植物组织中碳水化合物含量的测定Somogyi法

1、测定植物碳水化合物的含量，通常用 80梍85%的酒精抽提，在此浓度的 酒精溶液中，还原糖和蔗糖溶解而淀粉沉淀。过滤后在溶液中测定可溶性 糖（包括还原糖和蔗糖），在残渣中测定淀粉。还原糖可根据其还原能力 大小直接测定其含量。蔗糖和淀粉经水解后生成还原糖， 测得其含量，然 后换算成蔗糖和淀粉。纤维素用称重法，测得经酸、碱和有机溶剂处理过 的样品。I 还原糖含量的测定原理重要反应如下；1 还原糖（如葡萄糖）在碱性溶液中能将 CU2+还原为CU,产生CuO 沉淀。CHO1z O-CH-COONa(CHOH)4 + :J Cu<+O.CH.COOKCH2OhCOOH1HO- CHCOONa一 (C

2、HOh)4+ 21+ Cu20HO.UHCOOK酒石酸钾钠2加酸使KI与KIQ作用，放出丨2来。5KI+KIQ+3HSA312+3KSO+3HO3. 放出的丨2立即与CuO作用。CuO+HSO CuSO+HOCuSG+l 2+KSO2CuS(4+2KI4 .多余的12用Na9O滴定2NaSO+l2 2NI+NSO将结果与空白滴定相比较，即知消耗12量，可间接推算出测定液中还 原糖含量。仪器药品分析天平台天平烘箱水浴锅电动粉碎机容量瓶移液管烧杯三角烧瓶漏斗酒精5%硫酸锌1%酚酞溶液：1g酚酞溶解在100ml95%酉精溶液中。饱和氢氧化钡溶液： 将蒸馏水煮沸， 除去水中二氧化碳， 冷却后加入 固体

3、 Ba(OH)2 盖好，过液，次日过滤。铜碘试剂：溶液A:取硫酸铜6.5g溶于100ml水中溶液B:取酒石酸钾钠12g,无水碳酸钠20g,碳酸氢钠25g溶于500ml 水中。溶液C:取碘酸钾0.8g，碘化钾10g,草酸钾18g溶于200梍300ml 水中。用时将溶液B倒入溶液A中，再倒入溶液C中，混合后稀释至 1000ml，混匀。2.5mol/L H 2SQ:浓硫酸143ml加入水中，稀释成1000ml。淀粉指示剂：1g淀粉溶解在100ml水中，加热使之溶解即可。0.005mol/L 硫代硫酸钠标准溶液：参照实验 39。操作步骤1 抽提将采回的植物样品，分开部位，迅速放在 60C烘箱中烘干至恒

4、重。 剪碎后，放入电动粉碎机中粉碎。用电动分析天平分别称取样品1g，放入250ml三角烧瓶中，加入80%酉精50ml，放在70C水浴锅中抽提3小 时，将上清液过滤(瓶内残渣不要过滤出来)，再往残渣内倒入80%酒精20ml，继续抽提3小时，过滤。如此提取35次，合并所有滤液，定容 至500ml。最后将残渣烘干，留作分析淀粉用。2澄清(1) 吸取酒精提取液25ml，在水浴锅上蒸干。若溶液有酸性，可先用 固体碳酸钠中和，以免酸对蔗糖的分解。(2) 蒸干后加入少量水，边搅边加入 Ba(0H)2 10ml (用量根据不同 样品而定，如叶含色素多需用 7 8ml，含色素少的可用67ml)。(3) 沉淀完全

5、后，加入1滴酚酞指示剂，边搅边滴入ZnSO溶液，以沉 淀钡盐，滴至红色褪去，再滴 Ba(OH)溶液，恢复淡红色为终点。(4) 过滤并用蒸馏水洗涤沉淀，将滤液放入 50ml容量瓶中释至刻度， 使可测定还原糖和蔗糖含量。3 测定(1) 吸取糖液5ml (含糖在0.3 2.0mg)，若糖液太浓可少吸些样品， 用水补足5ml，放入大试管或小烧杯中。(2) 加入铜碘试剂5ml，用量必须十分准确。(3) 盖以表面皿，置沸水中保持100C 15分钟。(4) 取出放入30T水浴中，杯内温度与水浴温度相一致时为止。加入 2.5mol/L H 2S01ml盖好，放置2分钟，使沉淀物完全溶解，用水将盖上 的碘冲洗下

6、来。(5) 用0.005mol/L Na9O滴定，边滴定边搅拌，滴至淡黄色时，加淀 粉指示剂1ml，再滴至淡蓝色时为终点。(6) 另取蒸馏水及铜碘试剂各5ml，做空白滴定，二者之差，即可由 附表11中查得5ml糖液中的含糖量。假若用20g样品，稀释成500ml， 吸取25ml，澄清后定容至50ml，最后吸取5ml滴定时，查得含糖量需乘 因数1。500 v 50即x 100 = 12 X 1000若用烘干样品则查得含糖量需乘因数10。500 y 50三工X 100 - 102X1000型天岂X兰251020X 1000U蔗糖含量的测定原理由于植物体中有还原糖和非还原糖 （主要是蔗糖，因此要测定蔗

7、糖时， 需先经盐酸水解后， 测定其还原糖含量。 从总可溶性糖含量减去还原糖含 量即为蔗糖含量。药品5mol/L NaOH比重1.103的HCI :取浓盐酸528ml，加水稀释成1000ml操作步骤吸取清洁后的可溶性糖液10ml，放入25ml容量瓶中，加入比重 1.103HCI2mI，煮沸5分钟，使之转化成还原糖后用 5mol/L NaOH溶液中 和，用酚酞为指示剂加至淡红色为止。中和后用水稀释至刻度，吸取 5ml 测定其总可溶性糖含量。蔗糖量 =于蔗糖水解时吸收了 1 分子水0.95式中系数 0.95是由所以由附表 11 查得含糖量乘以 2.5 即得总可溶性糖含量。若用烘干 样品2g，则因素为

8、25。川淀粉含量的测定原理淀粉用酸水解转化成葡萄糖后， 测定其葡萄糖含量。 根据葡萄糖含量 换算成淀粉含量。(CeH。) n+nn(C6Hi2O)药品2%HC溶液5mol/L NaO H 溶液操作步骤取酒精抽提后的残渣0.5g，放入三角烧瓶中，加2%HCI25mJ盖上, 在沸水浴锅中沸腾3.5小时，用5mol/L NaOF中和，再依照测定还原糖的 方法加入清洁剂，过滤，稀释至 250ml。吸取5ml测量定其还原糖含量。葡萄糖含量x 0.9=粗淀粉含量式中系数0.9是由于淀粉（C6HoO） n水解时吸收了 n个分子水。W粗纤维含量的测定原理测定粗纤维是用硫酸、 碱、乙醇和乙醚相继处理样品。 硫酸

9、水解某些 不溶解的碳水化合物 （如淀粉和部分半纤维素） 成为单糖。 碱能使蛋白质 转变成可溶态并除去脂肪及溶解不能被酸溶解的半纤维素和某些木素。 酒 精和乙醚能抽出树脂、单宁和色素及剩余的脂肪与部分蛋白质。药品70 85%乙醚1.25%硫酸溶液：取比重 1.84 的浓硫酸 13ml 加水稀释至 1L。1.25%氢氧化钠：15g氢氧化钠溶解在1L蒸馏水中，然后用标定其准 确浓度，计算再应加蒸馏水量，使其浓度准确为 1.25%。操作步骤1. 将磨碎的样品1 3g,装入已知重量的称量瓶中，在分析天平上 准确称重， 无损失地倒入三角烧瓶里。 如为新鲜样品， 须取同样的样品测 定水分。此外，再于已知重量

10、的称量瓶中烘干滤纸。注意温度不要过高， 一般在8090C,防止滤纸烘焦影响重量。2. 在烧瓶外壁上， 相当 200ml 溶量处， 用玻璃铅笔或纸条作一记号， 然后将200ml1.25%的硫酸倒入瓶中，加热至沸腾时再继续 30分钟，加热 时防止激烈沸腾， 应经常搅拌。 每 5 分钟要向瓶内倒入沸水， 使其内容物 达到记号，以保持酸的浓度不变。3. 煮沸之后，用带有已知重量的滤纸漏斗过滤，并用热蒸馏水冲洗 烧杯及漏斗 34 次，直至滤液用石蕊试纸试验呈中性反应为止。4. 用 1.25%氢氧化钠溶液将滤纸上的沉淀物完全洗入瓶内，将其加 热至沸腾再继续 30分钟（操作同上）。5. 煮沸后冷却，用原来所用已知重量的滤纸过滤，用蒸馏水