，缔合体越多，吸收带越向低频率方向移动。2925cm-1处代表了糖类物质的C-H键的伸缩振动。1643cm-1处是多糖和水的混合物所特有的吸收峰。1413cm-1和1024cm-1处是C-H键的变角振动峰。在578cm-1处出现吸收峰，代表-D-Glc吡喃构型的端C-H的变形振动特征吸收峰，说明样品是-葡萄吡喃糖。4.6 抗氧化作用的研究4.6.1 对DPPH清除作用分析在波长为517nm时，比色，再根据清除率公式计算，绘图如下：图8：树舌灵芝多糖GT-2对自由基的清除Figure8: Ganoderma lucidum polysaccharides GT-2 on DPP

33、H scavenging 从图8中可以看出：在25g/mL-400 g/mL浓度范围内阳性对照组Vc对DPPH自由基的清除率随着浓度的递增而增加，清除效果明显，清除率保持在93%左右，最高清除率为93.4%。树舌灵芝粗多糖对DPPH自由基的清除率随着浓度的递增不断的增加，清除效果较明显。并且，很容易看出：在相同浓度下，Vc的清除率总是高于树舌灵芝粗多糖的清除率，即相同浓度条件下，Vc的清除作用更明显。而单一组分的多糖GT-2的清除率也位于较高水平，其浓度为400 ug/mL时最高清除率为90%，清除率介于树舌灵芝粗多糖和Vc之间，清除效率也较为明显。说明树舌灵芝多糖GT-2对DPPH自由基的清

34、除作用较明显。4.6.2对羟基自由基清除作用分析在波长为510nm时，比色，再根据清除率公式计算，绘图如下：图9：树舌灵芝多糖GT-2对羟自由基的清除 Figure 9： Ganoderma lucidum polysaccharides GT-2 on OH scavenging从图9中可以看出：阳性对照组VC对羟自由基的清除率随着浓度的递增，也不断的增大，清除效果明显，当浓度为100g/mL-400g/mL之间清除率保持在92%左右。并且，很容易看出：在相同浓度下，Vc的清除率总是高于单一组分的多糖GT-2和树舌灵芝粗多糖的清除率，即相同浓度条件下，Vc的清除作用更明显。而树舌灵芝粗多糖的

35、清除率始终位于低水平，其最高清除率才只有32.4%，说明在此浓度下，树舌灵芝粗多糖对羟自由基的清除作用不明显。单一组分的多糖GT-2的清除率也随着浓度的增加不断增加，说明单一组分的多糖GT-2的清除效果明显。5 结论与展望在超滤法分离纯化树舌灵芝多糖的过程中得到单一组分的糖再测定这个单一组分的糖活性发现糖活性较高，综合整个实验的设计及最终结果来看，本实验在设计上还存在一些缺陷，比如称量的过程、旋转蒸发的过程难免有误差存在，超滤法也存在一定的缺点比如降低了出水压力和流量；去除水碱、水垢的功能较弱；在高硬度(170mg/L以上)水质的地方不宜单独使用。在这些方面还要不断加强改进，才能为下次实验做好

36、铺垫，得出更加理想的效果。此外，通过抗氧化的实验结果可以看出，作为阳性对照的VC具有十分高效的自由基清除率，抗氧化性非常高,树舌灵芝多糖GT-2对DPPH的清除作用也较强，抗氧化性较高。单一组分的糖也具有十分高效的自由基清除率。除此之外，在人体外的确存在一些物质，它们能够在体外抗自由基。对这些体外抗氧化的物质进行发现与研究，将会为体内抗氧化的进一步研究利用有着基础意义。在目前如何有效地利用树舌灵芝多糖在药理上的价值。经过实验发现，树舌灵芝多糖具有抗氧化活性，并且在一定程度上能够有效的清除自由基，是一种新的体外抗氧化的物质，具有很广阔的研究前景。相信随着对树舌灵芝多糖的进一步研究和认识，人类能够得到更多更可靠的关于抗氧化方面的信息，在药用，食品和化妆品上多有很大功效，并以此来增强人类体质，治疗多种由自由基所引发的疾病，从而为人类健康服务。主要参考文献1刘英杰。树舌灵芝液体深层发酵菌丝体化学成分研究:吉林农业大学硕士学位论文，s646.901 ，10193.2马述清。树舌灵芝部分提