反相高效液相色谱法测定吸入用异丙托溴铵溶液的含量(精)

1、反相高效液相色谱法测定吸入用异丙托 溴铵溶液的含量（1）】目的：采用反相高效液相色谱法测定吸入用异丙托溴铵溶液的含量。方法：色谱柱为 phenomenex C8 （ 4.6 mmx 250 mm5卩m）,流动相为乙腈0.25%庚烷磺酸钠溶液（29 : 71 ）用磷酸调pH值至3.2 ;检测波长为210 nm；流速为1.0 mL/min ;进样量20卩L。结果：异丙托 溴铵在12.8256卩g/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9995 , 日 间、日内RSD匀小于1.5%。结论：本方法准确可靠，可用于吸入用异丙托溴铵 溶液的质量控制【关键词】 异丙托溴铵；含量测定；高效液相色谱法异丙

2、托溴铵是一种具有抗胆碱能特性的四价铵化合物，可竞争性抑制乙酰胆碱 对气道平滑肌的收缩作用。通过抑制细胞内cGM吐成，减少cAMP降解，降低细胞内钙离子浓度，使气道平滑肌松弛，肥大细胞释放炎性介质下降，终止气 道扩张，呼吸阻力减小。吸入异丙托溴铵后，作用只限于肺部扩张支气管，而 不作用于全身，主采用气雾吸入给药1。吸入用异丙托溴铵溶液在临床上应 用较广泛，主采用压缩雾化吸入或超声雾化吸入给药，常用于预防和治疗儿童 支气管哮喘。本文考察了异丙托溴铵含量的HPLC测定方法，为制剂的质量控制提供了方法学依据。1仪器与材料LC 10ATvp高效液相色谱仪（日本岛津公司）；异丙托溴铵对照品 （购自浙江优联

3、医药化工有限公司，经精制后色谱峰为单峰）；吸入用异丙托 溴铵溶液（爱全乐）购自德国勃林格殷格翰国际公司（批号 638066,规格为含 异丙托溴铵2 mL： 500卩g）；庚烷磺酸钠为离子对色谱试剂，纯度 99%， 购自上海亿日化工科技有限公司；乙腈为色谱纯；其它试剂为分析纯。2含量测定2.1色谱条件参照文献2 4,选定试验条件为：C8色谱柱（phenomenex C85卩m, 4.6 mmx 250 mn）;流动相为乙腈0.25%庚烷磺酸钠溶液（29 : 71） 用磷酸调pH至3.2 ;检测波长为210 nm；流速为1.0 mL/min ;进样量20卩Lo2.2对照品贮备液的制备精密称取在五氧

4、化二磷干燥器中减压干燥 24h的异丙托溴铵对照品12.80 mg，精密称定，置10.0 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇 匀，制成浓度为1.28 mg/mL的异丙托溴铵对照品液，备用。2.3供试品溶液的制备取本品15瓶，合并内容物，混匀，精密量取 10 mL，置50 mL量瓶 中，加0.001 mol/L盐酸溶液 甲醇（1 : 1）稀释至刻度，摇匀，作为供试品 溶液。2.4系统适应性试验取溴化钾适量，用流动相溶液溶解制成溴化钾溶液。精密吸取溴化钾 溶液、“ 2.2 ”、“ 2.3 ”项下溶液适量，分别按“ 2.1 ”项下色谱条件进样测 定，记录色谱图，详见图1。由图1可知，与异丙托溴铵

5、对照品比较，供试品 异丙托溴铵色谱峰分离良好，符合高效液相色谱法的求，且溴离子不影响本品 含量测定。异丙托溴铵的出峰时间约在22 min。2.5最低检测限和最低定量限取异丙托溴铵对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成供试 液，按上述色谱条件取10卩L进样。经试验，当进样浓度为0.3卩g/mL时, 信噪比为3 : 1,即最低检测限为0.3卩g/mLX 10卩L=3 ng ;当进样浓度为 1.1卩g/mL时，信噪比为10 : 1，即最低检测限为1.1卩g/mLX 10卩L=11ngo2.6线性范围考察取对照品储备液，分别精密吸取 0.1、0.2、0.4、0.8、2.0 mL,置10 mL量瓶中

6、，加流动相稀释至刻度，摇匀，得浓度依次为12.8、25.6、51.2、102.4、256卩g/mL的系列标准溶液。照上述色谱条件，进样 20卩L,以样品 浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为：r=0.9995 ，线性范围为 12.8A=5900.864C 16415，256 卩 g/mL。2.7 精密度试验分别取12.8、51.2、2560卩g/mL三种浓度的对照品溶液，于 1 d内 分别进样5次及5 d内分别进样5次，分别计算日内、日间RSD结果见表1。 表 1 精密度试验结果（略）2.8 样品溶液稳定性试验取批号为 638066的样品，按“ 2.3”项下方法制备

7、供试品溶液，在 12 h内每隔3 h进样测定1次，测得RSD为1.30%,表明在12 h内样品溶液稳定 性较好。2.9 重复性试验取批号为 638066的样品，按“ 2 . 3 ”项下方法平行制备 5份供试品溶 液，分别进样，测得RSD为1.03%，表明该法重复性较好。2.10 回收率试验取异丙托溴铵对照品约16 mg、20 mg和24 mg各三份，精密称定，按处方比例加入空白辅料适量，按“ 2.1 ”项下色谱条件进样测定含量，计算回收率，结果见表 2。表 2 回收率试验结果（略）2.11 样品含量测定取批号为 638066样品，按“ 2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测 定，样品含量测定结

8、果为 98.8%。3 讨论异丙托溴铵为溴化季铵盐，在溶液状态下，其溴以离子形式存在 3，在 210 nm 处有一定紫外吸收。为验证该测定方法溴离子的存在不影响 异丙托溴铵的含量测定，故选定溴化钾进行了试验。试验表明，采用该测定方 法，溴离子不干扰异丙托溴铵的含量测定。流动相采用等度洗脱系统，用二极 管阵列检测器测定异丙托溴铵对照品的峰纯度大于 99.8%，表明主峰为单一 峰，在210400 nm波长扫描，未漏检杂质峰。异丙托溴铵浓度在12.8256.0卩g/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。本方法灵敏度高，方法准确，重复性好，且操作简单，可用于吸入用 异丙托溴铵溶液的质量控制。【参考文献】1

9、付笑飞异丙托溴铵的药理基础及临床应用现状J 中华医学杂志, 2005, 29 (02) : 139140+2 Peter JS, Robert WT, Cynthia SG, et al. The separation ofipratropium bromide and its related compoundsJ . J ofPharmaceutical a nd Biomedical A nalysis, 1998， 17: XII S193 汪 洁.吸入液中异丙托溴铵和苯扎氯铵的HPLC测定J.中国医药工业杂志'4 谭生建，张启明，刘刚，等.高效液相色谱法测定复方异维倍克气 雾剂中异丙托溴铵和盐酸克仑特罗的含量J 药物分析杂志，2005, 25(09): 1070 1072.作者：卢