生物化学实验1-糖类的性质实验

1、2021/8/141生物化学实验n一、糖类的性质实验 n二、可溶性蛋白质含量的测定 n三、粗脂肪的提取和定量测定 n四、维生素C含量测定 n五、氨基酸的分离与鉴定滤纸层析法n六、蛋白质的性质实验 2021/8/142课程任务n对理论知识的巩固和应用，培养理论联系实际的意识，培养用基础知识分析问题、解决问题的能力n复习巩固实验基本技能，学习新的实验方法和操作技能，学习仪器设备的使用n培养进行科学实验应具备的基本素质：诚实、科学、严谨、探索创新精神、能吃苦耐劳等。2021/8/143纪 律n每批次人员、分组固定，上课准时点名，迟到5min以上者拒绝进入教室n实验室内不得高声闲谈嬉笑，必须保持安静的

2、实验环境。n爱护仪器，不浪费药品，节约水电，遵守实验室的安全措施。n滤纸、火柴棒、碎玻璃等固体废弃物切勿丢入水池内，有毒有害试剂应统一回收入废液桶。n仪器或实验器材如有损坏，应自行登记，并立即向指导老师报告。n 保持实验室的整齐清洁，个人所带与实验无关的东西，不得乱放在实验桌上。n实验室内一切物品，未经实验室负责老师批准严禁带出室外，借物必须办理登记手续。n 每次实验后各小组清洗干净实验器材、打扫本组实验台桌、提每次实验后各小组清洗干净实验器材、打扫本组实验台桌、提交实验记录，老师验收合格后方可离开实验室；每次留下一个大交实验记录，老师验收合格后方可离开实验室；每次留下一个大组负责当天实验室的

3、地面卫生和公用仪器设备整理复位，以及一组负责当天实验室的地面卫生和公用仪器设备整理复位，以及一些其它服务性工作。最后离开实验室时，应检查水、电、门窗等些其它服务性工作。最后离开实验室时，应检查水、电、门窗等是否关好。是否关好。n实验课上禁止播放音乐、禁止玩游戏。实验室禁止饮食和吸烟。2021/8/144实验要求n每次实验前必须详细预习预习实验教材，明了实验目的、原理方法及操作步骤，并在记录本上拟出简单的操作步骤、仪器使用方法及实验操作注意事项。n在实验过程中，要听从老师的指导，严格按照实验步骤进行，不能任意更改，不熟悉的仪器设备，切勿随意乱动不熟悉的仪器设备，切勿随意乱动，应先请老师指导后使用

4、n实验时如有问题发生，应首先用自己学过的知识，独立思考加以解决，努力培养独立分析问题和解决问题的能力，如自己不能解决可与指导老师共同讨论研究，提出解决问题的办法。 n实验进行时，必须随时把观察到的现象和实验数据，如实地记录在记录本上，不得记在散页纸上，要养成良好的做原始记录的习惯养成良好的做原始记录的习惯。n环境和仪器的清洁整齐是搞好实验的重要条件，实验台面试剂药品架上必须保持整洁，仪器药品要井然有序，所用的试剂，用完应立即盖严放回原处。用完应立即盖严放回原处。注意瓶塞切勿张冠李戴。勿使试剂药品洒在实验台面和地上。实验完毕后，实验完毕后，需将药品试剂排列整齐，仪器设备要恢复原状。将实验台面打扫

5、干净，经教需将药品试剂排列整齐，仪器设备要恢复原状。将实验台面打扫干净，经教师验收仪器后，方可离开实验室。师验收仪器后，方可离开实验室。n对实验的内容和安排不合理的地方可提出改进意见对实验中出现的一切反常现象应进行讨论，并大胆提出自己的看法，做到生动活泼，主动地学习。2021/8/145实验记录n实验课前应认真预习，将实验名称、目的和要求、原理、实验内容、操作方法和步骤简单扼要地写在记录本上 n实验中观察到的现象，结果和数据应及时如实地记在记录本上。绝对不可以用单片纸做记录或草稿。原始记录必须准确、简练详尽、清楚。从实验开始就应养成这种良好的习惯。n记录时应做到正确记录实验结果，切勿夹杂主观因

6、素，并根据仪器的精确度准确记录有效数字。重复观测时即使数据完全相同也应如实记录下来 n实验中使用仪器的类型，编号以及试剂的规格、化学式、分子量准确的浓度等，都应记录清楚，以便总结实验时，进行核对和作为查找失败原因的参考依据 2021/8/146实验报告的格式 实验结束后，应及时整理和总结实验结果，写出实验报告，报告的形式可参照下列方式： n实验时间 实验项目名称 实验地点 n一、目的和要求： n二、原理：n三、实验材料及预处理n四、试剂及配制n五、实验仪器：n 六、操作步骤：n七、实验结果(数据记录及处理)： n八、讨论：2021/8/147报告书写总体说明n在实验报告中，目的和要求、原理以及

7、操作步骤部分应简单扼要的叙述。但是，对于实验条件(试剂配制及仪器)和操作的关键环节必须写清楚。n实验结果部分实验结果部分：应根据实验的要求将一定实验条件下获得的实验结果和数据进行整理、归纳，分析和对比，并尽量总结成各种图表，如原始数据及其处理的表格，标准曲线图以及比较实验组与对照实验结果的图表等。另外，还针对实验结果进行必要的说明和分析。n讨论部分：讨论部分：可以包括关于实验方法(或操作技术)的一些问题、实验的正常结果和异常现象以及思考题进行探讨，对于实验设计的认识、体会和建议，对实验课的改进意见等。2021/8/148考核方式n实验操作占35%，实验报告占60%，考勤占5%n操作分主要根据预

8、习记录和实验过程记录，结合课堂表现评分2021/8/149实验一 糖类的性质实验 实验目的：实验目的：n了解某些糖类颜色反应的原理n学习用糖的颜色反应鉴别糖类的方法n通过实验手段了解糖的基本性质及还原糖的鉴定方法n为后续课程中有关糖类的知识的学习打下基础；为后续设计行、研究性实验提供定性检测的方法与手段2021/8/1410Molish（紫环）反应原理n糖在浓无机酸作用下脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者与-萘酚生成紫红色物质。n该反应不是糖类的特异性反应（丙酮、甲酸、乳酸、草酸和葡萄糖醛酸 ）n对葡萄糖的检出极限可达0.001，对蔗糖的检出极限可达0.0001。2021/8/1411Molish

9、反应操作注意事项n添加Molish试剂时切记充分摇匀n加浓硫酸时用移液管沿管壁缓慢加入，切勿摇动n注意观察各管紫色环出现时间的先后、环的宽度、颜色的深浅，并做好记录。2021/8/1412操作方法操作方法n在试管中加入1 mL 样品水溶液，滴入4滴10%的-萘酚乙醇溶液，混合均匀后将试管倾斜约45度，沿管壁慢慢加入1 mL浓硫酸(勿摇动)。此时样品在上层，硫酸在下层、若在两层交界处出现紫色的环，表明样品中含有糖类化合物。2021/8/1413-萘酚反应(Molisch Test)2021/8/1414Seliwanoff（谢里瓦诺夫）反应（间苯二酚反应） n酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者与间苯二

10、酚作用生成红色物质n醛糖在同样条件下反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时才呈微弱的阳性反应2021/8/1415Seliwanoff反应操作要点n注意试剂添加量：糖溶液0.5ml，塞氏试剂1-2ml混匀，同时同时放入沸水浴n注意观察各管颜色变化的时间及颜色的变化过程，并做好记录 塞氏试剂：塞氏试剂： 溶解50mg间苯二酚（resorcinol）于100mL盐酸（盐酸：水=1:2v/v）中 2021/8/14162021/8/1417操作方法操作方法n在试管中加入5滴2% (1滴5%)的样品溶液，再加人10滴(1 mL)间苯二酚盐酸试剂，在沸水浴中加热，记录溶液转变为红色所需要的时间。若溶

11、液在12分钟内变为红色，说明样品为酮糖。否则为醛糖。2021/8/1418还原糖的鉴定原理n糖类分子中的还原性基团在碱性条件下将Cu2+还原成Cu+，生成Cu2O沉淀。n沉淀颜色与沉淀颗粒大小有关，沉淀颗粒大小与反应速度有关：速度慢颗粒大颜色偏红，速度快颗粒小颜色偏黄。n反应速度取决于糖的浓度和还原性的强弱2021/8/1419还原糖鉴定实验操作要点n实验前鉴定试剂有效性：试剂与水1：4，加热煮沸无沉淀方可使用。n先加鉴定试剂后加糖n从沸水浴（2-3min）中同时取出后取出后观察试管中的变化n注意Benedict试剂与Fehling试剂在反应时间和沉淀生成量等方面的区别。 2021/8/142

12、0操作方法操作方法取取FehlingFehling试剂试剂A,BA,B两种溶液各两种溶液各1.0mL1.0mL在试管中混匀，在试管中混匀，再加入再加入4 4滴滴1%1%的样品溶液，在沸水浴中加热的样品溶液，在沸水浴中加热2 23 3分分钟，若有钟，若有红色或黄绿色沉淀红色或黄绿色沉淀生成，表明样品为还原生成，表明样品为还原性糖。性糖。Fehling试剂试剂A,B：试剂A：称取3.5g五水合硫酸铜溶于100mL蒸馏水中。试剂B：称取17g五结晶水酒石酸钾钠溶于20mL热水中，然后加入20mL含5g NaOH 水溶液，稀释到100mL Benedic试剂：试剂：400mL水中加85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠； 50mL加热的水中加入8.5g无水硫酸铜。制成CuSO4溶液；