培养基的制备和高压蒸汽灭菌ppt课件

1、培育基的制备培育基的制备和高压蒸汽灭菌和高压蒸汽灭菌2019.11目的与要求目的与要求n1、了解培育基的配制原理，掌握制备培育基的过程。n2、学习高压蒸汽灭菌操作技术。n3、初步掌握划线和涂布平板的技术。n4、了解抗生素对细菌的抑制造用。配培育基配培育基灭菌、倒平板灭菌、倒平板划线、涂布平板划线、涂布平板抑菌圈实验抑菌圈实验实验流程实验流程任何培育基一旦配成，必需立刻进展灭菌处置任何培育基一旦配成，必需立刻进展灭菌处置培育基培育基培育基培育基medium)：由人工配制的适宜微生物生：由人工配制的适宜微生物生长、繁衍或适宜积累代谢产物的营养基质。长、繁衍或适宜积累代谢产物的营养基质。 在微生物学

2、研讨和生长实际中，配置适宜的培育在微生物学研讨和生长实际中，配置适宜的培育基是一项最根本的要求。基是一项最根本的要求。培育基按化学成分来分类按物理形状来分类按功能进展分类天然培育基合成培育基半合成培育基固体培育基液体培育基半固体培育基脱水培育基根底本培育基营养加富培育基完全培育基选择培育基鉴别培育基培育基的配制过程培育基的配制过程v计算用量:200ml固体培育基v称量：托盘天平v溶解：自来水v调pH：自然pHv灭菌：v普通培育基， 121 0C, 15-30min：20min；v含糖培育基： 112 0C, 15-30min；v易产生沉淀的物质：分别灭菌后再混合v倒平板3g/L 牛肉膏10g/

3、L 蛋白胨5g/L NaCl2% 琼脂粉灭菌灭菌灭菌灭菌Sterilization是指利用物理、化学等是指利用物理、化学等手段杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢手段杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子的过程。子的过程。灭菌方法化学药品灭菌辐射灭菌过滤除菌加热法干热灭菌湿热灭菌火焰灼烧热空气灭菌煮沸消毒法常压蒸汽灭菌法高压蒸汽法高压蒸汽法高压蒸汽灭菌锅的构造高压蒸汽灭菌锅的构造高压蒸汽灭菌锅的运用高压蒸汽灭菌锅的运用待灭菌物品的包扎待灭菌物品的包扎装锅、加水装锅、加水加盖加盖 对角线均匀拧旋对角线均匀拧旋升温、排气放大气升温、排气放大气5min恒温恒温切断电源、冷却切断电源、冷却开锅取物开锅取物12

4、120min倒平板倒平板u 融化的琼脂培育基融化的琼脂培育基,冷却至冷却至50左右左右(以手背能忍受以手背能忍受的温度为准的温度为准)平板划线的根本程序平板划线的根本程序灭菌接种环灭菌接种环沾取菌液沾取菌液接种接种灭菌接种环灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境延续划线法延续划线法灭菌过的移液管灭菌过的移液管汲取菌液汲取菌液0.1ml滴在培育皿中央滴在培育皿中央用灭菌的涂布棒均匀涂布：用灭菌的涂布棒均匀涂布：将菌悬液先沿一条直线悄然地来回推进将菌悬液先沿一条直线悄然地来回推进,使之分布均

5、匀，使之分布均匀，然后改动方向沿另一垂直来回推进，平板内边缘处可改动方向用然后改动方向沿另一垂直来回推进，平板内边缘处可改动方向用三角玻扒再涂布几次。三角玻扒再涂布几次。三角铁扒三角铁扒平板涂布的根本程序平板涂布的根本程序涂布好的平板涂布好的平板滤纸片滤纸片抑菌圈实验抑菌圈实验青霉素青霉素每组4人n需求灭菌的东西：需求灭菌的东西：n固体培育基固体培育基200ml2g蛋白胨，蛋白胨，0.6g牛肉膏，牛肉膏，1gNaCl，4g琼脂，自来水琼脂，自来水200ml，自然，自然pHn培育皿培育皿10个每人倒平板两个，一个个每人倒平板两个，一个划线，一个涂布；涂布的那个用于抑划线，一个涂布；涂布的那个用于

6、抑菌圈实验菌圈实验n1ml移液管移液管4支支(每人每人1支支n滤纸片，每人两片，每组需剪滤纸片，每人两片，每组需剪10片，片，装入培育皿中灭菌装入培育皿中灭菌思索题思索题n1、总结一下，配制培育基应留意哪些、总结一下，配制培育基应留意哪些问题。问题。n2、高压灭菌的关键是什么？、高压灭菌的关键是什么？n3、参与青霉素滤纸的涂布平板终究会、参与青霉素滤纸的涂布平板终究会产生什么样的效果，为什么？产生什么样的效果，为什么？n1参与适量自来水于灭菌锅中至水位线。参与适量自来水于灭菌锅中至水位线。n2放入需求灭菌的东西。放入需求灭菌的东西。n留意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。留意：不要摆

7、得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。n3加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气对角线均匀拧旋加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气对角线均匀拧旋n4翻开放气阀，翻开电源，自开场产生大气后翻开放气阀，翻开电源，自开场产生大气后5分钟此时蒸汽锅分钟此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽，关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而内的冷空气由排气阀排尽，关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时即温度上升到上升，当达所需压力时即温度上升到121，控制热源维持所需时，控制热源维持所需时间间20分钟，然后停顿加热，让其自然冷却。分钟，然后停顿加热，让其自然冷却。n留意：运用此法灭菌能否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必留意：运用此法灭菌能否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必需将锅内的冷空气完全排尽。需将锅内的冷空气完全排尽。n5待压力降至待压力降至0磅时，翻开排气阀，再翻开锅盖，取出灭菌物。磅时，翻开排气阀，再翻开锅