免疫组织化学

1、免疫组织化学免疫组织化学前言前言v免疫组织化学是介于免疫学、组织形态学、化免疫组织化学是介于免疫学、组织形态学、化学、细胞生物学与分子生物学之间的一门新兴学、细胞生物学与分子生物学之间的一门新兴边缘科学。边缘科学。v免疫组织化学的技术和方法已经渗透和应用于免疫组织化学的技术和方法已经渗透和应用于生命科学的许多学科。生命科学的许多学科。v免疫组织化学技术已成为生命科学领域中研究免疫组织化学技术已成为生命科学领域中研究形态、功能和代谢的一种有力形态、功能和代谢的一种有力“工具工具”，是从，是从事生命科学，特别是生物医学科研人员和技术事生命科学，特别是生物医学科研人员和技术人员必须具备的实验技术之一

2、。人员必须具备的实验技术之一。 第一章第一章 绪论绪论 一、免疫组织化学发展简史一、免疫组织化学发展简史 二、免疫组织化学的优点二、免疫组织化学的优点 三、免疫组织化学的应用范畴三、免疫组织化学的应用范畴一、免疫组织化学发展简史一、免疫组织化学发展简史（一）（一） 组织化学的产生组织化学的产生v组织学的发展：组织学的发展： 组织学是研究机体微细结构及其相关功能的组织学是研究机体微细结构及其相关功能的科学，它是以显微镜观察组织切片为基本方科学，它是以显微镜观察组织切片为基本方法的。法的。 英国科学家英国科学家罗伯特罗伯特胡克胡克用自制的光学显微镜用自制的光学显微镜观察软木塞的薄切片，放大后发现一

3、格一格观察软木塞的薄切片，放大后发现一格一格的小空间，就以英文的的小空间，就以英文的cell命名，这成为应命名，这成为应用显微镜研究生物体的开始。用显微镜研究生物体的开始。 罗伯特罗伯特胡克胡克 Robert Hooke (16351703) v组织化学的产生及发展：组织化学的产生及发展： 十九世纪，显微镜十九世纪，显微镜+化学技术化学技术观察组织中化学反应，研究组织细胞的微细结构观察组织中化学反应，研究组织细胞的微细结构与成分，组织化学开始兴起。与成分，组织化学开始兴起。 1826 1826年：年：F.V.RaspailF.V.Raspail介绍了植物花和果受精过程中的介绍了植物花和果受精过

4、程中的碘淀粉反应碘淀粉反应； 1844 1844年：年：A.N.F. MillonA.N.F. Millon叙述了叙述了蛋白质反应蛋白质反应； 1850 1850年：年：R.Frnrohr R.Frnrohr 论述了纤维素的氯锌碘法；论述了纤维素的氯锌碘法； 1867 1867年：年：M. PerlsM. Perls用用普鲁士蓝显示出铁普鲁士蓝显示出铁； 1868 1868年年-1872-1872年：年：KlebsKlebs和和H.Stuve H.Stuve 用愈创木酯酊同脓作用产生蓝色证明组织中用愈创木酯酊同脓作用产生蓝色证明组织中有过氧化物酶的存在；有过氧化物酶的存在；R. Heidenh

5、ain R. Heidenhain 指出核糖核酸是一种嗜硷性物质，可指出核糖核酸是一种嗜硷性物质，可被醋酸沉淀；被醋酸沉淀； 1873 1873年：年：F.Miescher F.Miescher 利用甲绿对核染色质的选择性亲和力，分离出核染色质。利用甲绿对核染色质的选择性亲和力，分离出核染色质。 1885 1885年：年：P.Ehrlich P.Ehrlich 发现了细胞色素氧化酶。发现了细胞色素氧化酶。 1862 1862至至1919世纪末：世纪末：自自A.BenckeA.Bencke将苯氨染料用于组织学领域，许多研究者在组织将苯氨染料用于组织学领域，许多研究者在组织中应用了染色反应。相继各

6、种蛋白质被染色出来，如胶原蛋白染色、脂肪的苏中应用了染色反应。相继各种蛋白质被染色出来，如胶原蛋白染色、脂肪的苏丹丹染色、组织中金属盐类的显色染色、组织中金属盐类的显色v但是，由于化学知识的贫乏和显微镜技术的停滞在一定时期限制了组织化学的但是，由于化学知识的贫乏和显微镜技术的停滞在一定时期限制了组织化学的发展。发展。 （二）组织化学的复兴（二）组织化学的复兴v2020世纪世纪3030年代：年代： 生物化学的发展生物化学的发展+ +电子显微镜技术的应用电子显微镜技术的应用 组织化学的复兴时代。组织化学的复兴时代。v19391939年：年：G.GomoriG.Gomori 检测出碱性磷酸酶的存在，

7、并于检测出碱性磷酸酶的存在，并于19501950年年将检测方法进一步改善，此后，数名学者又在此基础上进行将检测方法进一步改善，此后，数名学者又在此基础上进行改良。改良。酶组织化学酶组织化学v进一步把电镜与酶组织化学结合起来，以金属沉淀法观察了进一步把电镜与酶组织化学结合起来，以金属沉淀法观察了酸性磷酸酶和硷性磷酸酶，奠定了酸性磷酸酶和硷性磷酸酶，奠定了电镜酶组织化学电镜酶组织化学基础。基础。（三）免疫组织化学的产生与发展（三）免疫组织化学的产生与发展 免疫组织化学免疫组织化学=免疫学免疫学 + 组织化学组织化学 免疫组织化学免疫组织化学原理：原理： 利用免疫学的抗原抗体结合，从组织细胞水平进行

8、抗原抗体利用免疫学的抗原抗体结合，从组织细胞水平进行抗原抗体反应反应v1941年：年：荧光抗体法荧光抗体法 以辣根过氧化物酶为标记物对酶进行观察（酶标抗体法）以辣根过氧化物酶为标记物对酶进行观察（酶标抗体法）v1970年：年：发展酶标抗体技术，创立发展酶标抗体技术，创立PAP法；法；v1974年：年：证实组织中浆细胞免疫反应；证实组织中浆细胞免疫反应；v1975年：年：单克隆抗体技术；单克隆抗体技术；v1981年：年： ABC法、免疫金法、免疫金-银法、半抗原标记法、免疫电镜技术银法、半抗原标记法、免疫电镜技术原位杂交技术原位杂交技术免疫组化技术之一免疫组化技术之一 1969年：年：随着分子生

9、物学技术的飞速发展，人们尝试把随着分子生物学技术的飞速发展，人们尝试把分子杂交技术应用到组织切片和细胞标本上，开始探索原分子杂交技术应用到组织切片和细胞标本上，开始探索原位杂交技术。位杂交技术。 到到20世纪世纪90年代：年代：原位杂交技术、分子杂交技术、免疫原位杂交技术、分子杂交技术、免疫化学分类方法迅速发展。化学分类方法迅速发展。 目前应用：目前应用：原位杂交技术已广泛应用于遗传学、病毒学、原位杂交技术已广泛应用于遗传学、病毒学、神经内分泌学、病理学、免疫学和发育生物学等各个领域，神经内分泌学、病理学、免疫学和发育生物学等各个领域，显示出巨大的应用潜力。显示出巨大的应用潜力。 二、免疫组织

10、化学的优点二、免疫组织化学的优点v1、特异性强、特异性强： 抗原与抗体的特异结合抗原与抗体的特异结合 “一对一一对一”的组织细胞中的特定显示。的组织细胞中的特定显示。 eg：角蛋白角蛋白-显示上皮成分；显示上皮成分； 白细胞共同抗原白细胞共同抗原-显示淋巴细胞成分；显示淋巴细胞成分； 组织细胞中存在交叉抗原时组织细胞中存在交叉抗原时-交叉反应。交叉反应。2、敏感性高、敏感性高 抗生物素蛋白抗生物素蛋白生物素过氧化物酶复合物法生物素过氧化物酶复合物法 （ABC法）法） 链霉素抗生素蛋白链霉素抗生素蛋白过氧化物酶连结法过氧化物酶连结法 （SP法）法） 3. 定位准确定位准确v三、免疫组织化学的应用范畴三、免疫组织化学的应用范畴 生物医学领域：生物医学领域： 病理学、生理学、肿瘤学、临床检验学、微生物病理学、生理学、肿瘤学、临床检验学、微生物 学、免疫学、神经生物学、发育生物学、