试验诊断学---临床常用免疫学检查

1、临床常用免疫学检查Immunological tests免疫功能检查(immunological function)血清免疫球蛋白检测血清补体检测 细胞免疫检测(immunoglobulin, complements, cell immune)自身免疫检测 (auto-antibodies)类风湿因子测定抗核抗体检测组织和细胞抗体检测(RF ANA other antibodies)感染免疫检测(infectious immunology)细菌感染免疫检测病毒感染免疫检测 其它(寄生虫感染、性病等)(bacterial, virus and so on )肿瘤标志物检测 (tumor mark

2、ers)蛋白质类肿瘤标志物 糖脂类肿瘤标志物酶类肿瘤标志物(proteins, glycolipid, enzymes markers)器官与骨髓移植的检测(organ and bone marrow transplantation)病毒肝炎血清标志物(virus hepatitis markers)其它循环免疫复合物检测、冷球蛋白检测、丙种反应性蛋白检测1、免疫功能检查(immunological function)一、血清免疫球蛋白检测 (Immunoglobulin test)1、Immunoglobulin1) 概念：具有抗体活性和抗体样结构的球蛋白，由浆细胞产生，存在于体液，血液，外

3、分泌液和一些细胞膜上2) 分类：用超速离心、免疫电泳方法可将免疫球蛋白分为五类：IgG、IgA、IgM、 IgD 、 IgEIgG最多、占75%85%抗体活性IgA血清型和分泌型两种IgM是有效的凝聚和溶解细胞的因子。最早；最先IgD功能尚不完全清楚IgE与变态反应有关(0.002%)3 )功能：2、normal range :免疫比浊法、 ELISA 法多克隆(Polyclonal)增高：IgG IgA IgM 均增高单克隆(Monoclonal)增高：仅某一种Ig增高而其他种不增高3、增高【临床意义】增高：多克隆性增高 (polyclonal elevate)慢性感染、慢性肝病、自身免疫性

4、疾病(chronic infection, chronic hepatitis, AID)单克隆性增高(monoclonal elevate)免疫增殖性疾病(proliferative disease)IgG：感染性疾病、自身免疫性疾病IgA :黏膜炎症、在皮肤病变IgM :毒血症、感染性疾病早期4、M 蛋白(Monoclonal protein)1) 概念：单克隆B淋巴细胞异常增殖产生免疫球蛋白，具有相同结构和电泳迁徙速度，但不具有抗体活性。2) M蛋白【临床意义】减低：先天性(congenital)体液免疫缺陷和联合免疫缺陷(先天性无(低)丙种球蛋白血症等)获得性(acquired)肾病综

5、合征(大量流失蛋白)、淋巴网状系统肿瘤、病毒感染、免疫抑制剂应用immunological function二、血清补体检测 (Complements)1、血清补体(complement,。)组成：由传统途径的 9种成分cl (c1q、c1r、cis ) c9，旁路途径的3种成分及其衍生物 B、D、 P、H、I等因子组成。作用：参与灭活病原体的免疫反应，也可破坏自身组织或自身细胞造成免疫损伤2、total hemolytic complement activity - CH 50正常值：50100 ku/L【临床意义】：减低一1.先天性2, 合成减少hepatitis ,营养不良3. 消耗或者

6、丢失过多SLE增高一急性炎症、组织损伤、某些肿瘤等。3、补体C3检测C3在补体系统各成分中含量最多，是传统途径和旁路途径被激活的关键物质。正常值：0.851.7g/L 补体C4检测C4代表补体传统活化途径，在补体活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和病毒等方面发挥作用。正常值：0.220.34g/L 【临床意义】参见CH5。减低和增高的临床意义C3增高在急性炎性反应更敏感C4对判断免疫复合物形成时补体消耗性减低更有意义三、细胞免疫检测 (Cell immune)1、T细胞分化抗原测定(免疫荧光法；流式细胞)CD3一总T细胞正常值：69.4% + 4.86%CD4 T 辅助细胞(Th)正常值：

7、41.17% + 5.28%CD8 T 抑制细胞(Ts)正常值：24.58% + 4.02%CD4 /CD8 2.2+ 0.7/1【临床意义】：CD4降低 病毒感染(CMV,HIV,HBV)CD" CD8增高一恶性肿瘤、自身免疫性疾病、变态反应、排异反应CD" CD8减低一见于艾滋病(HIV)、恶性肿瘤、传单及乙肝急性期。CD3 CD4 CD8均增高一T细胞型淋巴细胞恶性疾病 (T lymphocytes malignant disease)2、B细胞分化抗原测定 应用CD19、CD20、CD22等单克隆抗体标记单个核细胞？B细胞，通过免疫荧光或流式细胞技术进行检测；参考值

8、(reference): CD19 11.74 + 3.73% 【临床意义】：升高-B细胞型急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、Burkitt淋巴瘤等减低-无丙种球蛋白血症、免疫抑制剂应用3、自然杀伤细胞免疫检测 自然杀伤细胞(NK)介导天然免疫应答，它不依赖抗体和补体即能杀伤靶细胞 自然杀伤细胞活性可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标之一4、细胞因子检测细胞因子(cytokine)是由活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌的，介导和调节免疫、炎症反应的小分子多肽。IL-2、IL-6、IL-8、IL-10 和 TNF、IFNn、自身免疫检测1、类风湿因子测定 RA rheumatoid fa

9、ctor,RF概念：RF是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液内。分型：可分为IgM型、IgG型、IgA型等，用胶乳凝集法测出的主要是IgM型，速率散射比浊检测准确定量分析，用 ELISA法可检出其它型。 双抗体夹心法：RF-IgG - RF-IgA - RF-IgM参考值：阴性 <30 U/L 【临床意义】：1、类风湿关节炎(RA)(阳性率79.6%);与疾病活动有关2、其它自身免疫性疾病(SLE、SS等)3、慢性肝病、慢性感染性疾病4、健康人3%至5%阳性 RF分型意义IgG :与滑膜炎、血管炎、关节症状有关；滑液中 IgG更具病理意义Ig

10、A :与关节症状严重程度与骨质破坏相关IgM :血清中高滴度提示预后不良2、抗核抗体检测ANA 抗核抗体(antinuclear antibody,ANA )抗核抗体是泛指抗各种细胞核成分的自身抗体的总称( ANA s),这种抗体无器官和种族的特异性。 Immunofluorescence assay以鼠肝细胞核或人喉癌细胞(Hep-2细胞)作抗原时该抗体(1抗)可与之结合，再加入荧光标记抗人IgG ( 2抗)后可产生黄绿色荧光。间接免疫荧光检测根据细胞核着染荧光的图像可分为：均质型(diffused) DNP核蛋白-抗DNP, 抗组蛋白抗体，抗 DsDNA核膜型(spherical) DNA

11、-DsDNA斑点型(speckled) ENA -抗核糖体核蛋白颗粒核仁型(nucleolus ) RNA-RNA参考值：免疫荧光法为阴性血清滴度>1: 100为阳性 【临床意义】：(1) 、ANA阳性最多见于未治疗的SLE，阳性率达80% 100% (活动期几乎100%阳性)(2) 、ANA阳性是结缔组织病的标志，是SLE最佳筛选试验。(3) 、其它疾病，如原发性胆汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis)、慢性肝病、慢性感染、肿瘤等也可出现阳性 ANA荧光图形临床意义高低度均质性-SLE高低度核膜型-SLE (活动)高低度斑点型-MCTD高低度核仁型-S S C

12、2.抗脱氧核糖核酸抗体(anti-DNA antibody )其中抗双链 DNA (double stranded-DNA,ds-DNA )抗体的靶抗原是细胞核中的DNA双螺旋结构，识别双碱基对的DNA。正常结果：阴性【临床意义】：1. 为 SLE 特异性抗体(Specific antibody for SLE)，特异性率 95%?a100%;敏感性 30-50%。2. 与活动程度相关3. 特别在并发狼疮性肾炎时起重要作用。4. 其它风湿病中抗ds-DNA抗体也可阳性。3. 可提取性核抗原多肽抗体谱ENA (extractable antinuclear antigen)由多种相对分子质量不同

13、的多肽构成，利用免疫印迹试验可对这些抗原的自身抗体进行检测, 目前已经发现20余种。ENA抗体谱抗体靶抗原意义方法SmRNA和核蛋白SLE标记抗体，阳性3 040%双向免疫扩散U1RNP小核糖核蛋白MCTD 阳性 >90%;SLE、SS、SSc、PM/DMDID;EIASSA(Ro)小细胞质核糖核蛋白PSS 40 95%;SCLE 70 90%DID;EIASSB(La)小细胞核核糖核蛋白SS高度特异性DID;EIArRNP60S核糖体大亚基SLE高度特异性抗体，阳性 1040%。 与脑病有关。EIAScl-70拓扑异构酶1SSc特异性抗体，预后不良。EIAJo-1tRNA合成酶PM/D

14、M 标记抗体2030%DID, IBSSSSCScl-70皮肤色素沉着和脱色面部毛细血管扩张皮肤钙化PM/DMJo-1特征性皮肌炎皮疹：掌指关节和近端指间关节伸侧出现萎缩性丘疹和斑疹，伴少量鳞屑，称 Gottron征4、组织和细胞抗体检测抗线粒体抗体(anti-mitochondria antibody,AMA )抗甲状腺球蛋白抗体(anti-thyroglobulin antibody,TG )抗甲状腺微粒体抗体(anti-thyroid mivrosome ntibody,TM )抗平滑肌抗体(antismooth muscle antibidy,ASMA )等如AMA、ASMA在原发性胆

15、汁性肝硬化、慢性肝病、自身免疫性肝炎中常为阳性m、感染免疫检测(一) 血清抗链球菌溶血素O" ( anti-streptolysin O”, ASO)A组溶血性链球菌的荚膜抗原代谢产物一链球菌溶血素O”具有溶血活性，能溶解人类和一些动物的红细胞。将受检病人血清倍比稀释后，加入一定量的链球菌溶血素O”，如病人血清中含有抗体(ASO)，即能使链球菌溶血素O”失去溶血能力，不溶血的管数越多表示ASO的效价越高。参考值：胶乳凝集法为阴性<100IU/L【临床意义】：当机体受A组溶血性链球菌感染后 23周，血清中即出现抗链球菌溶血素“ 。"的抗体，这种抗体滴度直至病愈后数月到半

16、年才 下降至正常水平ASO升高常见于活动性风湿热、风湿性关节炎、急性肾小球肾炎等假阳性见于高胆固醇血症、黄疸、溶血等(二) 伤寒和副伤寒 Typhoid and paratyphoid沙门菌免疫测定-肥达反应(Widal reactin WR )人体被伤寒沙门菌感染后，菌体“O抗原和鞭毛“H抗原能刺激人体产生相应抗体。副伤寒杆菌分甲、乙、丙三型参考值：伤寒 WR"H' <1 : 160; “O' <1 80;副伤寒 WR甲、乙、丙均 <1 : 80Rose rash【临床意义】：当感染伤寒沙门菌后一周可出现阳性，第二周阳性率上升为60% ?a70%，

17、第四周可达90%以上，动态观察 WR持续超过参考值，或较原效价升高4倍以上更有价值假阳性？2结核病、风湿病假阴性一早期使用抗生素及免疫抑制剂治疗W、肿瘤标志物检测 (tumor marker)肿瘤细胞分泌的标志物：蛋白质类、糖脂类、酶类、激素类等宿主产生的标志物：TNF、SF不进入循环体液的标志物： 临床常用肿瘤标志物:1. AFP胎儿早期肝脏和卵黄囊合成的血清糖蛋白，当肝细胞或生殖腺胚胎细胞恶变，基因激活，细胞合成AFP增加。参考值：v 20ng/ml【意义】：1 ：原发性肝癌的诊断与鉴别诊断，10%阴性。2:生殖腺胚胎癌、胃癌、胰腺癌可升高。3 :动态检测原发性肝癌治疗前后病情变化4:孕妇

18、可升高2. CEA胎儿早期消化管和一些组织合成，孕 6月后减少，出生后极低。生理上孕妇可升高。参考值：v 15ng/ml【意义】：1 : 90%胰腺癌、74%结肠癌、60%乳腺癌、肺癌等常明显升高。2:某些良性肿瘤和良性病变：直肠息肉；胰腺炎、结肠炎、肝脏疾病、哮喘可轻度升高。3:动态观察，判断恶性肿瘤的预后；疾病活动f好转I4:其他体液V、其它免疫检测(一) 循环免疫复合物(circulating imunocomplex,CIC )体内游离抗原与相应的抗体形成抗原抗体复合物，其中分子量小的复合物(<19S)可在血循环中被检测CIC增高一见于自身免疫病(AID)、感染(infection)