综述-单克隆抗体的研究报告进展

1、单克隆抗体的研老进畏摘要：单充P冬抗体近年来发畏迅速，并广泛应用于医学生賜学，免疫学寻多科学科。单抗药杨可用 于治疗肿凉.病舂性薦帚 心血管病以及其它痪病，尤其是用于焙疗肿瑯，己显示出良好的術景。本丈洪 阅近10年国外相关丈故，并进行整理，综述单充检抗体的研丸进展.舟重诃述用于焙疗肿疳的单克隆抗 体应用中存亦的问趁.鮮决方法以及研克的喪望。关健词：单充隆抗体；抗肿殊药场；炖疗单抗药物诒疗疾病具冇朗确的粒向性，作用机制朋确，因而具冇起效快.疗效好.副作用小等优点。 尤其是对胛殊的豹疗，能克服化疗药杨不能冇效区分正常细胞和肿场细胞.副作用丸寻缺点。同时.单丸 桂抗体体积小，能灵冇效地遗入肿荷；分孑

2、小.谄除快.累欣春性小；所甥带的洋头脱富后.可轶快彼请 除；循环中免痰枪佝结合杨对枪细胞的丸争作用小；丰表期短；哮遗性好；能哮过血脑屛障，因而还可以 作为新一代宛向我体。与化学药肠.春素、放射性核素.生杨因孑.墓因.分化诱导剖.光数和.酶寻场 质构成单丸P冬抗体宛向药賜.把杀伤肿疽细胞的活性杨质苗异的綸送列肿痫部住，利用单抗对肿疽表面相 关抗虑或特走的受体特异性识别，从而把药杨直接导向肿场细胞，提高药賜疗败，阵低药杨对循环糸统及 其他部伐的春性。1作用机创目術，单抗的作用机制并不十分朗确，通过研丸，t询认为有阻新作用.信号传导作用以及鞄向作用 等三种作用机制。1.1阻餅作用现用于临床的大部分未

3、傅联单抗主要用于勺身免茨和免疫抑制是通过阻新和调节作用丸成的。几乎 亦所有的单抗应用中，通常是通过阻斯免疫糸统的一科重要的胞茶或受体紀体相互作用而卖现的。另一科 相奏似的ft!斷活性可能存心于单抗的抗病春感染中，通过阻斯和抵谄病虑体的进入和护救态现出对机体的 盼卸功能，短期给予单抗后可取得长期疗效。肿府细胞生长.护增和分化，常要冬科生长因子的持续性剌 澈，而试些生长因子也参与肿疽的僅泗.無移和血管生成.单克隆抗体与其受体结今，可抑制紀体受体的 和互作用.从而使得这些肿凉细胞得不列生长因孑的剌激而 ）行死亡。贝伐单抗通过结合VEGF受体，Fjl 断VEGR与受体的结合，抑制皮细胞增疚或者血管生成

4、，抑制病灶转移【2】。1.2仕号传占作用许多抗癌单抗是通过恢复败应因孑.直接启动传号机制而获得细胞奉效应的。对Trastuzumab t, 单抗结合可诱导一糸刃农肿凉生长抄制中起作用的传号传递.，该抗虑是生长因子受体家族的一个成员，能 提供重要的有丝分聚信号，其单抗似乎能阻新与促进肿凉生长右关的重要的配体一受体柑互作用。仁3总向作用单抗宛向肿痫细胞的祈要目的是严生肿疔苗并性反应场，煞后由免聂糸统中的活化因子将其苗夭。但 现在对体的抗体一效应因子作用机制发杵程度还不请楚，血不请楚能公作用于大量肿凉细胞。2单丸咚抗体誌輛应用现状单抗药杨一般分为：殆疗疾病（尤其是肿痫丿的单抗药刘.抗胛凉单抗傅联杨焙

5、疗其他疾病的单抗。 单抗药刘针对的宛点通常为细胞表面的疾病相关抗虑戎特岌的受体。如:呆早彼美国FDA枇准用子泊 疗肿场的单抗药肠利妥脊单抗。抗肿疳单抗偶联物，或称免疫偶联杨flmmunoconjugatej由单抗与右豹 疗作用的场质（如:放射性核素.春素和药杨寻丿鬲部分构成，其中包朽放射免缓偶联賜.免疫憲素.化 学免疾偶朕物，此外还有砾结合单抗偶朕场.光牧的结仝单抗偶联杨寻旬。化学药肠与单抗扣结合的偶联 杨，作用于病变区城，不但提翥药物的疗败，而且还能除低药场对各脏森组织的细胞舂性。单抗与放射性 同後素的偶联杨，印放射免疫偶联场，其与化学药物连接心一起，起一种玖“眸头”的犯向作用，从而增 强对

6、肿琲细胞的杀伤效应.提壽对肿场细胞的细胞秦性。舂素与单抗的偶联物，免疫春素来源于植场或细 胞舂素由于冇強熬的春性很难作为诒疔利使用，但春素与单抗的偶誤杨可心动物栈世中显示疗效。单抗由于具有诸多优点.在疾病的治疗中发押了重要的作用。在恶性肿殊彩疗方而，无论是单抗为主， 还是单抗躬联放射性杨填.化疗药杨等的免疫治疗，都取得了较好的败系。疫其他疾病（如过牧性疾病. 感染性疾病.炎症性疾病.季倉移植、1身免疫性疾病等丿以沒一些临床上賤难病的诒疗上也取得了新的 进畏.使疾病的治疗有了臾广的选挣性，不冉场限于虑有药杨的焙疗，料别是人源化程度较好的抗体的使 用，己大大减少了幷源性反应。3年抗应用中存农的冋题

7、及解决逢徑单抗药扬的尬床研克结果己喪示出良好的祈景，但仍冇些问題常要进一步研兗鮮决。单抗药賜存疫的问 題主要涉及免疫学和药理学両方面：31免疫学方而同题主要是人抗亂抗体（HAMA）反应。因为多年来用于滋床研克的单抗药场多数使用小紋单抗制备,往往导 致HAMA及应。此外，肿舟细胞群体在抗虑性方面的并质性，可能彩响单抗药物的疗败。Maki Goto寻 研兗发现疫单抗殆疗结直肠癌之询，患者的血请中就冇HAMA相关反应，临床医师A使用抗体詡疗时应该 警惕HAMA表达的可能性。对于免疫学方面的问題.仍有许多需要研兜的地方，现在鮮决的方出一般是降低药杨的免疫虑性，主 要途綾是使氯源性单抗人源化戎研制兜全的

8、人源抗体。单抗人源化主要通过基因工程枝术制备战合抗体戎 改形抗体，後合抗体是将Fc段五换为人源性，其它部分仍为紋源性。敌形抗体是指除互补决定区(CDR)为 氯源性外.其它部分均为人源性。临床研克表朗.炭參抗体的訓反应轻，HAMA反应率较亂港性单抗低， 在血中半哀期也较长。3.2药理呀方面的问题主要是刊达作用部伐的药量不足。单抗药杨具有体分布特异性，但冇研兗痕期，能到达作用部佞的药 杨量仍禺有限。据推算，肿疽俎织的单抗摄取量约为0.005% (注入刘量/克级织)，说明可列达粒部後的药 杨量甚少。单抗药杨A体运送过稅受多科因索影响。由于它是异体蚕自，会彼阿状皮糸统摄取，有相生数 量将欣聚于肝.脾和

9、脅絶。单抗药肠是丸分孑场质，通过毛细血管皮窿以及哮遗肿疔细胞外间穩均受刊限 制。此外.部分傅朕药物分孑质量过大.难于遗过毛细管皮處和哮过肿场细胞外间陳进入肿琦除部帶組. 也是一个急需鮮决的问題。解决方法主要是提离单抗药物在作用部住的浓度。笫一.为提壽药杨在肿疽的农度，单抗药賜分子的小型化是研制的重要逾径。使用抗体片段，如Fab. 玖特异性抗体(bsAbs八 单链可雯区片段(scFvs)制务分子量较小的偶朕物，可能提高对细胞外间陳的穿遗 性，增加列达躱部胛舟细胞的药物量。笫二.采用易部注射。据圾道，Jamerson SC等釆用玻病体注射贝钱单抗，用于治疗假性脑殊，发 现筋庄下降，并且脉络朕新生血

10、管减少。此外，抗血管生成皮生长因孑药杨(anti-VEGF)的玻病体注射广 泛用于活疗年於相关性黄斑病炙(AMD丿和其他疾病的脉络朕新生血管.并且有良好的效剌刃。笫三，利用药物制刘新技术.研丸增加药賜疫作用却後的浓度。抗体药杨也是為于蚕勺类，注射给药 忌,由于肾的遠过.抗体和细胞的识别，以及场理降鮮，使得药賜疫体迅速请除掉。PEG与化合肠相连， 能够增加血请半表期，减少免疫廉性并增加生场利用度。如果杆PEG与抗体或者抗体片段连接，将冇可能 廷长苑肠疫体的循环肘间。近年来.一些研丸人员对scFv, Fab等抗体片段进行PEG化修饰，scFv的PEG 化能PR氏mAbs的免疫虑性.荷化单抗的生广的

11、步躱，PEGscFv共钝杨具冇与mAbs不同的淸除遠率和遼 径10o基于iiA,新的可絆放的PEG化设计可能用于抗体药杨【1讥单抗药杨在体半衰期短.需要重复给药.从而P民制了它的使用，理想的挣放模世是，丸快速粹药，然 后以一个比较施主的速.半也支挣苑。研兗表朗.脂施体具有圾年作用，能侈级侵粹放，延缓肾排世和代. 从而延长作用时间；同对能修降低药杨春性.提爲務岌性，如可提爲胰3素脂质体.疫苗寻的後岌性。脂 质体己经广泛应用于養自多肽类的药场，但旻对单抗的给药糸统研丸很少，目祈报道的有Majid Abrishami 等【用脂质体包耗贝伐单抗，用于玻病体注射给药.与市今制剜相比，使得半哀期延长.曲线

12、下面积是后 者的1.5 同肘也降低了春罰作用。但是.使用脂质体包戟单抗的包封率很低.只冇40%左右.这将成 为脂施体用于单抗给药糸規的一个和颈.需要进一步地探索。4<4抗肿凉单抗药场研丸经历了比较曲折的发展过程。80年代迅濮发展，90年代初期一皮处于低谷，以 至近年冉度成为生场技术药场筑城研兗的热点。单抗药肠研丸的发展竣势具有以下44-A：4.1隼抗的人嫌化及小型化1975年分子生场学彖GF克勒和C.耒金斯坦亦细胞杂交枝术的基础上，创建杂交舟技术，实现了 结构.氣基酸顺序.特异性寻都一欢的单抗CMcAb丿大量地、爲滿度地、均一地生产。这科单克P荃抗体是 用其他方法所不能得刊的.从根本上解

13、决了在抗体制备中长期存心的特异性和可重复性问邈，使得单抗的 亦很多疾病的诊斯和詡疗中，有着不可椁代的优势。但是弟一代单抗（英丈名后缄是：momab,如 lbntumomab,T3situmomab）是亂源的.会引发人体抗鼠单抗免疫反应（HAMA）.引起严重的妥全性问邈， 并限制了单抗的药败。为了丸服这个缺点，人们制备了人紅彼仝单抗（后缄：ximab，如：Cetuximab）。它 旻亂n】Abs的怕走区尿因彼人Abs的恒岌区墓因通过墓因求俎技术所椁换而编码产生的单克隆抗体。这 样阮能保持魚单抗的特性，又阵低了单抗疫人体的免疫反应。这科单抗丸约t 1/3是紅源，仍冇引起潜A 的免疫虑性的可能，因此

14、，人源化的单抗（后缄：zumab.如：trastuzumab, matuzumab）发展起来。人源 化单抗大概令有10%的紅可变区片段，血能诱导免疫虑性，但是并不会兜全地排除。为了能使单克隆抗体 大量的应用于疾病治疗.临床试殓和科研中.我们不仅要降低其免欢虑性，还要对其桌和力.质量.詡疗 能力強弱孑方面提更壽的要求。目询.研克人员己建立多科方法生产兜全人源性抗体（?&: -mumab, o：panitumumab, zalutumumab）,主要有噬苗体展示技术.转晟因小亂枝术和核競体喪示技术少。这科 兜全人源化的单抗具冇亲小的免爰虑性戎者根本没有免缓虑性【。近年来，随着抗体晟因结构的

15、闺朗，DNA重级及转晟因枝术开始用于抗体的«tit，抗体的研发进入了 弟3代，即晟因工程抗体肘代，如人源化抗体、单链抗体、抗体片段（包桔抗虑结合片浙（Fab人 可变区 片段（Fv）.单链可支区片段（ScFv）.小分子抗体、禁些特珠类空抗体（玖特异抗体.免疫脂施体丿及抗体 竝合蛋勺（免痰春素.免哎粘连素丿寻。与笫2代单抗相比，基因工程抗体免疫虑性低.特异性翥.哮遗 力强，并且可以丸量痕达，大大降低了生产成本【。4.2信联杨分子的小愛化及修饰疣丸的偶联分子难以通过毛细管皮屋和细胞歼间陳列达卖体疽滦部的肿韦细胞。因此，研制小型化 单抗药肠对提离疗败有重要克义。通过酶切方法可得到单抗（Fab

16、）2或Fab片段,其相对分子质量分别相 古于斥抗体的2/3和1/3左右。通过恋因工程技术制备的Fv片段或单链抗体scFv,扣对分子加量约相生 于抗体的1/6。研丸表朗，Fab片段较易哮遗细胞外间陳刊达逮部的肿痫细胞"】。使用上述小世化抗体制成的单抗药杨,A药代动力学方而将具有新特点.并可能减少或推迟人体的抗体 反应。分孑的小世化无融是研制离数单抗药杨的一条重要涂径。4.3 4找新的屯点目疫临床应用和己进入临床忒验阶段的单克隆抗体抗肿凉药，根堀其作用抱伐不同彼分成7类， 分别为人类表皮生长因子受体CHuma n epidermal growth factor receptor, HER

17、八 细胞分化抗虑（Cluster of differentiation, CD丿 20.血管皮生长因子 fVascular endothelial growth factor, VEGF） /VEGF 受体 CVEGFRJ.胰岛素样生长激素 I 受体 rinsu（in4ike growth factor- I receptor, IGF- I RJ.河亡增强孑、 整合素.细胞生长因子受体（c-Met；寻。其中，针对HER受体.CD20和VEGF/VEGFR的这3类单克隆 抗体己有药物彼枇浪疫临廉正些应用.另外4类也冇药杨彼妣准进入临床试睑阶段，主要用于空体疽和血 液糸疣恶性肿疳的治疗1

18、4;。墓因序列库和细胞传号的广泛研克，为抗体宛向殆疗灵供了许多新的枪点，尤其在胛疽詡疗的应用中。 单抗对相应的抗虑具冇离度特异性，这是单抗药杨显承紀向性抗肿凉作用的基础。寻求与肿疳细胞相关的耙 点是研制单抗药扬的关键。特定的癌基因表达養自.生长因孑受体等均可作为单抗药杨的分孑鞄点。例如， TRAIL受体和CEA,这而个粒点很冇可能成为未来抗体药研兗的重点。肿瑜 坏死因子凋亡相关请导配体受体（Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor, TRAIL-RZ对一些肿痫俎织细胞表达水平较壽，一型该受体彼激活，可通过天

19、冬気馥柠异性的 丰胱気酸養勺水解聲（Caspase丿诱导肿疳细胞河亡，使肿疳缩小。另外，受体的激活还能增强细胞春性 抗肿场药的作用。因此.以TRAIL-R通过单克隆抗体激活.可起列抗肿痫作用。tl<>正亦开发的此类单丸隆抗体抗肿凉药有Mapatumumab和Conatumumab19o術者是TRAIL-1R激动药，后者是 TRAIL-5R激动药。TRAIL受体是相对比较新的研克枪点，癌展抗虑fcarcinoembryonic antigen, CEA）是黃早研克的抗体 宛点之一.是很多癌症细胞的标志杨.但是并没冇彼癌症生杨学广泛研丸。但是Stanners *【20人心2006 年提

20、出了 CEA淮.肿疔形成中的主导地住，以及与肿琦形成相关的CEACAM6蛋自，使用单价Fab抗体片段 结合CEA的特幷性亚域，细胞站附功能认抑制，CEA的肌分化阻瘪弟二功能彼释放。可以预測，CEA即将 成为一科很冇研丸術景的抗体治疗的新宛点。4.4开发阜统新的用途单抗广泛地应用子生肠界和医学界，目询其主要用于以下几方面：1作为奈合屋析的配体；2作为生 杨治疗的导向武森；3作为免疫抑制剖；4作为研克工作中的探针；5增强抗虑的免慶廉性；6作为医学 检脸洪利：（1）诊斷冬类病虑体。这是单抗应用呆多的领城.己冇大量诊断试剖商吕供选择。如用于诊浙乙 肝病畚.丙肝病春.疱痊病春.旦细胞病春等。单抗所具有的

21、灵牧皮离.特异性好的特点，後其心墨别苗 种的禮及亚型.病奉变幷株，以及寺生衣不同生活周期的抗廉性等方而更具独特优Nalbantsoy A等0 将抗D7单抗用于沙门Q苗引起的肠炎的诊斷。（2）肿场持异性抗虑和肿舟相关抗虑的检測。用于肿殊的诊 断.分型及遂位。尽管目询向未制务出肿疔特异性抗虑的单抗，但对肿疔相关抗廉（如甲胎養勺.肿疔威性 妥自和癌M抗廉）的单抗早就用于滋廉检睑。综上所述，随舟研兗的逮入，单抗印将A科研，医药寻领威占 有举足轻重的地伐。多考丈秋1 红，段黏 单克隆抗体殆疔肿冷的硏丸进衆J中61#兜药学杂志2006, 26(11): 140714092 Napoleone Ferrar

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